HPLC法测定复方鸡骨草片中栀子苷的含量

严瑞民1牛水平1高静

（1陕西太白山制药有限责任公司陕西太白县721600；2宝鸡市食品药品稽查支队陕西宝鸡721000）

摘要：目的建立复方鸡骨草片中栀子苷的高效液相色谱法。方法采用HypersilBDSC18色谱柱（200mm×4.6mm，5μm）；以甲醇-0.5%磷酸为流动相（21∶79），流量1.0mL?min-1，检测波长238nm，柱温室温。结果栀子苷在20.04～120.24μg?mL-1范围内，呈良好的线性关系（r=0.9995），平均回收率为98.7%，RSD为0.48%（n=9）。结论该方法简便准确，专属性强，重复性好，可用于复方鸡骨草片的质量控制。

关键词：复方鸡骨草片；栀子苷；HPLC

复方鸡骨草片是由鸡骨草、茵陈、栀子、三七、人工牛黄、珍珠层粉、白芍、五味子、枸杞子等9味中药组成，该品种是在2002年版国家药品监督管理局地标升国标《国家中成药标准汇编--内科肝胆》分册收载的复方鸡骨草胶囊[1]（标准编号：WS-10536（ZD-0536）-2002）基础上，通过改变剂型而开发的中药新药；具有清肝利胆，清热解毒功效；临床用于肝胆湿热证所致的胁肋不舒，脘腹胀满，疲倦乏力，口苦尿黄，舌红苔腻等。参考原胶囊剂含量测定方法，通过实验研究，对方中栀子所含栀子苷的含量及与检测方法进行了研究，制定了适合于本品的HPLC含量测定方法。

1仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪（大连依利特科学仪器有限公司），P200Ⅱ型高压恒流泵；UV-200Ⅱ型紫外检测器；Echrom2000色谱数据处理工作站。CQX-06超声源机（250W，40kHz，昆山市超声仪器有限公司））。

1.2试药

甲醇为色谱纯；水为哇哈哈纯净水；其它试剂均为分析纯；对照品购自中国药品生物制品鉴定所，栀子苷对照品（批号110749-201309，含测用）；复方鸡骨草片供试品（批号140301，140302，140303）及阴性样品为企业自制。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：HypersilBDSC１８（200mm×4.6mm，5μm）流动相：甲醇-0.5%磷酸溶液（21∶79）；检测波长：238nm；流量1.0mL?min-1；柱温：室温；进样量10μL。理论板数按栀子苷峰计算不低于3000。

2.2对照品溶液的制备

精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇溶解制成1mL含60μg的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取重量差异项下的本品10片，除去包衣，研细，精密称取0.5g，，加入甲醇30mL，加热回流20min，放冷，滤过，滤液置50mL量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4阴性对照溶液的制备

按处方及制备工艺制备缺栀子的阴性对照溶液。

2.5系统适用性实验

精密吸取对照品、供试品和阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪测定，结果：阴性对照对栀子苷的测定无干扰。见图1。

t/min

C

图1HPLC图谱

1对照品；B.供试品；C.阴性对照品；1.栀子苷

Fig.1HPLCchromatogras

A.referencesubstance；B.sample；C.negativesample；1.geniposide

2.6线性关系考察

取栀子苷对照品5mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液（200.4μg?mL-1），精密量取该对照品溶液1，2，3，5，6mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各吸取10μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以质量浓度（X）与峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程：Y=218.46X-158.68，r=0.9995。表明栀子苷质量浓度在20.04～120.24μg?mL-1范围内线性关系良好。

2.7精密度实验

取浓度为60.12μg?mL-1的栀子苷对照品溶液，重复进样5次，测得峰面积的RSD为0.45%，表明仪器精密度较好。

2.8稳定性实验

取批号140301供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12h进样测定，栀子苷峰面积的RSD=1.56%，表明供试品溶液在12h内基本稳定。

2.9重复性实验

取批号140301样品，平行精密量取5份，按2.3方法处理测定，结果每片平均含量为2.801mg，RSD=1.79%（n=5），结果本法重复性良好。

2.10加样回收率试验

分别精密量取已知含量的供试品（140301，栀子苷含量为2.80mg?片-1）9份各0.25g，按高、中、低浓度加入栀子苷对照品0.90，1.20，1.50mg适量，按2.3项下方法制备供试品溶液测定，计算回收率，结果见表1。

3讨论

3.1检测波长的选择取上述栀子苷对照品溶液，在200～400nm扫描，结果栀子苷在238nm处均有最大吸收，故我们选择238nm做为检测波长。

3.2提取方法的选择预实验对提取溶剂（甲醇、50%甲醇、乙醇）、提取方式（超声、回流）、提取时间（20、30、40min）进行考察，发现甲醇回流20min时，样品中栀子苷含量较高，且栀子苷峰型较好，杂质几乎无干扰。

3.3流动相的选择预实验中我们采用甲醇-0.1%磷酸溶液=22：78和甲醇-0.5%磷酸溶液（21∶79）为流动相比较基线及分离效果，结果显示甲醇-0.5%磷酸溶液（21∶79）所得色谱峰峰形较好，基线平稳，分离效果较佳。

参考文献

[1]国家药品监督管理局地标升国标．国家中成药标准汇编内科肝胆分册：2002年版[S]．标准编号：WS-10536（ZD-0536）-2002

[2]国家药典委员会．中国药典：2010年版[S]．一部，北京：中国医药科技出版社，2010：231-232

[3]苗明山，李振国等．现代实用中药质量控制技术[M]．2000年版．北京：人民卫生出版社，2000：713-714

[4]胡春丽，杨丽，王冬梅，等．HPLC法同时测定当归龙荟片中龙胆苦苷和栀子苷的含量[J]．沈阳药科大学，2008，25（3）

[5]尹桂华，杨美林，仲崇林，等．反相高效液相色谱法测定复方鸡骨草片中栀子苷的含量[J]．中国药房，2007，25（3）210-211

作者简介：严瑞民（1973-），男，陕西眉县人，主管药师，研究方向：药品检验监督；

牛水平（1966－），男，陕西扶风县人，主管药师，研究方向：药物制剂；

高静（1985－），女，陕西横山人，宝鸡市食品药品稽查支队药师。研究方向：药品监督检验。