伊立替康注射液细菌内毒素检查法的研究

王正凤翟灵妍吴军陈家香(通讯作者)

王正凤翟灵妍吴军陈家香(通讯作者)

(西南药业股份有限公司重庆400038)

【摘要】目的：建立伊立替康注射液细菌内毒素检查方法。方法：按照《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法，采用2个不同厂家的鲎试剂对伊立替康注射液进行研究。结果：本品稀释20倍以后，可消除对鲎试剂与细菌内毒素凝集反应的干扰；按拟定标准检验，采用2个厂家的鲎试剂分别对3批伊立替康注射液的细菌内毒素检查，其结果和家兔热原检查结果均符合规定。结论：可用细菌内毒素检查法对伊立替康注射液进行热原检查。

【关键词】伊立替康注射液细菌内毒素检查干扰试验

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）18-0124-02

StudyonbacterialendotoxintestforIrinotecanInjection

WangZheng-feng，ZhaiLing-yan，WuJun，ChenJia-xiang

(1InstituteofSouthwestPharmaceuticalCompanyLtd.,Chongqing400038)

【Abstract】ObjectiveThispaperestablishedamethodstudyforbacterialendotoxintestofirinotecaninjection.Methods:TheexperimentwascarriedoutacccrodingtotheAppendixⅡofChinesePharmacopeia(2010edition,2volume)totestbacterialendotoxin.Then,usingthedifferenttachypleusamebocytelysatefrom2manufacturerstestedthebacterialendotoxinforirinotecaninjection.Results:Whenthesamplewasdiluted40times,thismethodcouldeliminatetheinterferencefortachypleusamebocytelysateandbacterialendotoxinagglomerationreaction.Accordingtothelayingstandard,thebacterialendotoxintestandrabbitpyrogentestresultswereaccordedwiththeregulationfor2manufacturerstachypleusamebocytelysatetesting3batchirinotecaninjectionsamples.Conclusion:Thebacterialendotoxintestmethodcanbeappliedinpyrogentestforirinotecaninjection.

【Keywords】IrinotecanInjectionBacterialendotoxintestInterferencetest

伊立替康是经过修饰的天然喜树碱衍生物，是疗效确切，毒副作用较小的抗癌药物，对多种肿瘤如结肠癌，小细胞癌，白血病等都有明显的抑制作用，具有水溶性好，广谱抗癌等特点。对热原物质的检查，《中国药典》2010版附录的检测方法有细菌内毒素检查法和家兔热原测定法，两者比较前者具有方法简便快捷准确的特点，本实验经方法学验证，可用细菌内毒素法代替原质量标准中的家兔热原测定法，控制其热原。

1试验材料

1.1样品伊立替康注射液3批，规格2ml:40mg，批号120701120702120703，生产厂家：西南药业股份有限公司。

1.2试剂鲎试剂：批号110905，规格0.1ml,λ=0.25EU/ml,湛江安度斯生物有限公司；批号110301，规格0.1ml,λ=0.25EU/ml,福州新北生化工业公司。

细菌内毒素工作标准品：批号1101050，效价10EU规格1ml,湛江安度斯生物有限公司。细菌内毒素检查用水(简称BET)，批号110702，规格5ml/支，湛江安度斯生物有限公司。

1.3仪器XW-80A旋涡混旋器，上海隆拓仪器设备有限公司；HH-W21电热恒温水浴箱，上海医疗器械七厂。

2试验方法与结果

2.1鲎试剂灵敏度复核按照《中国药典》2010年版二部附录鲎试剂的标示灵敏度进行复核试验，结果见下表1。

表1鲎试剂灵敏度复核试验结果

2.2样品细菌内毒素理论限值(L)的确定及最大有效稀释倍数(MVD)的计算。

2.2.1样品内毒素理论限值(L)的确定从盐酸伊立替康注射液使用说明书可知，本品静脉滴注最大剂量为350mg/(m2?h)。M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，人均表面积体重为1.62m2/60kg，人体致热阀(K)为5.0EU/(kg?h)，则L=K/M=5.0EU?(kg?h)-1&pide;[350mg/(m2?h)×1.62m2/60kg]=0.5EU/mg。因为供试品的浓度为20mg/ml，所以供试品细菌内毒素限值=0.5EU/mg×20mg/ml=10EU/ml。

2.2.2最大有效稀释倍数MVD的计算

根据公式MVD=[CL/λ=40mg/2ml×0.5EU/mg]&pide;0.25EU/ml=40倍

或MVD=CL/λ=[1.0ml/ml×10EU/ml]&pide;0.25EU/ml=40倍

2.3样品干扰试验

2.3.1干扰预试验为排除样品自身对鲎试剂与细菌内毒素凝胶反应可能存在干扰，取样品批号为120701的原液，分别按表2所列的稀释倍数稀释，制成样品溶液浓度系列，并制备含2λ细菌内毒素的样品稀释液(PPC)进行干扰预试验，同时作阳性和阴性对照。结果见下表2。

表2干扰预试验结果

由干扰预试验结果可知，用两个厂家的鲎试剂对伊立替康注射液进行细菌内毒素检查在20倍稀释时无干扰。

2.3.2干扰确证试验为了最终确定是否存在干扰，先进行以下正式干扰试验，取伊立替康注射液用细菌内毒素检查用水进行稀释20倍，按照《中国药典》2010版二部附录细菌内毒素检查供试品干扰试验项来进行试验，结果见表3。

表3干扰试验结果(1:20稀释液)

以上干扰试验表明，最大浓度2.0λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管均为阴性，用BET水和样品溶液制成的内毒素溶液的反应终点浓度几何平均值Es在0.5—2.0λ，Et在0.5—2.0Es范围内，说明样品溶液在该浓度下对两批鲎试剂均无干扰，可进行细菌内毒素检查。

2.4样品细菌内毒素检查取伊立替康注射液3批，将原液1:20倍稀释后，用以上两批鲎试剂分别按《中国药典》2010版二部附录细菌内毒素检查法进行细菌内毒素检查，结果3批供试品的内毒素检查均符合规定，与家兔法检查一致。结果见表4。

表4伊立替康注射液细菌内毒素检查结果

3讨论

目前，常见的热原检查方法为家兔法和鲎试剂法。与传统的家兔热原检查法相比，细菌内毒素检查法具有操作简便，检验周期短，结果准确，检测灵敏度高的特点。因此本试验细菌内毒素法代替热原检查法是可行的。通过本试验证明了伊立替康注射液的细菌内毒素检查方法的可行性。本文通过干扰预试验确定样品的有效稀释倍数，再由干扰试验进一步验证，从而减少干扰试验的盲目性。用不同厂家的鲎试剂进行试验且结果相同，由此说明鲎试剂可以用于本品的细菌内毒素检查。