化学发光微粒子免疫测定法检测丙型肝炎抗体的临床效果分析

苏志琳

厦门大学附属第一医院检验科福建厦门361000

【摘要】目的：研究在检测丙型肝炎抗中应用化学发光微粒子免疫测定法的临床效果。方法：回顾性分析我院自2016年5月至2017年6月期间收治的63例输血病人所有资料，选取发光免疫分析法与酶免疫测定法开展丙型肝炎抗体检查，对比两种检测的结果。结果：对本次分析的63例输血病人进行丙型肝炎抗体检查，经化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法的诊断之后，阳性检出例数都为7例，阳性率为11.11%。检验化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法诊断符合率之间差异不显著且P＞0.05，无统计学意义。高值组与低值组阳性标本检出率对比差异显著且P＜0.05，统计学意义存在。结论：近年来丙型肝炎抗体检查中酶免疫测定法、化学发光微粒子免疫测定法都是比较常用的技术，虽然化学发光微粒子免疫测定法存在更高价值，但需要依据实际情况选择有效的诊断技术。

【关键词】化学发光微粒子免疫测定法；丙型肝炎抗体；临床效果

丙型肝炎属于全球流行疾病，大约存在3%的感染率，目前国内丙肝抗体阳性率大约是3.2%，还没有获得明确的发病机制，也没有理想的治疗措施，所以，临床检查丙型肝炎抗体过程中开展早发现、早诊断以及早治疗对于改善预后十分重要。随着医疗技术水平的发展，临床上出现越来越多的丙型肝炎病毒感染检测技术，近年来逐渐普及HCV-RNA定量检测PCR法的特异性以及灵敏度比较高，也能够对抗病毒的治疗进行监测，但是因目前还没有完全解决高成本以及标准化的问题，还不能得到广泛普及[1]。在常规筛查过程中丙型肝炎抗体较为合适，特别是筛选健康献血人员，此外也包括金标法、放射免疫测定法、化学发光酶免疫分析法、酶免疫测定法、粒子凝集法等措施。现对本次化学发光微粒子免疫测定法诊断丙型肝炎抗体的结果进行报道。

1资料与方法

1.1基础资料

本次分析的63例样本数据均选自2016年5月至2017年6月期间收治输血病人的血清标本，其中女性患者例数为31例，男性患者例数为32例，最大年龄为67岁，最小年龄为20岁，中位年龄为（46.23±5.23）岁，血液透析患者10例，手术患者53例。S/CO比值超过1显示为阳性，高值组为S/CO比值超过8，低值组为S/CO比值在1~8之间。

1.2方法

化学发光微粒子免疫测定法，采用两步法免疫检测，运用Chemiflex技术，即CMIA技术与灵活的检测模式的结合，定性测定人血清的HCV抗体。将样本、稀释液和HCV抗原包被的顺磁微粒子混合，如果样本中存在HCV抗体就会和包被在微粒子上的HCV抗原结合。冲洗后加入吖啶酯标记的抗人抗体进行结合反应，形成复合物。再次冲洗后，将预激发液和激发液加入到反应混合物中。测量产生的化学发光反应，以相对发光单位（RLUs）表示，样本中的HCV抗体含量和光学系统检测到的RLUs之间成正比。通过对比反应中化学发光信号和ARCHITECTiHCV抗体项目校准得出的cutoff信号确定样本中是否存在HCV抗体。随后通过ChitonRIBA-3.0SIA，CopEmeryville，CA即重组免疫印迹法进行确证实验，依据S/CO比值分组，分为高值组和低值组，高值组为S/CO比值超过8，低值组为S/CO比值在1~8之间，HCVRIBA是通过测试条上固定的重组HVC抗原构成的单一三步试验。

酶免疫测定法测依据剂盒说明书进行间接酶联免疫法基本原理的手工操作，通过底物显色反应，利用酶标仪对OD值进行检测，并且对临界值进行计算，对样本中是否存在丙型肝炎特异性抗体进行判断。

选取雅培i2000化学发光仪，采用雅培原装配套试剂，酶免试剂采用厦门英科新创公司试剂，孵育设备采用iEMS自动震荡孵育器，日本伯乐的1575型自动洗板机，日本伯乐的BIO-RAD680酶标仪进行检测。选取ChitonRIBA-3.0SIA，CopEmeryville设备进行RIBA实验。

1.3观察指标

观察化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法测定丙型肝炎抗体符合率、高值组与低值组阳性标本符合率。

