虹吸法和离心法制备冷沉淀效果比较

孟莉

孟莉

（河南省三门峡市中心血站472000）

【中图分类号】R457【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）30-0384-02

冷沉淀含有丰富的Ⅷ因子、纤维蛋白原、及多种凝血因子，因此主要用于儿童血友病甲、血管性血友病患者及手术后出血、严重外伤及DIC等患者的治疗。而冷沉淀制品中Ⅷ因子和纤维蛋白原的含量是直接影响治疗效果的重要因素，并且与分离制备过程密切相关。目前，国内制备冷沉淀的常规方法有融化虹吸法和冻融离心法我站自2001年5月开始用虹吸法制备冷沉淀，2010年改用离心法制备，经过检测结果对比发现离心法制备的冷沉淀Ⅷ因子和纤维蛋白原的含量要优于虹吸法，现报告如下：

1.材料与方法

1.1仪器与试剂MDF-460U型-50℃低温速冻冰箱（日本三洋）；贮血冰箱（日本三洋）；J6-MI离心机（美国贝克曼）；JY1001电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；ZBK-G低温工作台（淄博中保康医疗器具有限公司）；三洋冷冻库；SysmexCA-500血凝仪（Sysmex公司）；Ⅷ因子、纤维蛋白原定量检测试剂盒（德国DadeBehringMarburg公司）

1.2方法

1.2.1严格按照冷沉淀原料浆制品要求于采血后6小时内分离出血浆，称重算出容量后，把同一人份血浆平均分为2份，每份100ml。共留取50份原料血浆(全部为400ml全血制备)，放入-50℃低温速冻冰箱速冻后，置-30℃冷冻库保存备用。Ⅰ组25袋用虹吸法，Ⅱ组25袋用离心法。

1.2.2虹吸法：将符合制备冷沉淀要求的原料血浆从-30℃冷冻库中取出，放入恒温水槽中，水温保持在（4±2）℃，软化后，手工挤压使之与所连接的空袋形成虹吸，融化的血浆虹吸至空袋内，当原料浆袋内含有白色结晶颗粒的血浆约（25±5）ml时用止血钳钳住，热合完毕称重后，立即放入-50℃低温速冻冰箱内使其快速冻结。

1.2.3离心法：贮血冰箱调节到（4±2）℃，把符合制备冷沉淀要求的原料血浆从-30℃冰箱取出，置于4℃贮血冰箱内缓慢融化12小时左右，待血浆融化成只剩下少量不融化的白色结晶状沉淀物时，取出原料血浆袋放进预冷后的离心机中以离心力3800g离心15分钟，使冷沉淀下沉于塑料袋底部。把离心后的血浆挂在低温操作台的挂钩上，让血浆虹吸至空袋内，当原料浆袋内容物约（25±5）ml时用止血钳钳住，热合完毕沉重后，立即放入-50℃低温速冻冰箱内使其快速冻结。

1.2.4Ⅷ因子、纤维蛋白原含量测定

严格按照Sysmex-CA500仪器使用说明书操作，分别测定Ⅷ因子、纤维蛋白原含量，测定结果乘以冷沉淀制品的容量，即为每袋冷沉淀制品中的Ⅷ因子、纤维蛋白原的含量，测定Ⅷ因子时冷沉淀10倍稀释、测定纤维蛋白原时冷沉淀20倍稀释。

2.结果

统计学采用t检验，结果如下：

两种方法制备产品检测结果比较（n=25）

我站在2001-2009用虹吸法制备的冷沉淀从每月抽检结果统计合格率为80%，改为离心法后提高到96%。

3.讨论

从上表可看出，两种方法制备的冷沉淀FⅧ因子（P＜0.05）差异有显著性，而Fbg含量（P＞0.05）差异无显著性。这是因为FⅧ因子是一种不稳定因子，受到制备程序的影响很容易降低或失去活性，虹吸法制备时，新鲜冰冻血浆在溶解过程中，冷沉淀有时不能形成大的凝聚团块或絮状，不能聚集吸附在中央未融化的冰块上或袋壁上，部分由于虹吸作用而流到另一空袋内，因此降低了FⅧ因子的含量[1]。而离心法制备时新鲜冰冻血浆在冷藏箱内经过12小时左右的融化，FⅧ因子充分析出并聚集成大块团状或絮状，在重离心作用下全部沉降于血袋底部，相对虹吸法损耗较少。而Fbg为较稳定的凝血因子，受制备时间和其它因素影响较小，所以Fbg含量无显著性差异。总之，虽然两种方法都能制备出符合血液质量标准的冷沉淀，但离心法制备的冷沉淀FⅧ因子的含量要优于虹吸法，从两种方法的操作步骤也可看出离心法整个制备过程条件容易控制，影响因素少。但与黄虹、陆典瑞[2]等报道这两种制备方法FⅧ因子和Fbg含量差异无显著性（离心法制备操作稍有不同），孙启俊、徐树良等[3]报道是离心法制备的成品FⅧ因子得率低有所不同。

另外，冷沉淀的质量还受采集、分离、制备、保存等多方面因素的影响，因此，为了保证冷沉淀能够获得较高活性的第FⅧ因子，提高临床治疗效果，在制备过程中需注意以下几点：1、采血要求顺利，一针见血，采血过程中全血充分与抗凝剂混匀，无任何凝血迹象；2、原料血浆制备时提倡二次离心，以尽量去除袋内残留的血细胞，防止血浆在冰冻时细胞破裂释放促凝血活性物质，激活凝血系统，影响FⅧ因子稳定性；3、原料血浆冰冻时使用速冻冰箱或酒精干冰浴快速冰冻，以减少FⅧ因子活性的损失[4]。

参考文献

[1]杨玉峰，黄春萍，赵云等.两种制备冷沉淀方法的比较[J].实用医技杂志，2007，6(8):32-33.

[2]黄虹，陆典瑞，胡继征等.冷沉淀制备工艺改良[J].临床输血与检验，2007，9(2):144-145.

[3]孙启俊，徐树良，杜义真等.恒温水循环式冷沉淀制备装置的研究与应用[J]，2007，9(1):46-47.

[4]王培华，主编，输血技术学[M].北京:人民卫生出版社，1998.32.