D3卵裂期胚胎玻璃化冷冻技术在IVF实验室中的应用

何玮李润李俊林杨梅张耀（通讯作者）

何玮李润李俊林杨梅张耀（通讯作者）

（绵阳市中心医院四川绵阳621000）

【摘要】目的：比较分析程序化冷冻复苏技术以及玻璃化冷冻复苏技术在D3卵裂期胚胎保存中的应用价值。方法：选取72例患者（共140枚胚胎）作为研究对象，对照组采用程序化冷冻复苏技术进行保存，观察组采用玻璃化冷冻复苏技术进行保存，对比两种冷冻技术的应用价值。结果：观察组的存活率为100%，完好率为98.57%，妊娠率50.98%，种植率为30%，明显好于对照组的91.43%、65.71%、35.29%，18.75%，差异明显，有统计学意义（P<0.05）。结论：与程序化冷冻技术相比，玻璃化冷冻技术对于D3卵裂期胚胎保存的应用价值更高，值得在临床上推广使用。

【关键词】玻璃化冷冻；程序化冷；胚胎保存

【中图分类号】R714.8【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2018）20-0060-01

卵裂期胚胎冷冻是辅助生殖技术中必不可少的重要方面，卵裂期胚胎冷冻技术的有效应用可以帮助患者在一个超促排卵排周期完成多次移植，从而有效提高单个助孕周期的累积妊娠率，同时可以最大程度地减少胚胎的浪费。本文应用回顾分析法对本院生殖中心2017年8月—2018年4月本院生殖中心进行冻胚复苏移植的72例患者（共140枚胚胎）进行冷冻复苏的具体临床资料进行分析，旨在比较分析程序化冷冻技术以及玻璃化冷冻技术在D3卵裂期胚胎保存中的应用价值。

1.资料与方法

1.1一般资料

选取2017年8月—2018年4月本院生殖中心进行冻胚复苏移植的72例患者（共140枚胚胎）作为研究对象，按照冷冻技术的区别分为观察组和对照组，每组均70枚胚胎，其中对照组共34例患者，年龄24～39岁，平均年龄（32.67±3.32）岁；内膜厚度平均（9.21±1.59）mm；移植个数平均为（2.31±0.68）个。观察组共38例患者，年龄25～40岁，平均年龄（32.84±3.29）岁；内膜厚度平均（8.97±1.38）mm；移植个数平均为（2.29±0.71）个。两组患者的年龄、内膜厚度以及移植个数等一般资料无明显差异，不具有统计学意义（P>0.05），可以进行对比分析。

1.2方法

1.2.1对照组对照组的患者使用程序化冷冻复苏技术，具体操作概述如下：

（1）在室温环境下，使用PBS与HSA的混合液、0.5MPROH溶液、0.1MPROH溶液、1.5MPROH溶液、1.5MPROH溶液-0.1M蔗糖溶液，对胚胎进行脱水[1]。

（2）将胚胎置入麦管中，然后放入冷冻仪，以-2℃/min的速度下降到-7℃，然后静止保持5min。5min后进行植冰，再以-0.3℃/min的速度下降到-30℃，然后以-50℃/min的速度下降到-150℃，静止保持10min后，置入液体氮之中进行保存。

1.2.2观察组观察组的患者使用玻璃化冷冻复苏技术，具体操作概述如下：

（1）使用日本加藤公司的玻璃化冷冻试剂，将胚胎放入ES液滴中5～15min，观察胚胎形态变化，当胚胎皱缩再次膨胀到最大程度，迅速将胚胎移入VS液滴。

（2）吸取少量VS液，并在1min内装管浸入液氮进行保存。

1.2.3解冻

（1）对照组：室温环境下，将胚胎从液体氮中取出，首先进行反脱水处理；将胚胎的解冻培养基，从室温环境下在恒温板上缓慢升温到37℃，观察复苏情况，然后将存活胚胎使用激光进行辅助孵化，孵化完成后置入37℃，含有5%二氧化碳气体的培养箱中，等待移植使用[2]。

（2）观察组：使用KITZATO玻璃化解冻液，迅速拿出载杆将其盛放胚胎面平行浸入复温至37℃的TS液滴中1分钟后，从TS液移入DS液放置3min；随后继续转移至WS1和WS2中各5min，观察复苏情况，然后将存活胚胎使用激光进行辅助孵化，孵化完成后置入37℃，含有5%二氧化碳气体的培养箱中，等待移植使用。

1.3观察指标

分别统计两组的片胚胎存活率、胚胎完好率、妊娠率、种植率，作为评价两种冷冻保存技术的指标。

1.4统计学方法

使用版本为SPSS19.0的统计学工具，对研究过程中记录的各种统计数据资料进行计算和处理，计量资料采用（x-±s）表示，计数资料采用（n，%）表示，分别用t和χ2进行检验，P<0.05具有统计学意义。

2.结果

观察组解冻胚胎70枚，存活70枚，完好胚胎共计69枚，妊娠周期19例，种植胚胎共计21枚；对照组解冻胚胎70枚，存活64枚，完好胚胎共计46枚，妊娠周期12例，种植胚胎共计12枚，具体的数据统计结果见表。

3.讨论

临床研究证实，卵裂期胚胎冷冻技术的有效应用可以帮助患者在一个超促排卵周期完成多次移植，从而有效提高累计妊娠率，同时可以最大程度地减少胚胎的浪费，减少胚胎移植数，预防严重卵巢过度刺激综合征等。

通过对照试验发现，观察组的存活率为100%，完好率为98.57%，妊娠率为50.98%，种植率为30%，明显好于对照组的91.43%、65.71%、35.29%、18.75%，差异明显，有统计学意义（P<0.05）。表明玻璃化冷冻能明显提高胚胎复苏率和胚胎利用率，获得更好的临床妊娠结局。

综上所述，与程序化冷冻技术相比，玻璃化冷冻技术对于D3卵裂期胚胎保存的应用价值更高，值得在临床上推广使用。

【参考文献】

[1]郑群,程兆俊,邹立波,等.玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对人卵裂期胚胎冷冻复苏效果及临床结局的比较[J].中国优生与遗传杂志,2016(1):118-119.

[2]姚观平,杨名慧,钱正利,等.玻璃化冷冻D3卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植与冷冻囊胚的临床结局比较[J].现代医药卫生,2017,33(17):2580-2583.

通讯作者：张耀（1964-），女，汉族，硕士，主任医师，生殖内分泌，邮箱[e-mail]