冰冻切片快速免疫组化染色的体会

郑华伟陈新

对于一些软组织肿瘤和一些交界性或肿瘤成分少的上皮性肿瘤在冰冻切片中依靠形态学诊断有时非常困难，免疫组化能有所帮助。但常规免疫组化染色需时较长，不适用于冰冻诊断，我们用的是Enhancedpolymerone-stepstaining(EPOS)法，它是目前国际上用得比较多的方法，文献报告上重复性和稳定性好，对确定和排除肿瘤有明确的辅助诊断作用。

1材料与方法

1.1材料手术切除10min内的新鲜标本，其中临床诊断的乳腺癌6例，胃癌6例，结肠癌6例及6例乳腺癌病人的20枚腋窝淋巴结，这些病例最后经常规HE染色切片后均被证实为癌。

1.2试剂DAKO公司提供的Lca-EPOS抗体、CK-EPOS抗体、Vimentin-EPOS抗体，这三种抗体可分别染淋巴细胞、上皮源性细胞和间叶源性细胞，同时使用能鉴别大多数不同来源的肿瘤。

1.3方法（1）取手术新鲜组织用冰冻切片机-20℃切成5um切片，粘附于涂防脱片胶（APES）的载玻片上。（2）100%丙酮固定20s后晾干切片，PBS（pH7.4）冲洗15s。（3）滴加EPOS抗体，37℃孵育3min。（4）PBS冲洗15×3次。（5）滴加DAB试剂，37℃显色3-4min。（6）自来水洗1min。（7）苏木精染色细胞核4min，水洗后封固。上述所有冰冻切片的快速免疫组化染色均与冰冻切片后剩余组织（4%甲醛固定）石蜡切片的常规ABC法免疫组化染色相对比，所有淋巴结的连续冰冻切片均做HE染色，作常规诊断。

1.4结果用EPOS抗体进行冰冻切片快速免疫组化染色，显示出较强的、明显的靶细胞着色，无背景着色，阳性强度较常规免疫组化稍强。6例乳腺癌病人的淋巴结用EPOS法和常规免疫组化染色均发现3例有转移，而观察HE冰冻切片仅发现1例有转移。

2结论

通过实际结果显示EPOS法与常规免疫组化染色的结果比较是一致的，因此EPOS法是能够用于冰冻切片中，为临床提供可

靠的病理诊断支持的。

3讨论

EPOS试剂是用化学方法把辣根过氧化物酶标记的一种连接到一种惰性聚合物——葡聚糖上[2]。由于该聚合物分子量大，与一抗结合位点多，使一抗直接与组织中的特异性抗原结合增加，在显色时也有充足的辣根过氧化物酶与DAB反应，因而反应迅速[1,3,4]。与常规免疫组化相比较，阳性标记强度增强，该方法简单、实用，不需要阻断内源性过氧化物酶，整个过程仅用13min即可完成。因此把EPOS法应用于冰冻切片中，对手术中的诊断很有帮助，并能提高哨卡淋巴结微小转移灶的检出率，值得推广应用。

参考文献

[1]BeachRA,LawsonD,WaldropSM,CohenC.Rapidimmunohistochemistryforcytokeratinintheintraoperativeevaluationofsentinellymphnodesformetastaticbreastcarcinoma.ApplImmunohistochemMolMorphol.2003Mar;11(1):45-50.

[2]DemaA,TudoseN.Immunohistochemicalexpressionofprostatespecificantigen(PSA)inbenignandmalignanttumorsoftheprostate.RomJMorpholEmbryol.1998Jan-Dec;44(1-4):93-100.

[3]SalemAA,Douglas-JonesAG,SweetlandHM,ManselRE.Intraoperativeevaluationofaxillarysentinellymphnodesusingtouchimprintcytologyandimmunohistochemistry:[e-mail].2003Feb;29(1):25-8.

[4]NahrigJ,KomminothP,KowolikJ,WernerM.Protocolforultrarapidimmunostainingoffrozensections.RichterT,JClinPathol.1999Jun;52(6):461-3.