PCR检验与细菌培养法在阴道细菌检验中的应用对比

朱旭峰

朱旭峰

（山西省汾阳医院山西汾阳032200）

【摘要】目的：研究对比荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术与细菌培养法在阴道细菌Ｂ群链球菌（GBS）中的检验效果。方法：2014年8月到2015年8月在我院接受阴道细菌检验的孕妇患者3200例,采用PCR检查法与细菌培养法同时进行阴道细菌Ｂ群链球菌（GBS）检查，观察比较两种方法检出率的情况。结果：3200例患者中，PCR检测100例阳性，阳性率3.12%，且经省临检中心验收合格；而细菌培养法检测出20例阳性，阳性率0.63%；PCR的阳性检出率明显高于细菌培养法，且差异有统计学意义（P<0.05）。结论：应用PCR检验法检验阴道细菌Ｂ群链球菌（GBS），其检出率较高，且准确率达标，值得临床推广应用。

【关键词】PCR检验；细菌培养法；Ｂ群链球菌（GBS）

【中图分类号】R37【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）13-0242-02

Ｂ群链球菌（GBS）又称无乳链球菌，是一种革兰阳性球菌，可感染女性的生殖道，且孕期妇生殖道感染率远高于非孕群体[1-3]。当孕产妇感染GBS病菌后，可造成其胎膜早破与羊膜腔感染，通过生殖道垂直传染于新生儿，严重威胁着围产期妇女及新生儿的身体健康。因此，对妊娠晚期妇女进行GBS的筛查，以便有效降低围产期的感染或对患者实施相应的治疗，控制疾病的进展。故研究对比荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术与细菌培养法在阴道细菌Ｂ群链球菌（GBS）中的检验效果，旨在为临床提供更好的检验方法，现报道如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

2014年8月到2015年8月在我院接受阴道细菌检验的孕妇患者3200例，年龄为23～37岁,平均年龄为(31.45±7.41)岁，孕周在18～36w，平均孕周为(28.78±9.41)w。所有患者均知情同意，并排除取样前一周使用抗菌药物或阴道局部其它用药者。

1.2方法

1.2.1标本采集先擦去患者的外阴分泌物，将用阴道直肠拭子取标本，每位患者各取出两份分泌物，并分别标记为细菌培养和GBS核酸检测。

1.2.2标本检验细菌培养法组采用细菌培养法检验，将拭子上的细菌接种于5%羊血培养基中（接种时菌液在培养皿应尽量均匀地涂开），在37℃培养箱内进行24小时培养后，当培养基有出现明显的菌落后，挑选灰白色、露滴状的菌落，用梅里埃ATB半自动微生物鉴定药敏仪以确定为B族链球菌。PCR组采用荧光PCR检验：标本登记后4℃冰箱保存，检测前在拭子管中加入清洗缓冲液1ml，高速震荡2min，得到标本悬浮液；13000r/min离心5min，弃上清；再加1ml清洗缓冲液，13000r/min离心5min，弃上清，沉淀用100ul清洗缓冲液重悬，加入提取固形物，高速震荡5min破碎细胞，95℃干浴2min，立即冰浴5min，13000r/min离心1min，上清用于扩增。所有开盖操作在B2级生物安全柜中进行，其余操作步骤和PCR反应条件按说明书进行，并采用泰普生物科学技术有限公司B族链球菌核酸检测试剂盒（闽食药管械生产许第20110184号）。GBS阳性判断标准：FAM荧光信号有明显S形扩增曲线，CT值小于33，TexasRed(内参)CT值小于40，且本批实验阳参、阴参检测结果符合预期。本院PCR实验室经省临检中心验收合格。观察比较两种方法检出率的情况。

1.3统计学方法

本文采用SPSS17.0软件统计分析，计数资料采用χ2检验，P<0.05说明差异有统计学意义。

2.结果

PCR的阳性检出率明显高于细菌培养法，且差异有统计学意义（P<0.05），详见表。

表两种方法检测GBS的检出率统计表

3.讨论

近年来GBS在围产期及产科感染中逐年升高，严重威胁着孕妇及新生儿的健康，已被列为围产期感染的主要病菌之一。当孕妇免疫力下降时，GBS可易感染孕妇生殖道，进而引起胎膜早破与羊膜腔感染，可造成孕晚期流产、早产、孕妇菌血症等，还能通过垂直传播造成新生儿患败血症、肺炎等[2]。相关报道显示，不同国家地区的妊娠妇女的GBS感染率不同，而我国的为3.4%～15.8%[3]。因此，采用适当的检查方法积极检验妊娠妇女GBS的感染情况，以便采用有效的治疗方式控制感染情况及病症进展，对减少母婴感染或改善其健康状况至关重要。

细菌培养法与PCR检查法是临床上阴道细菌检验的主要方法，其中细菌培养法被誉为阴道感染病菌检验的金标准，并得到广泛的应用。但随着现代技术的发展，今年来PCR检验法较细菌培养法更具有优势，其准确性更高，在阴道感染病菌检验中得到更广泛的应用[4]。然后这两种方法在检测GBS感染中的研究相对较少，因此本文注重研究两种方法检验GBS的效果。研究表明，3200例患者中，PCR检测100例阳性，阳性率3.12%，并经省临检中心验收合格；而细菌培养法的阳性率为0.63%；PCR的阳性检出率明显高于细菌培养法（P<0.05）。这表明应用PCR检验法检验阴道细菌Ｂ群链球菌（GBS），其检出率较高，且准确率达标，值得临床推广应用。

【参考文献】

[1]SchragSJ,ArnoldKE,MohleboetaniJC,etal.Prenatalscreeningforinfectiousdiseasesandopportunitiesforprevention[J].ObstetGynecol,2003,102(4):753-760.

[2]汤洁,马向薇,张宁.孕妇生殖道B族链球菌及其他病原微生物感染情况调查[J].中国微生态学杂志,2010,22(10),942-943.

[3]陆庭嫣,沈俐,唐振华.不同培养基及B族链球菌增菌肉汤检测B族链球菌效果评价[J].检验医学,2015,30(9):890-893．

[4]许海涛.几种不同检验方法用于阴道细菌检验临床对比分析[J].当代医学,2014,20(34):51-52.