基因和化疗药物联合用药对肝肿瘤治疗疗效的研究

李瑞

李瑞

（山东省济宁市第一人民医院山东济宁272000)

【摘要】目的：探讨基因药物与化疗药物联合用药对治疗肝肿瘤的疗效是否有增强效应。方法：将DOX插入到pORF-hTRAIL,形成pORF-hTRAIL-DOX复合物,多靶点不同机制联合治疗肝肿瘤，检测诱导细胞凋亡效率评价疗效。结果：联合给药诱导肿瘤凋亡效率显著高于单药组讨论相比单一基因治疗或者化学治疗，基因药物和化疗药物的联合治疗具有不可比拟的优势。

【关键词】肝肿瘤；联合用药；TRAIL；DOX

【中图分类号】R735.7【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）06-0059-02

GenesandusedincombinationwithchemotherapydrugstostudytheefficacyoflivertumorsLiRui.

TheFirstPeople'sHospitalofJiningCity,ShandongProvince,Jining272000,China

【Abstract】ObjectiveToexploregenedrugsandusedincombinationwithchemotherapydrugsonthecurativeeffectoftreatmentoflivertumorenhancementeffect.MethodsInsertDOXtopORF-hTRAIL,formingpORF-hTRAIL-DOXcomplex,multipletargetsfordifferentmechanismcombinationtherapyoflivertumorandapoptosisinducedbydetectingefficiency,evaluationofcurativeeffect.ResultsJointdruginducedapoptosisoftumorefficiencyissignificantlyhigherthansingledruggroup.ConclusionsComparedtoasinglegenetherapyorchemicaltherapy,andchemotherapydrugscombinationtherapy,hastheincomparableadvantage.

【Keywords】Livertumor;Combination;TRAIL;DOX

肿瘤细胞具有一定的调节性，临床上长期给予单一的药物，肿瘤细胞会产生耐受性，导致药物失去肿瘤治疗作用，特别是单纯的化学疗法，普遍存在多药耐药的弱点[1-2]。联合用药可以有效预防肿瘤细胞出现耐受性，提高药物的治疗作用[3]。此外治疗效率的提高可以降低临床所需药物剂量，进而降低对人体正常组织的毒副作用。治疗基因与化疗药物联合用药，因其基于不同机制作用于不同靶点，不仅可以有效抵抗耐受性，还可以产生协同的治疗效果[4]。

1.材料与方法

1.1材料

RPMI1640培养基、胎牛血清，购自Gibco，美国；pORF-hTRAIL肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体质粒，购自InvivoGen，美国；DOX，购自北京华奉联博有限公司，中国；AnnexinV-FITCApoptosisDetectionKit凋亡检测试剂盒，购自南京凯基生物科技发展有限公司，中国。

1.2靶向药物的合成

定量称取NHS-PEG-MAL，溶于PBS8.0，浓度为5mg/ml.按照PEG:PAMAM10：1(mol/mol)的比例，室温搅拌反应2h，PEG上的NHS基团和PAMAM表面上的伯胺特异反应，生成PAMAM-PEG。T7溶于PBS7.0中，浓度为2mg/ml，按照T7：PAMAM5：1(mol/mol)的比例，将T7与PAMAM-PEG室温避光搅拌反应24h，制得PAMAM-PEG-T7.

1.3体外凋亡诱导效果评价

实验分组：（1）空白对照组，control；（2）PAMAM-PEG-T7/pORF-hTRAIL-DOX；（3）PAMAM-PEG-T7/pORF-hTRAIL；（4）PAMAM-PEG-T7/pGL2-DOX；

当细胞密度达到70～80%左右后且状态良好时，分别加入上述各组纳米载药系统，剂量以PAMAM计，每空15μg，200μL，孵育2h，用新鲜完全培养基替换掉药液，继续孵育，48h后去除培养基，加入AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂，孵育15min，洗掉，加入新鲜培养基，采用流式细胞仪对各组给药系统诱导的细胞凋亡进行定量。

2.结果

2.1AnnexinV-FITC/PI双标法流式细胞术检测细胞凋亡情况

如表所示，TRAIL基因DOX纳米载药系统（78.19%～86.18%）和对照基因DOX纳米载药系统（76.19%～93.33%）诱导肿瘤凋亡效率显著高于TRAIL基因纳米载药系统（36.87%～48.22%），差异具有显著性（P＜0.05）。

3.讨论

DOX可自主插入双链DNA中并选择性与双链中5'-GC-3'或者5'-CG-3'结合形成紧密结合的复合物[5-6]，这与DOX诱导细胞凋亡的机制相似，DOX正是由于可以自由插入到细胞核内的DNA中引起DNA断裂而诱导肿瘤细胞凋亡。同时基于静电吸附的原理PAMAM-PEG-T7包封pORF-hTRAIL-DOX复合物并没有改变DNA与DOX之间的稳定的复合作用，而且由于符合机制不同，pORF-hTRAIL和DOX可同时稳定共存于PAMAM-PEG-T7/pORF-hTRAIL-DOX纳米载药系统之中。

【参考文献】

[1]DuesbergP,LiR,SachsR,FabariusA,UpenderMB,HehlmannR.Cancerdrugresistance:thecentralroleofthekaryotype[J].Drugresistanceupdates,2007,10(1):51-58.

[2]WangC,ChenT,ZhangN,YangM,LiB,LiiX,CaoX,LingC.Melittin,amajorcomponentofbeevenom[J].JournalofBiologicalChemistry,2009,284(6):3804-3813.

[3]WiradharmaN,TongYW.Self-assembledoligopeptidenanostructuresforco-deliveryofdrugandgenewithsynergistictherapeuticeffect[J].Biomaterials,2009,30(17):3100-3109.

[4]LiuY,BryantsevVS,DialloMS,GoddardliiWA.PAMAMdendrimersundergopHresponsiveconformationalchangeswithoutswelling[J].JournaloftheAmericanChemicalSociety,2009,131(8):2798-2799.