辛伐他汀对急性肺栓塞兔炎细胞因子的影响

杨永张艳敏梁明亭骆峰武蕾李义波

山东省聊城市人民医院252000

摘要：目的：探讨辛伐他汀对急性肺血栓栓塞症兔血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-1β（IL-1β）的影响。方法选用30只新西兰健康白兔，随机分为对照组、模型组、辛伐他汀干预组。采用兔自体血栓回输法建立急性肺栓塞模型。采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-1β的浓度变化。结果栓塞后3小时，模型组TNF-α、IL-1β浓度（5.52±0.99ng/ml，183.06±30.43pg/ml）与对照组（2.16±0.63ng/ml，94.26±8.57pg/ml）、辛伐他汀干预组（4.20±0.88ng/ml，146.09±21.07pg/ml）比较有显著统计学意义（p<0.01，p<0.01）。栓塞6小时两者浓度基本达基线水平。结论急性肺血栓栓塞后，血清TNF-α、IL-1β浓度升高；辛伐他汀可降低急性肺血栓性栓塞血清TNF-α、IL-1β水平。

关键词：动物模型；细胞因子；辛伐他汀

[Abstract]ObjectiveToexplorethechangesofserumtumornecrosisfactorα（TNF-α）interleukin1β（IL-1β）andeffectofsimvastatinonacutepulmonarythromboembolism（APTE）rabbits.MethodAPTEmodelswereestablishedbyinjectingautologousbloodclotsintorightatriumbyfemoralvein.30healthyzelanianrabbitswereselectedandpidedintothecontrolgroup（n=10），modelgroup（n=10）andsimvastatingroup（n=10）randomly.ThechangesofTNF-αIL-1βinthebloodserumweretestedwithanenzyme-linkedimmunosorbentassay（ELISA）.ResultAt3hourpointafterembolization，TNF-αIL-1βofmodelgrouparrivedat5.52±0.99ng/ml，183.06±30.43pg/mlwhichwerehigherincomparisonwiththose（2.16±0.63ng/ml，94.26±8.57pg/mland4.20±0.88ng/ml，146.09±21.07pg/ml）incontrolgroupandsimvastatingroup.Thevaluesofmodelgroupwerehigherincomparisonwiththecontrolgroupandthesimvastatingroup（P<0.01，P<0.01）.ConclusionAfterAPTE，cytokinesofTNF-αIL-1βincreasedobviously.Simvastatinmayinhibitthecytokines.AfterAPTE，anti-inflammatorytherapymaybecomeanimportanttreatment.

[Keywords]AnimalModel；Cytokines；Simvastatin

本研究通过自体血栓回输法复制肺血栓栓塞动物模型，探讨急性肺血栓栓塞兔血清中TNF-α、IL-1β浓度变化及辛伐他汀对其的影响。

1资料与方法

1.1动物分组

健康新西兰白兔30只（山东大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK20040013），雌雄不限，体重（3.2±0.3）kg，月龄4－6个月，随机分为对照组、模型组、辛伐他汀组，每组10只。制模前治疗组饲喂辛伐他汀（舒降之）10mg·kg-1·d-1四周，模型复制成功后，继续饲喂至实验结束。

1.2动物模型的制备

称取兔体重，用苯巴比妥钠150mg/kg腹腔注射麻醉后置于固定架上，在腹股沟区剪毛，用碘伏局部消毒，沿股动脉走向刺股静脉成功后，将5F鞘管扩张鞘经股静脉插至右心房，将预先制备好的栓子注入，每次注入栓子0.5ml，并用2ml生理盐水冲注，防止栓子嵌留在鞘管中，每隔5min重复注入，栓子总量1ml/Kg。对照组以相同方式注入等量生理盐水。通过导管注入造影剂及病理切片证实肺栓塞模型复制成功。

1.3实验方法

每组于栓塞前1小时、栓塞后1小时、3小时、6小时、12小时、24小时取血1ml，用4℃低温离心机以3000r/10min离心，收集上清液。采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-α、IL-1β的变化，操作按试剂盒说明书进行。

1.4形态学观察

实验结束时处死家兔，开胸取肺组织，观察肺血管中栓子的形态及分布。于栓塞区取肺组织，10%甲醛固定，石蜡包埋，切片HE染色，光镜下观察肺组织的病理变化。

1.5统计学处理

统计学数据用均数±标准差（）表示，组内变化资料用SAS8.1统计软件进行单因素方差分析，有统计学意义后，再用SNK-q检验进行样本均数的两两比较，P<0.05有统计学意义。

2结果

2.1各组血清指标结果（见表1、2）

2.2肺组织病理变化结果模型组和辛伐他汀组可见到肺表面凹凸状，肺膨胀不全，有肺萎陷、散在暗红色灶性出血现象。肺动脉内均见多处血栓，栓子结构致密。肺泡萎陷，呈肺不张现象，部分肺泡水肿，肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润和少量红细胞渗出液。部分镜检可见肺静脉淤血现象。辛伐他汀组虽有上述病理变化，但炎性反应减轻。对照组兔肺未见上述病理变化。（见下图）

3讨论

肺栓塞的发生、发展是涉及细胞因子网络的多种炎症介质参与的病理生理过程，目前的研究尚不十分清楚。在鼠的肺栓塞模型中发现，肺缺血及肺动脉高压可导致鼠肺中促炎细胞因子的表达并由此造成了促进炎症反应的环境[1]。在急性肺损伤动物模型中发现，TNF-alpha，IL-1beta在血浆及肺组织中均有高表达，同时观察到肺组织充血、水肿，肺泡塌陷及大量炎细胞浸润。动物实验观察到，肺栓塞后血清TNF-alpha，IL-1beta水平显著增加，早期行血液净化可降低它们的水平，有利于改善肺的气体交换及氧合功能。本研究发现，急性血栓性肺栓塞早期血清TNF-α、IL-1β水平明显升高，与文献报道的肺损伤后两者升高相一致，进一步提示TNF-α、IL-1β参与了急性肺损伤的过程。

本实验观察到了栓塞后模型组TNF-α、IL-β明显升高，而辛伐他汀组与同期模型组比较，TNF-α、IL-β浓度较低，且有统计学意义（P<0.05），提示辛伐他汀有抑制急性肺栓塞后促炎细胞因子TNF-α、IL-β的作用，但关于其具体机制需进一步探讨。

目前研究发现炎症反应与肺血栓栓塞的发生、发展密切相关，涉及到多种细胞因子和介质的参与，而且细胞因子和各种介质的相互作用还不清楚，仍需要我们在今后的科研与临床实践中进一步研究探讨。本研究的实验结果为辛伐他汀抑制急性肺栓塞后TNF-α、IL-β的水平提供了理论依据，为临床急性肺栓塞后抗炎治疗提供新思路，抗炎治疗可能是治疗急性肺栓塞的有效途径之一。

参考文献：

[1]JohnZagorski1，JacobDebelak，MichaelGellar.ChemokinesAccumulateintheLungsofRatswithSeverePulmonaryEmbolismInducedbyPolystyreneMicrospheres.Heart2011；97：1695-1699