Rb通路基因在胃癌演化系列组织中的表达及其意义

黄辉1陈玉丽2王承党2吴婷2刘豫瑞2

黄辉1陈玉丽2王承党2吴婷2刘豫瑞2

1.福建医科大学附属宁德市医院福建宁德352100；2.福建医科大学附属第一医院福建福州350005

【摘要】目的：探讨细胞周期调控路径-Rb通路基因p16、cyclinD1、CDK4和Rb在胃癌发生和发展中的作用、相互关系以及与肿瘤生物学行为的关系。方法：应用免疫组织化学方法，检测并分析四种基因在胃癌演化系列组织中的表达情况以及与胃癌临床病理参数的关系。结果：p16和Rb在各组中表达差异无统计学意义（p>0.05）；cyclinD1在异型增生组中的表达高于其它组（p<0.01）；CDK4在异型增生和胃癌中的表达高于其它组（p<0.01）；四种基因表达与胃癌临床病理参数无关（p>0.05）；p16和cyclinD1表达呈负相关（p<0.01）。结论：p16表达低下不是胃癌发生的频发事件；cyclinD1过表达是胃癌发生的早期事件；CDK4过表达在胃癌发生和发展中起重要作用；Rb主要通过蛋白功能状态的改变参与胃癌的发生和发展；p16和cyclinD1表达存在负反馈调控机制。

【关键词】p16；cyclinD1；CDK4；Rb；胃癌

【中图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2015）-07-346-01

Rb通路调控异常与包括胃癌在内的许多肿瘤的发生和发展关系密切。正常胃粘膜细胞经历一个癌前阶段（萎缩性胃炎、肠化生、异型增生）的演变过程，随着多基因变异积累，最终发生恶性转化。本研究应用免疫组织化学方法检测Rb通路各基因在胃癌演化系列组织中的蛋白表达，并结合临床病理资料，探讨各基因在胃癌发生和发展中的作用、相互关系以及与肿瘤生物学行为的关系。

1资料与方法

1.1研究对象：80例原发性胃癌取自手术切除标本。其中男55例，女25例；年龄42~76岁，中位年龄59.5岁。临床病理资料以术前辅助检查、术中所见及术后病理检查为准。患者术前术中均未接受化疗或放疗。80例胃炎组织取自胃镜下活检标本，其中非萎缩性胃炎、萎缩性胃炎、肠化生、异型增生各20例。

1.2.方法：标本经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片，片厚4μm。载玻片以0.01%多聚赖氨酸预处理。应用免疫组织化学SP法检测，严格按说明书进行操作。以试剂盒提供的阳性片为阳性对照，磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗为阴性对照。

1.3.结果判断：蛋白表达以细胞核出现黄色颗粒为阳性，判断标准采用Fromowitz阳性细胞半定量分级法[1]，根据阳性细胞百分数和阳性细胞染色强度相加所得的总分进行结果判定：0~1分为阴性（-），2~3分为弱阳性（+），4~5分为中度阳性（++），6~7分为强阳性（+++）。1.4.统计学方法：应用统计软件SPSS19.0进行数据统计和分析。组间比较采用非参数统计H检验，相关分析采用Kendall等级相关分析，p<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1Rb通路各基因表达情况：p16和Rb在各组中的表达差异无统计学意义（p>0.05）。cyclinD1在异型增生组中表达水平增高，差异有统计学意义（p<0.01）。CDK4在异型增生和胃癌中的表达水平增高，两组间差异无统计学意义（p>0.05），但与其余各组的差异有统计学意义（p<0.01）。见表1。

3讨论

p16、cyclinD1、CDK4和Rb四种基因组成一条重要的调控路径-Rb通路（Rbpathway）调控细胞周期G1期的进程。细胞在有丝分裂原刺激下，cyclinD1表达并与CDK4结合使之激活，活化的CDK4磷酸化Rb蛋白，使Rb蛋白释放转录因子，促使细胞从G1期进入S期；p16通过与cyclinD1竞争结合CDK4，阻止CDK4活化，使细胞停滞在G1期。大量研究表明，该路径调控异常与肿瘤的发生和发展关系密切[2]。

p16在胃癌中的表达情况报道不一。本研究结果显示，p16在各组中的表达差异无统计学意义（p>0.05），与胃癌临床病理参数亦无相关性（p>0.05）；因此p16表达低下可能参与部分胃癌的发生，但不是胃癌发生的频发事件。至于在p16正常情况下，肿瘤细胞如何越过G1期调控而进入S期？Easton等[3]认为可能缘于cyclinD1和（或）CDK4过表达。

cyclinD1在许多肿瘤中过度表达，但在胃癌中的研究结论并不一致。本研究结果显示，cyclinD1在异型增生组中的表达强度高于其它组（p<0.01），cyclinD1表达与胃癌临床病理参数无相关性（p>0.05）。因此cyclinD1过表达可能是胃癌发生的早期事件[4]，而胃癌中cyclinD1表达不增加，说明细胞恶变后，其增殖不依赖于cyclinD1。

CDK4在许多肿瘤中呈高表达状态，因此许多学者认为CDK4活化是肿瘤发生的一个中心事件[5]。本研究结果显示，CDK4在异型增生和胃癌中的表达强度均高于其它组（p<0.01），说明CDK4与胃癌的发生和发展关系密切。此外，统计分析表明CDK4表达与胃癌临床病理参数无相关性（p>0.05），说明CDK4只与细胞增殖有关，而与其它生物学行为无关。

在许多肿瘤中Rb基因失活，但也有一些肿瘤中Rb基因无异常，而因蛋白磷酸化失活参与肿瘤的发生和发展[3]。本研究结果显示，Rb在各组中的表达差异无统计学意义（p>0.05），与胃癌临床病理参数亦无相关性（p>0.05）。因此Rb可能主要以蛋白功能异常参与胃癌的发生和发展，而无基因异常。

统计分析表明，胃癌中p16和cyclinD1表达呈负相关（p<0.01），提示两者存在负反馈调控机制[6]。

Rb通路调控异常与包括胃癌在内的人类许多肿瘤的发生和发展关系密切，在这方面的深入研究将有助于阐明细胞周期的调控机制以及肿瘤的发生和发展机制，也将对肿瘤的临床诊断和治疗提供有益的启示。

参考文献：

[1]FromowitzFB，ViolaMV，ChaoS，etal.Rasp21expressionintheprogressionofbreastcancer.HumPathol，1987，18：1268-1275.

[2]SherrCJ.Cancercellcycles.Science，1996，274：1672-1677.

[3]EastonJ，WeiT，LahtiJM，etal.DisruptionofthecyclinD/cyclin-dependentkinase/INK4/retinoblastomaproteinregulatorypathwayinhumanneuroblastoma.CancerRes，1998，58：2624-2632.

[4]黄虎，栗娜，胡义德.Bmi-1、cyclinD1、p16在胃癌中的表达及意义.重庆医学，2009，38（5）：569-571.

[5]RaneSG，CosenzaSC，MettusRV，etal.GermlinetransmissionoftheCdk4（R24C）mutationfacilitatestumorigenesisandescapefromcellularsenescence.MolCellBiol，2002，22（2）：644-656.

[6]孙桂彬，杨景国，李永华，等.PTEN、p16和CyclinD1在胃癌及癌前病变中表达的研究.现代中西医结合杂志，2012，21（15）：1614-1616