Ang-2在原发性肝癌组织中的表达及临床病理研究

杨铭唐艳

杨铭唐艳(湖南省永州职业技术学院附属医院消化内科湖南永州425100）

【摘要】目的研究促血管生成素-2（Ang-2）在原发性肝癌组织中的表达及临床病理临床病理学的相关性。方法应用免疫组化ABC法分别检测35例肝癌组织、31例相应癌旁组织和10例正常肝脏组织中Ang-2的表达情况，并分析其临床病理学特征的相关性。结果Ang-2在正常肝组织中不表达,在肝癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织和正常组织(P<0.05)；Ang-2在肝癌组织中的表达与病理分级、门静脉癌栓及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)，但与患者的性别、年龄及肿瘤直径无相关性(P>0.05)。结论Ang-2在原发性肝癌中的高表达，其表达与病理学分级、门静脉癌栓及淋巴结转移呈正相关，提示其在原发性肝癌的发生、发展起一定作用。

【关键词】原发性肝癌Ang-2临床病理

原发性肝癌(primaryhepatocarcinoma,PHC)是指发生于肝细胞或肝内胆管细胞的癌症，是最常见且恶性程度最高的肿瘤之一[1],且该病的发病率有上升趋势。虽然诊断和治疗技术的进步使得肝癌患者的生存率有了较大提高，但术后转移与复发是影响生存率的主要因素[2，3]。本实验通过研究Ang-2在原发性肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的表达水平,并结合临床病理学资料加以分析，从而为肝癌的防治提高理论依据。

资料与方法

1.资料病例来源为永州职业技术学院附属医院及永州市中心医院2010年5月一2011年8月经外科手术的原发性肝癌患者。所有病例均经病理证实。PHC35例，男19例,女16例,年龄38-70(51.31±13.16)岁;其中31例相应癌旁组织（距癌组织5cm以上，经病理证实无癌细胞浸润);按Edmondson分级标准：I级5例，Ⅱ级8例，Ⅲ级14例，lV级8例:肿瘤直径小于5cm者的肝癌14例，大于等于5cm者的肝癌21例；门静脉或者肝静脉及其分支有癌栓形成者15例，其余未发现癌栓形成者20例；有淋巴结转移者11例，无淋巴结转移者24例;所有患者术前均未接受化疗和放疗治疗。选取10例同期因外伤切除的肝脏组织标本为正常对照组。

2.方法

(1)免疫组化检测采用ABC法，操作按说明书进行。以北京中杉金桥生物技术有公司提供的阳性切片作为阳性对照,以磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照，其余步骤相同。

(2)结果判断标准Ang-2主要表达位于胞浆或胞膜,以着棕黄、棕褐色颗粒为阳性细胞。阳性染色强度判断:细胞无染色记0分；细胞呈浅棕色，为弱阳性，记1分；细胞染成棕色，并无背景染色，或细胞呈深棕色、有浅棕色背景，为中等阳性，记2分；细胞呈深棕色无背景着色，为强阳性，计3分。400×光镜下观察5个不同的视野计数阳性细胞数:无阳性细胞表达，计0分；阳性细胞表达≤25%，计1分；25%＜阳性细胞≤50%，计2分；阳性表达数在50%以上，为强阳性，计3分。两项得分相乘:0分为阴性表达(-)；l分为弱阳性表达(+);2分为中等阳性(++);3分为强阳性(+++)。(+～+++)为阳性表达。

(3)统计学处理用SPSSl6.0统计软件进行t检验、X2检验和Speannan相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1.Ang-2蛋白在正常肝组织、癌旁组织及肝癌组织中的表达

Ang-2蛋白在正常肝组织中没有表达,在肝癌组织中阳性表达明显高于癌旁组织,其比较差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)

表1Ang-2在肝癌组织、癌旁组织及正常组织中的表达

2.Ang-2在肝癌组织中的表达与临床病理之间的关系

Ang-2蛋白的阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤直径无明显相关性（P>0.05），而与肝癌的病理学分级、门静脉癌栓及淋巴结转移呈正相关（P<0.05）（见表2）。

