NS-398抑制颊鳞癌MMP-9水平的研究

佘先麟1龚淼2朱峰1薛鑫鑫1

（1扬州市江都区人民医院江苏扬州225200）

（2扬州市苏北人民医院江苏扬州225200）

【摘要】目的：探讨非甾体抗炎药NS-398对颊鳞癌MMP-9水平的影响。方法：选用人颊癌细胞株BcaCD-885为研究对象，荧光免疫组织化学和WesternBlotting法观察A、A1、A2、A3中MMP-9表达的影响。结果：A、A1、A2、A3中BcaCD-885细胞24h后荧光免疫组织化学显示，各个浓度的NS398干预BcaCD-885细胞后MMP-9的表达较对照组有明显降低。WesternBlotting法观察各个浓度NS-398干预BcaCD-885细胞后MMP-9的蛋白条带随药物浓度的增加而递减。结论：NS-398可作用于BcaCD-885细胞株能够抑制其MMP-9蛋白水平的表达，并且随着药物浓度的增加而明显减少。

【关键词】NS398；颊鳞状细胞癌；BcaCD-885细胞株；基质金属蛋白酶-9

【中图分类号】R453【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）02-0109-02

颊癌是危害人类健康的口腔常见肿瘤之一，是常见的口腔鳞状细胞癌，其浸润性较强，严重危害患者的生命健康及生活质量。手术切除仍是治疗颊癌的主要手段，但是术后复发及转移率高是造成治疗失败的主要原因[1]。本研究主要探讨非甾体抗炎药NS-398对颊鳞癌MMP-9水平的影响，并做如下报道：

1.材料与方法

1.1实验材料

BcaCD-885细胞株（购自中科院上海细胞库），电泳仪。主要试剂：NS-398：美国三塔试剂公司；胎牛血清：杭州四季青生物工程有限公司；RPM1640：培养基赛默飞世尔生物化学制品有限公司；一抗Anti-MMP-2bs-0397R：北京博奥森生物有限公司；C-0007制胶试剂盒；北京博奥森生物有限公司；荧光二抗GoatAnti-rabbitIgG/Cy3：北京博奥森生物有限公司；普通二抗GoatAnti-RabbitIgG：北京博奥森生物有限公司；主要实验仪器：CO2恒温细胞培养箱，超净工作台，倒置显微镜。

1.2实验方法

（1）细胞培养：人颊鳞癌细胞株BcaCD-885用含有10%的胎牛血清的RPMI1640培养液在37℃细胞培养箱中培养。培养液中含有青霉素、链霉素均为100U/ml，用NaHCO3调整PH值至7.2～7.4。温箱中含5%CO2及95%空气饱和湿度。当贴壁细胞铺满瓶底的80%时进行细胞传代。

（2）NS-398储存液：将NS-398用DMSO配置成2.5Mmol/L的储存母液，过滤除菌后分装，置-20℃冰箱保存、备用。

（3）标本分组：不加药组加入10%培养液在37℃、5%CO2条件下培养24h，加药组分别加入含10(A1)、20(A2)、40(A3)mol/L的NS398培养液干预24h。

1.3统计学处理

采用SPSS11.5统计软件处理数据，常规统计分析；两组均数比较用t检验，多组均数比较用方差分析；以P＜0.05具有统计学意义。

2.结果

2.1荧光免疫组织化学检测MMP-9蛋白的表达

荧光免疫组化实验结果显示见（表1），荧光免疫组化照片如图所示：A,A1,A2,A3组BcaCD-885细胞中MMP-9的表达水平与对照组比较呈降低趋势，经图像分析软件及SSPS11.5统计软件分析得出两组细胞MMP-9的表达水平各组之间有显著的统计学意义（P＜0.05）

2.2WesternBlotting检测MMP-9蛋白的表达水平

Westernblotting结果显示NS-398各浓度组A,A1,A2,A3组BcaCD-885细胞中MMP-9蛋白表达的相对值见（表2）,经过单因素方差分析，在不同浓度NS-398干预下，MMP-9蛋白表达组间差异有统计学意义（P＜0.05）。

3.讨论

金属基质蛋白酶-9是一类活性依赖于锌离子的蛋白水解酶，不但介导肿瘤细胞对宿主的包括基底膜在内的细胞外基质的降解，还控制肿瘤新生血管生成以及调控肿瘤细胞的生长等。实验研究证明，非甾体抗炎药可降低肿瘤的发生率并抑制肿瘤的形成，降低肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，其作用机制主要与其抑制COX-2的活性，减少前列腺素（PGs）合成有关[2]。本研究以颊鳞癌BcaCD-885为研究对象，NS-398为干预药物，探讨COX-2抑制剂对颊癌BcaCD-885MMP-9表达水平的影响。研究结果显示：MMP-9表达量随药物浓度的提高而下降，具有统计学意义，荧光免疫组化与WesternBlotting结果示：对照组与用药组及用药组之间对比均具有统计学意义，因此随着药物浓度的提高，MMP-9表达水平被进一步抑制，Cox抑制剂NS-398可降低颊鳞癌BcaCD-885MMP-9的表达水平，与Aagatsuka，Tomozawa等人运用一种COX-2的选择性抑制剂JIE-522作用于结肠癌细胞株LHH3中的研究结果一致。

MMP-9的表达在颊癌细胞株的凋亡及增值过程中到底扮演一种什么角色，MMP-9的表达是否与肿瘤细胞的增值及凋亡存在关联，有待于进一步研究。

【参考文献】

[1]L.A.Cunningham,M.Wetzel&G.A.Rosenberg.MultiplerolesforMMPsandTIMPsincerebralischemia.[J]Glia,2005,50(4),329-339.

[2]李伟忠,王晓燕,丁彦青等.塞来昔布抑制Tca8113细胞释放PGE2及抑制细胞增殖的作用[J].现代口腔医学杂志,2009.23(4):419-422.