冰冻切片制作技术的探讨

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崔娜娜1郑湘予2,3尹玉慧2,3赵阿红2,3宋一民2,3陈振光2,3陈奎生2,3庞霞2,3

（1河南科技学院医学院解剖组胚教研室河南郑州450000）

（2郑州大学第一附属医院病理科河南郑州450052）

（3河南省肿瘤病理重点实验室河南郑州450052）

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)26-0163-02

冰冻切片技术借助低温使手术中的新鲜标本快速冷冻，达到一定的硬度后进行切片。从而来解决手术标本的诊断问题，决定手术的范围及手术的方法。但由于多种因素影响冰冻切片的质量，从而影响病理诊断的准确性。可见，快速制作一张优质的冰冻切片是非常重要的。经过多年实践，从标本取材、速冻、切片、固定、染色到封片等步骤着手，摸索出一些提高冰冻切片质量的可行方法。

1材料

来自郑州大学第一附属医院每天送验的新鲜手术标本。

2方法

2.1取材将新鲜的组织标本不经过任何试剂处理切成2cm×2cm×0.2cm大小的组织块，组织取的过大或过厚会延长制片的时间。尽量少带或不带脂肪或坏死组织，切面要平整。囊性组织内有很多液体，不要用水冲，以免产生冰晶影响诊断，取囊壁的宽度为0.3cm。

2.2速冻

2.2.1包埋剂在工作中常用的有三种：OCT包埋剂、胶水和水。OCT成本太高，水容易形成水晶，胶水经济适用，不影响切片的质量，是一种很好的包埋剂。

2.2.2包埋方法把取好的标本迅速放在已经预冻好的冷冻头上，注意冷冻头从消毒液中取出，晾干再预冻，使它与组织块结合更牢固。囊壁组织先把它卷曲成团，立着放在预冻好的冷冻头上。若遇到组织太小的标本时，胶水先放在冷冻头上，待胶凝固时将组织放上，再加一些胶水冷冻，这样组织被垫高，切片质量更好。值得注意的是胶水涂的面积应该大于组织，这样的片子组织不易卷曲。

2.2.3冷冻条件由于各种组织的结构不同，故冷冻的温度和时间也有所不同，见表1。

表1常见组织的冷冻的温度及时间

。

2.3切片

2.3.1切片不完整切片不完整，直接影响病理报告的准确性。组织中过多的脂肪、坏死组织和纤维成分引起组织过硬或组织过脆影响制片。所以取材时尽量少带或不带脂肪或坏死组织。另外还要掌握冷冻的温度和时间，切片的速度稍微快点。

2.3.2切片皱缩和卷缩刀锋变钝或刀上粘有异物，切片时，组织因受挤压缩在一起。根据情况换刀位，并且清除切片刀和冻台上的异物。其次，应调整好切片刀与冻台的角度。

2.3.3切片脱落冰冻切片是利用温度差将切片粘贴在玻璃片上，切好的片子在染色之前，先把组织与片子的粘贴处放在手背上数秒，增加温度差使其结合更牢固。除此之外，载玻片不干净、切片太厚、组织内含过多的脂肪及坏死组织，都可造成脱落。保持载玻片干净、调整好切片厚度6μm左右，注意取材的位置。

2.4.固定固定对染色起决定作用，不要急于染色而忽略固定，混合固定液包括95%酒精85ml、甲醛10ml、冰醋酸5ml。这种固定液对组织有较强的穿透力，可使细胞内的蛋白质沉淀并防止组织过度收缩，具有固定速度快、渗透力强、HE染色鲜艳、组织结构清晰等优点。固定液要新鲜、不要加热防脱片，根据组织情况决定固定时间。

2.5染色及封片染色方法为HE染色法，步骤如下：（1）固定。（2）水洗。（3）苏木素染细胞核。（4）水洗。（5）1%盐酸酒精分化。（6）水洗，然后放在水浴锅中返蓝。（7）伊红染细胞浆。（8）水洗。（9）梯度酒精脱水。（10）二甲苯透明。（11）树胶封固。所有的染液勤换，保证制片质量。

3结果

切片完整、无皱折、无龟裂；结构清晰，细胞核、细胞质清晰；HE染色鲜艳，对比清晰。

4讨论

冰冻切片的目的是在很短时间内做出正确的病理诊断，因此快速制作一张优质的冰冻切片至关重要，这就要求技术人员掌握好冰冻切片这门技术，根据多年的经验如下：

1.因长期低温工作，并且都是新鲜组织，故做好自我防护；

2.熟练掌握机器的各种部件的功能和性能；

3.认识组织学结构，掌握好各种组织冷冻的温度和时间；

4.选择好锋利的刀锋，调节好刀锋与防卷板的角度；

5.熟练掌握切片的技术，防止技术问题影响制片的质量；

6.配制好固定液及各种染色液；

7.选好快速的染色方法等。

参考文献

[1]朱晓玲,姜红薇.卵巢肿瘤术中冰冻切片诊断的临床意义[J].重庆医学,2001,30（6）:539.

[2]周颖川.制作冷冻切片的几点体会[J].广西医学,2006,28(12):l987-l988.