表2Ang-2在肝癌组织中的表达与临床病理之间的关系

讨论

原发性肝癌是高浸袭性的恶性肿瘤。早期症状不明显，手术切除率不高,转移及复发率较高，而且大多数患者就诊较晚，已经失去手术机会;非手术治疗效果不确切并对病人毒副作用大，导致肝癌整体预后差，疗效欠佳。因此探索肝癌转移、复发和发生发展的机制，寻找早期诊断、预测转移与复发的标记物，对其肝癌的诊断和治疗具有重要意义。

许多研究表明[4-6]，肿瘤的生长需要充足的血液供应。肿瘤血管发生由局部大量的诱导和抑制新生血管生成的因素所控制。在诱导肿瘤新生血管生成的因子中，最近鉴定出的促血管生成素(Angiopoietin)成为研究的热点。促血管生成素是位于血管内皮细胞上的特异性酪胺酸激酶受体Tie2的天然配体。促血管生成素-2(Angiopoietin-2)表达于血管重建部位，竞争性抑制促血管生成素-1(Angiopoietin-1)与Tie2受体结合，使该受体的磷酸化受阻，促进血管结构的改变,在血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）的共同作用下使血管内皮细胞与周围间质细胞的结合松弛,从而促使内皮细胞增殖形成新的血管[7]，产生拮抗Angiopoietin-1的血管稳定作用。Ang-2还能促进肝细胞癌的迅速发展,在鼠肝细胞癌模型中通过体内基因转染表达Ang-2后肿瘤血管发生了抑制,提示Angs/Tie2系统在肝癌细胞的新生血管生成中起作用,抑制Angs/Tie2信号转导有可能为治疗肝细胞癌提供新的方法[8]。

本实验结果显示，Ang-2蛋白主要表达于癌细胞胞浆中。35例患者的肝癌组织中Ang-2蛋白阳性表达率为54.3%，癌旁组织阳性表达率为9.68%,正常肝组织未检测到表达。Ang-2蛋白在肝癌中的阳性表达率明显高于癌旁组织（P<0.05）,癌旁组与正常组比较（P<0.05）,提示Ang-2参与了肝癌的发生发展。同时发现肝癌中Ang-2蛋白的表达与患者的年龄、性别、肿瘤直径无明显关系（P>0.05），而与门静脉癌栓、病理学分级及淋巴结转移均成明显正相关（P均<0.05）,即在Ang-2高表达的肝癌组织门静脉癌栓和淋巴结转移明显增加，提示Ang-2参与了肝癌的发生发展,对肝癌细胞的侵袭与转移起着一定作用。许多研究显示[9，10]Ang-2具有促进肿瘤血管生成的作用，转染Ang-2基因SMMC7721肝癌细胞具有促进皮下种植肿瘤血管生成的作用，而且其肿瘤生长速度明显快于未转染组。因此我们认为Ang-2有可能在肿瘤血管生成中起到重要作用。肿瘤形成时机体局部微环境的缺氧状态以及肿瘤细胞分泌的某些因子均可以促进Ang-2的合成[11],我们已知缺氧状态是引起血管内皮细胞生长因子（VEGF）增多的原因之一,因此可以推测Ang-2和血管内皮细胞生长因子（VEGF）的协同作用促进了新生血管的形成。机体或肿瘤对氧气和营养物质的需要促使Ang-2和血管内皮细胞生长因子（VEGF）的合成增加,进而促进新生血管形成以满足需要。本研究提示Ang-2参与了肝癌的生长和转移，有望成为肝癌治疗的一个新的耙点，但Ang-2参与肝癌的生长和转移、细胞凋亡及血管发生的分子机制尚需进一步研究。

参考文献

[1]叶胜龙，秦叔逢，吴孟超，等.原发性肝癌规范化诊治的专家共识，临床肝胆病杂志,2009,25(2):83-92.

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