土五加药材质量控制标准研究

王彬1，谢少芳2，李小平1，张一云1

王彬1，谢少芳2，李小平1，张一云1

1海南省药物研究所，海口571100；

2海南凯健制药有限公司，海口570125

基金项目：海南省科技厅中药现代化专项项目资助（2012ZY005）

通讯作者：王彬

【摘要】目的：建立土五加药材质量控制标准方法：采用显微鉴定、薄层鉴定方法对药材进行鉴别，通过流体萃取技术、药材澄清技术、中药分离工艺、照薄层色谱法以及在人员选择、设备选择、中药材样本选择方面控制药材的提取质量。结果：经过层层把关的土五加药材，提取工艺药材质量控制良好，可以适用于临床应用。结论：土五加药材质量得到明显提升，产量提高。

【关键词】土五加药材、质量控制、流体萃取技术、药材澄清技术、中药分离工艺、照薄层色谱法

土五加又称亚婆潮，为茜草科植物广花耳草HedyotisamplifloraHance的藤茎，在海南省及广东部分地区有用其代替五加科植物细柱五加AcanthopanaxgracilistylusW.W．Smith的根皮即五加皮入药的习惯，是一种地方性用药。本品具有祛风湿、强筋骨、理跌打之功效；主治风寒湿痹，腰腿酸痛，筋骨无力等。目前国家尚未制定土五加的质量控制标准，本文将对其质量监控方法进行研究，并按照药典规范要求对药材标准通则内的特性制定标准。

1材料与仪器

1.1仪器紫外光灯(上海顾村电器厂)；硅胶G板(青岛海洋化工厂)、DZF-6050真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）；METTLERXS205DU电子分析天平(METTLERXS205DU，瑞士)；TC-15套式恒温器（海宁市新华医疗器械厂）

1.2试药土五加药材分别采自海南省五指山区、陵水县及保亭县，由本所中药研究室鉴定；水合氯醛试剂（国药集团化学试剂有限公司）；95%乙醇（天津致远化学试剂有限公司）；乙酸（西陇化工股份有限公司）；甘油（广州化学试剂厂）。

2方法与结果

2.1药材性状

本品为藤茎，细长圆柱形，略弯曲，少分枝，直径0.5～3.0cm。表面淡棕黄色，多纵皱纹和横向深裂，具弹性，体轻，质坚韧，不易折断，折断时皮部易与木部分离。断面皮部呈棕褐色，木部浅黄白色，木质部维管柬环状排列成花瓣状，密布针眼状的小孔(导管)，髓部类白色，气微，昧淡。见图。

2.2显微鉴别

茎横切面：木栓层8~25层，由扁长方形细胞组成，皮层狭窄，细胞呈多角形。韧皮部与皮部界限不清，细胞大多挤压变形，木质部细胞均木化，导管类圆形，木纤维类方形，射线由数列细胞组成，细胞呈类长方形，部分已破裂或成裂隙。髓部有薄壁细胞中含草酸钙结晶。

粉末呈类黄色：导管多呈碎片，为螺纹或具缘纹孔导管。薄壁细胞中含大量草酸钙针晶束。草酸钙簇晶排列成行或散在。髓部细胞长椭圆形，壁略加厚，具明显纹孔。木纤维细长，单个散在或成束。韧皮纤维壁增厚，具明显胞腔。可见多细胞非腺毛。

2..3TLC鉴别

取本品粉末1.0g，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液。另取土五加对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10微升，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-石油醚（Ⅱ）-冰醋酸（15:5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下观察。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

1.对照药材

2.120301

3.120401

4.120501

1234

2.4检查项

2.4.1水分

依据《中国药典》2010年版一部水分测定法，取此药材3批进行测定，最高值为10.69%，据此最高值上浮15%，规定土五加药材中水分不得超过12.0%。

2.4.2灰分测定

参考《中国药典》2010年版一部灰分测定法，取土五加3批样品进行测定，总灰分的最高值为12.125%；酸不溶灰分的最高值为2.541%，根据最高值向上浮动15%，规定土五加药材中总灰分不得超过14.0%；酸不溶灰分不得超过3.0%。

2.4.3浸出物

按2010年版《中国药典》浸出物测定法测定。

（1）水溶性浸出物测定法

将土五加药材粉碎，过二号筛，混合均匀。

取土五加粉末约2-4g，精密称定，置150mL锥形瓶中，精密加水50mL，密塞，称定重量，静置1h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取续滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，移置干燥器中，冷却30min，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算土五加中水溶性浸出物含量（%）。

（2）醇溶性浸出物含量测定法

将土五加药材粉碎，过二号筛，混合均匀。

照水溶性浸出物测定法（热浸法），以95%乙醇代替水为溶剂，操作按上述水溶性浸出物测定法进行。

结果：取土五加样品3批进行测定，根据结果，醇溶性浸出物较水溶性浸出物少，不将醇溶性浸出物列入标准中。水溶性浸出物最低值为15.90%；根据最低值向下浮动15%，规定土五加药材以干燥品计算，水溶性浸出物含量（热浸法）不得低于14.0%。

3讨论

3.1通过化学成分预实验，初步推断土五加含有黄酮类类物质，不含有皂苷、生物碱、蒽醌，甾醇鞣质或酚类物质。由于理化鉴别特征性不强，未将其列入标准中。

3.2薄层鉴别试验采用不同的展开剂进行试验，最终确定了乙酸乙酯-石油醚（Ⅱ）-冰醋酸（15:5:1）为展开剂，于紫外灯（365nm）下检视，方法稳定。

3.3通过对药材水分、灰分及浸出物的考察，制定了土五加的检查成分，有效地控制药材质量，从源头进行监控，保证药材的来源。

[参考文献]

[1]苗明三，李正国．现代实用中药质量控制技术[M]．北京：人民卫生出版社，2000．541

[2]刘晓庚，方园平．中国野生植物资源，17(1)，27～30.