探讨双抗原夹心法检测HIV抗体的影响因素

路娜

(广西省来宾市金秀县人民医院广西来宾545700)

【摘要】目的：探讨双抗原夹心法检测HIV抗体的影响因素。方法：以双抗原夹心法对HIV抗体进行检测，分析在不同血清、不同孵育方式、不同血清量、不同孵育时间及显色终止后不同时间段比色对测定结果造成的影响。结果：对HIV抗体的影响因素主要包括不同血清量、不同孵育时间及加终止液后不同时间段比色。结论：双抗原夹心法检测HIV抗体时的主要影响因素包括血清量减少、孵育时间缩短及加终止液后的比色时间延长等。

【关键词】双抗原夹心法；HIV抗体；影响因素

【中图分类号】R37【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）01-0149-02

艾滋病又称为获得性免疫缺陷综合征，该病由免疫缺陷病毒引起，临床上以特异性HIV抗体诊断作为HIV感染的主要依据[1-2]。在本次调查中我院旨在重点分析双抗原夹心法检测HIV抗体的影响因素。现报告如下。

1.材料与方法

1.1试剂与仪器

试剂：HIV抗体第三代（双抗原夹心法）诊断试剂盒，HIV抗体质控血清，由北京万泰有限公司生产提供。仪器：RT-6100酶标分析仪，RT—300自动洗板机，Hw1型电热恒温水浴箱。

1.2方法

1.2.1样品来源：阴性抗体来源于健康体检者，阳性抗体来自于我市疾控中心，并经灭活处理。

1.2.2非溶血、溶血稀释样品的制备：取HIV阴性样品，处理后分离非溶血血清与溶血血清，后用该血清对HIV抗体阳性血清进行倍比稀释，测定溶血样品Hb浓度，同时对非溶血样品与溶血样品的相关情况进行比较。

1.2.3非脂浊、脂浊稀释样品的制备：取HIV阴性样品，处理后得到非脂浊、脂浊血清，后用该血清对HIV抗体阳性血清进行倍比稀释，测定各样品TG含量，同时对非脂浊、脂浊稀释样品的相关情况进行比较。

1.2.4HIV抗体阳性样品的制备：取若干HIV阴性样品，离心分离血清，后于各血清内加入不同量的HIV抗体阳性血清，稀释成不同浓度的HIV抗体阳性样品。对各样品进行不同方式的孵育、不同血清量比较、不同孵育时间比较与显色终止后不同时间段比色比较。

1.3统计学处理

本次所得数据以SPSS14.0统计学软件进行分析处理，计数资料采用卡方检验，计量资料采用均数_+标准差表示，以P<0.05差异具有统计学意义。

2.结果

2.1非溶血样品与溶血样品比较

由结果可知，非溶血样品与溶血样品倍比稀释后的HIV抗体A值配对t检验比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2非脂浊与脂浊样品的比较

由结果可知，非脂浊与脂浊样品倍比稀释后的HIV抗体A值配对t检验比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.3不同孵育方式对HIV抗体检测的影响

选取12份HIV抗体阳性样品，每份平行测定2孔。其中一份经水浴箱内培养，另一份经培养箱内培养，两组样品其余各培养条件均相同。由结果可知，两组A值配对t检验比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.4不同血清量和不同孵育时间对HIV抗体检测的影响

选取30份HIV抗体阳性样品，每份平行测定2孔。一组（正常组）血清100μl，孵育30min，一组（对比1组）血清50μl，孵育30min；一组（对比2组）血清100μl，孵育20min。三组样品其余培养条件均相同，由结果可知，正常组与对比1组进行A值配对t检验比较差异有统计学意义(P＜0.05)，正常组与对比2组进行A值配对t检验比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.5加终止液后不同时间段比色A值比较

挑选出A值在0.074～3.001之间的样品60份，加入终止液后在不同时间段比色，进行A值测定，配对t检验，由结果可知，立即比色与比色5min比较差异无统计学意义(P＞0.05)，其余10min、15min、20min、25min、30min比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

3.讨论

在本次调查中，溶血实验对结果造成的影响主要在于红细胞溶血后，其所释放的游离Hb具有过氧化物酶的活性，可吸附于反应孔上，进而使得检验结果呈假阳性。在抗体阳性非溶血与溶血稀释样品中，当其比例为1:32时，A值并未出现明显变化，这可能因酶标反应板孔包被物的浓度是一个相对的定值有关。脂浊对实验结果造成的影响主要在于脂浊可增大血清黏度，减慢分子运动速度，进而使得抗原抗体结合几率减慢，干扰测定结果。本次调查提示，一定程度的脂浊对检验结果未造成明显影响。不同孵育方式也未对结果造成显著影响，其主要因为抗原抗体反应在一定时间与温度下可达到反应平衡点，但笔者仍建议行水浴孵育，以保证反应温度达到平衡状态。

结果显示血清量的多少及孵育时间长短可对检验结果造成较大影响。其中血清量减少或温育时间降低均可降低A值。由本次调查结果可知，加入终止液后，避光保存反应板可减慢A值下降速度，因此在实验过程中需对其进行特殊保存[3]。

综上所述，若需排除其他干扰因素对HIV抗体检测质量造成的影响，可选择灵敏度较高的试剂，遵循基本操作原则，健全HIV抗体检测质量保证体系。

【参考文献】

[1]LeeSJ,NewtonPN.Useofthecorrelationcoefficienttocompareapoint-of-careantigentestagainstaquantitativesandwichenzyme-linkedimmunosorbentassayforthedetectionofcryptococcalmeningitis[J].ClinInfectDis.2012Dec;55(12):1744-5;authorreply1745-6.

[2]张桂芳.双抗原夹心法检测HIV抗体影响因素研究[J].现代检验医学杂志,2010,25(3):115-116.

[3]中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范[J].中国药物依赖性杂志,2004,13(4):318.