1.4统计学方法

本次笔者选择SPSS19.0统计学软件处理分析收治的63例输血病人所有临床数据，化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法测定丙型肝炎抗体符合率、高值组与低值组阳性标本符合率采取率（%）的形式表示，予以X2检验，P＜0.05且差异显著，统计学有意义。

2结果

2.1对比化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法的诊断符合率

对本次分析的63例输血病人进行丙型肝炎抗体检查，经化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法的诊断之后，阳性检出例数都为7例，阳性符合率为11.11%。经检验化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法之后诊断符合率之间差异不显著且P＞0.05，无统计学意义。

表1化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法检测丙型肝炎抗体的符合率

3讨论

在丙型肝炎抗体检测过程中化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法实际上都是采取间接原理法，以NS5、NS4、NS3、Core、HCV基因重组特异性抗原包被固相支持物，经资料显示如果试剂中没有足够的NS3、HCV抗原活性会出现遗漏[2]，本次研究中显示经化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法检测之后存在1例假阴性样本复查为阳性主要可能因以上原因引发，此外也可能是因手工操作误差引发的，经复查之后显示为阳性[3-4]。本次研究显示，对比化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法，化学发光免疫分析具有更好的重复性，批内精密度CV低于10%，存在抗原抗体反应的高特异性以及发光分析的高灵敏度，此外对于CMV抗体、HAV抗体、HBV抗体、RF等阳性样本诊断时不存在交叉反应。选取全自动化学发光仪进行化学发光免疫分析[5]，可减少人为操作，具有高度自动化特点，且操作较为简单，可提升安全性，避免发生职业暴露，形成更智能化、系统化的服务。适合应用在大批量、多项目的检查中，同时还具备方法快速稳定、有效期长、试剂稳定、价格低以及无放射性等特点，适合应用在献血人员健康筛查中。做好日常仪器设备维护与保养工作，对工作流程进行规范可显著降低化学发光微粒子免疫测定法的实验误差，属于先进且成熟的一种超微量活性物质免疫测定技术[6]。

笔者研究显示，高值组阳性标本检出率18.75%对比低值组阳性标本检出率3.22%，P＜0.05且异显著，统计学意义存在。经化学发光微粒子免疫测定法与酶免疫测定法的诊断63例输血病人进行丙型肝炎抗体之后，阳性检出例数都为7例，阳性符合率都为11.11%，差异不显著且P＞0.05，无统计学意义。

化学发光微粒子免疫测定法中存在过氧化氢，所以检测中不可应用强氧化型消毒剂。化学发光基团十分容易淬灭，为保持稳定性，提升检测重复性以及灵敏度，因此需要应用相同批号的缓冲剂与发光底物[7]。

综合以上结论，在丙型肝炎抗体检测过程中不管应用何种检测技术都存在一定缺陷，也就是82天窗口期检出率比较低，存在较高漏检几率，因样本中抗原抗体特异性以及生物活性物质结构复杂的差异导致出现假阳性，或者出现灰区，促使形成不真实的阳性结果，特别是当S/CO比值接近cut-off时如果想要对丙型肝炎病毒感染进行确诊，需要应用其他方式进行复查。

参考文献：

[1]王燕，尹秋霞，窦恒利等.化学发光法和酶联免疫法作为筛选试验测定丙肝抗体的评价[J].标记免疫分析与临床，2013，20（4）：246-250.

[2]王立水，徐明杰，江长林等.不同抗HCV化学发光标记免疫分析法试剂S/CO值与重组免疫印迹确证实验的相关性研究[J].中华检验医学杂志，2016，39（2）：90-94.

[3]刘义庆，邹建文，田文君等.化学发光免疫分析检测抗-HCV抗体与HCV-RNA的关联研究[J].国际检验医学杂志，2014（13）：1749-1750.

[4]袁艳军，吕炳山，郭秋延等.化学发光微粒子免疫测定法检测梅毒和丙型肝炎抗体的临床结果分析[J].中国医药指南，2015（3）：128-129.

[5]周华强.化学发光酶免疫分析法及ELISA用于丙型肝炎抗体检测的效果对比观察[J].中国医药科学，2016，6（19）：125-127

[6]赵乔妹，张静，刘英丽等.不同化学发光分析系统检测丙型肝炎病毒抗体的性能评价[J].标记免疫分析与临床，2015，22（4）：345-347，351.

[7]万东文.化学发光酶免疫分析法与酶联免疫吸附试验在丙型肝炎抗体检测中应用比较[J].现代医用影像学，2017，26（1）：193-194.