白芷川芎提取工艺研究

高丽新王丕明刘旭升李德成

山西药科职业学院山西太原030031

【摘要】目的：对白芷川芎提取工艺进行优选。方法：采用正交试验法，以欧前胡素、异欧前胡素、阿魏酸的含量为指标，对乙醇用量、提取次数、提取时间3种主要影响因素进行考察。结果：确定最佳工艺为：8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h。结论：该工艺提取效率高、稳定性好。

【关键词】正交试验法；欧前胡素；异欧前胡素；阿魏酸

TheresearchonextractionprocessoftheAngelicadahuricaandLigusticumwallichii

GaoLi-xinWangPi-mingLiuXu-sheng

（ShanxiPharmaceuticalVocationalCollege，Shanxi，Taiyuan，030031，China）

Abstract：Objective：TooptimizetheextractionprocessoftheAngelicadahuricaandLigusticumwallichii.Methods：Withtheimperatorin，theisoimperatorinandtheferulicacidasthemainindex，theorthogonalexperimentwasemployedtoinvestigatetheeffectsofthethreefactorsincludingthequantityofethanol、extractiontimesandextractiontime.Results：theoptimizedextractionconditionis8timestheamountof80%ethanolextract3times，eachtime1hours.Conclusion：Thisextractiontechniqueishighefficiencyandsteady.

Keywords：orthogonalexperiment；imperatorin；isoimperatorin；ferulicacid

白芷主要化学成分为香豆素类成分，香豆素类成分主要有欧前胡素、异欧前胡素，在白芷中香豆素类成分具有广泛的生理和药理作用[1]。魏玉平等[2]通过研究发现，用乙醇作为溶剂能有效提取白芷中的香豆素类成分。川芎主要化学成分有川芎嗪，阿魏酸，还有生物碱，有机酸及其他成分[3]，其中阿魏酸为主要活性成分之一。溶剂法是提取阿魏酸最常用的一种方法，杨广德等[4]通过研究发现，用40%的乙醇回流提取可以获得较高的提取效率。

《中国药典》2015年版一部收载的中成药制剂都梁丸、都梁软胶囊、都梁滴丸[5]都是由白芷和川芎两味中药经制剂工艺加工而成，临床用于风寒瘀血阻滞脉络所致的头痛，症见头胀痈或刺痛、痛有定处、反复发作、遇风寒诱发或加重。因此，研究白芷川芎提取工艺对都梁丸、都梁软胶囊、都梁滴丸的制备具有指导意义。

1仪器与试药

1.1仪器

电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）；AB204-N型精密分析天平（METTLERTOLEDO上海衡器有限公司）；Agilent1200高效液相色谱仪（自动进样器，DAD检测器，安捷伦公司）；干燥箱（上海实验仪器总厂）；中药粉碎机（上海淀久中药机械制造有限公司）；939薄层制板器（220V，50HZ）（重庆南岸贝尔德仪器技术厂）；BUCHI旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）；HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；SHZ-D型循环水式真空泵（河南巩义市英裕仪器厂）。

1.2试药

白芷、川芎两味中药（安徽亳州中信中药饮片厂）；欧前胡素（中国药品生物制品检定所，批号：110826-201013）；异欧前胡素（中国药品生物制品检定所，批号：110827-201008）；阿魏酸（中国药品生物制品检定所，批号：110773-201012）；含量测定所用试剂均为色谱纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1欧前胡素、异欧前胡素、阿魏酸高效液相含量测定方法及色谱条件

2.1.1欧前胡素、异欧前胡素、供试品溶液的制备及色谱条件[6]：

欧前胡素对照品溶液的制备：取欧前胡素对照品4.98mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得储备液。精密量取储备液1ml置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得欧前胡素对照品溶液。

异欧前胡素对照品溶液的制备：取异欧前胡素对照品4.67mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得储备液。精密量取储备液1ml置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得异欧前胡素对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密量取适量提取液（相当于原药材1g），50℃水浴挥至无醇味，残渣用甲醇少量多次转移至25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

