不同方法检测对乙型肝炎病毒表面抗原的结果分析

崔建萍

（黑龙江省大兴安岭阿木尔林业局职工医院黑龙江加格达奇165302）

【摘要】目的：探讨乙型肝炎病毒表面抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金免疫层析试验(GICA)法进行比较。方法：对50例标本进行乙型肝炎病毒表面抗原检测，采取抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金免疫层析试验(GICA)方法的阳性率、敏感度及特异度进行对比分析。结果：抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)阳性率为44.0%，阴性率为56.0%；胶体金免疫层析试验(GICA)阳性率40.0%，阴性率60.0%。ELISA阳性率高于GICA法的阳性率。结论：GICA法操作简便、快速，可作为初筛，ELISA技术是我国各层医疗单位抗原抗体检测的重要应用技术。

【关键词】乙型肝炎病毒；表面抗原；胶体金免疫层析法；酶联免疫吸附试验

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2018）18-0110-01

乙型肝炎病毒(HBV)是乙型肝炎的病原体，乙型肝炎病毒呈全球性流行，病毒标志检测，目前应用最为广泛，乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg)是最有价值的HBV感染标志。乙型肝炎病毒携带者HBsAg可持续阳性甚至终身携带[1]。主要检测方法包括酶联免疫吸附试验法(ELISA)和胶体金免疫层析法(GICA)，现对两组检测方法对乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg)的结果进行对比分析如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

选取我院2016年6月—2017年2月期间收治的确诊的乙型肝炎病毒感染患者50例，对患者血液标本进行检测。

1.2方法

血液标本采用3400rpm离心20min，提到上清液。

ELISA方法：试剂盒，2～8℃中避光保存，有效期6个月。试剂盒必须经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签试剂。从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液按使用说明书要求稀释。加入待测标本每孔50μl，并设HBsAg阳性对照2孔，HBsAg阴性对照2孔，空白对照1孔。加酶结合物，每孔50μl，空白对照孔不加，充分混匀，在37℃孵育30min。手工洗板，弃去反应板条孔内液体并拍干；用洗涤液注满每孔，静置5～10秒，弃去孔内洗涤液并拍干，如此反复5次，拍干。洗板机洗板，选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干[2]。先加显色剂A，每孔50μl；再加显色剂B，每孔50μl；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。每孔加入终止液50μl，混匀进行终止反应。利用酶标仪进行读数，采用空白孔进行数据校零，单波长选择450nm，双波长选择450/630nm，读取各孔OD值。

胶体金免疫层析法(GICA)：检测用肉眼判断，如显色判为阳性；否则为阴性。

2.结果

抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)阳性22例，阳性率为44.0%，阴性28例，阴性率为56.0%；胶体金免疫层析试验(GICA)阳性20例，阳性率40.0%，阴性30例，阴性率60.0%。ELISA阳性率高于GICA法的阳性率。

3.讨论

乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性表明现症HBV感染，即急性或慢性乙型肝炎病人或乙型肝炎病毒携带者，但HBsAg阴性不能完全排除HBV感染，因为有可能是S基因突变株存在。乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)由S基因编码产生，S基因突变会使HBsAg亚型发生改变[3]。PreS区的基因突变株可能保持了穿入肝细胞的能力，但却很难被清除，因而可能与HBV慢性感染有关，有些个体接种乙型肝炎疫苗后产生抗-HBs，但仍可能被乙型肝炎病毒的S区基因突变株感染，所在突变会在宿主免疫系统中避开。特异性免疫治疗有诱发乙型肝炎病毒变异的可能，P区的突变经常会导致复制缺陷，复制水平的降低。

HBsAg是乙型肝炎病毒感染血清中最早出现的标志物，HBsAg阳性表示存在HBV感染。HBsAg在血清中的存在时间一般小于6个月，自限性感染一般为1～20周，多数为1～6周，急性肝炎5～20周。慢性感染HBsAg阳性维持时间相当长。如果HBsAg持续存在6个月以上，一般认为处于携带状态，机体清除病毒的可能性很低。HBsAg因常与HBV共存，故将其视为传染性标志[4]。单纯HBsAg只有抗原性，没有感染性。HBsAg阴性时不能完全排除HBV感染的存在。有时，HBsAg和抗HBs可存在同一血清中，这种类型发生在大约10％～20％的慢性乙肝患者中。这并非由于人为的原因，而是由于HBsAg发生变异，抗HBs不能完全中和，有细微的差异。这时，HBsAg有诊断意义，抗HBs并无预后意义。

应用试剂前应摇动均匀，将1～2滴充去，进行垂直滴加，要用力均匀。对于存入冷藏室取出的试剂盒应放置室温30分钟以上，使温度平衡后再进行检测。剩余部分应及时进行封存，放回冰箱内进行贮藏以备下次应用。在洗板时请不要使用用过的吸水纸反复。使用的试剂要使用相同批号。结果判断要求须在10分钟内完成。封片的胶纸不可以反复使用。对于试剂应视为是有传染性物质，需要按传染病实验室检查规程进行操作。HBsAg阳性表明存在现症HBV感染，但HBsAg阴性不能排除HBV感染，因为可能有S基因突变株存在。

【参考文献】

[1]傅真.两种方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较[J].医药前沿，2015(13):99-100.

[2]高云霞.不同方法检测乙型肝炎病毒表面抗原结果比较分析[J].检验医学与临床，2012，09(9):1103-1104.

[3]贺江.不同方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的结果分析[J].国际检验医学杂志，2014(9):1164-1165.

[4]张润清.三种方法检测乙型肝炎病毒表面抗原阳性结果的分析[J].临床和实验医学杂志，2015(4):330-332.