色谱条件及方法：色谱柱为AgilentEclipseXDB-C18（5μm4.6×250mm）；填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-水（70：30）；流速为1ml/min；检测波长为254nm；柱温25℃；样品进样量为10μl；理论板数按欧前胡素计算应不低于3000。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。HPLC色谱图见图1、图2、图3、图4。

图4缺白芷阴性对照色谱图

2.1.2阿魏酸对照品、供试品溶液的制备及色谱条件[7]

阿魏酸对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品5.46mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得储备液。精密量取储备液1ml置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得阿魏酸对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密量取适量提取液（相当于原药材1g），50℃水浴挥至无醇味，残渣用甲醇少量多次转移至25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

色谱条件及方法：色谱柱为AgilentEclipseXDB-C18（5μm4.6×250mm）；填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-1%冰醋酸水溶液（30：70）；流速为1ml/min；检测波长为321nm；柱温25℃；样品进样量为10μl；理论板数按阿魏酸计算应不低于4000。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。HPLC色谱图见图5、图6、图7。

图7缺川芎阴性对照色谱图

2.2白芷、川芎80%乙醇回流提取工艺的优化

在单因素考察基础上，对影响回流提取工艺的主要因素：乙醇用量、提取时间及提取次数，按L9（34）正交表安排试验进行优化。考察指标：欧前胡素、异欧前胡素和阿魏酸的含量及浸膏得率，按照2.1项下方法进行含量测定，试验结果见表1、表2和表3。

表1因素水平表

注：总评分=总含量×0.8＋浸膏得率×0.2

表3方差分析表

注：F0.05（2，2）=19，F0.01（2，2）=99

结果分析：

由方差分析可知，提取次数（B）有显著性影响（P<0.05），乙醇用量（A）和提取时间（C）无显著性差异。由直观分析：由极差R的大小可知，因素影响的主次为：B>A>C，即提取次数>乙醇用量>提取时间。各因素K值大小分别为：A因素A3>A1>A2；B因素B3>B2>B1；C因素为C3>C2>C1，最佳提取工艺为A3B3C3，因乙醇用量和提取时间两因素无显著性，从节能及缩短工时考虑，最终选定最佳工艺为A1B3C1，即用8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h。

2.3工艺验证试验

按处方药材比，称取白芷药材粗粉80g，川芎药材粗粉20g，按照正交试验所得的最佳提取工艺（即用8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h），进行三次验证试验，按照2.1项下方法进行含量测定，并计算供试品溶液的浓度，结果见表4。

表4验证试验

由上表可知，3次验证试验结果稳定，表明该工艺稳定可行。

2.4白芷、川芎药材提取工艺研究结果

确定白芷、川芎药材的最佳提取工艺为：8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h。

3讨论

根据白芷、川芎药材中有效成分的性质，在单因素考察的基础上，通过正交试验进行提取工艺优化，对主要影响因素（乙醇用量、提取次数、提取时间）进行了筛选，得出药材的最佳提取工艺为：8倍量80%的乙醇，连续回流提取3次，每次1h。试验结果表明该工艺提取效率高、稳定性好，可为工业化生产提供参考。

参考文献：

[1]何开家，张涵庆.白芷化学成分及其药理研究进展[J].现代中药研究与实践，2008，22（3）：59-62.

[2]魏玉平，刘俊，颜小林，等.都梁丸提取工艺研究[J].中草药，2001，31（5）：349.

[3]李秋怡，干国平，刘炎文.川芎的化学成分及药理研究进展[J].时珍国医国药，2006，07.

[4]杨广德，梁明金，贺浪冲.川芎中阿魏酸的提取方法研究[J].中成药，2002，24（6）：418-420.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典.2015年版（一部）[M]，北京：中国医药科技出版社，2015：1325-1326.

[6]贾敏如，王梦月，等.HPLC测定13种白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].华西药学杂志，2003，18（5）：361-362.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典.2015年版（一部）[M]，北京：中国医药科技出版社，2015：41.

作者简介：高丽新（1982-），男，硕士，山西药科职业学院，研究方向：药物新剂型研究与开发。