高效液相色谱法测定茶叶中茶氨酸的含量

涂莉芸，陈宇，赵瑜

（云南白药集团股份有限公司； 云南 昆明 650500）

摘要 目的：建立高效液相色谱法测定茶叶中茶氨酸含量的测定方法。

方法：色谱柱月旭LP-C18(4.0×250mm，5μm)；以pH=3.0的三氟乙酸水溶液为流动相 ；检测波长为203mn，柱温35℃，流速1.0ml/min。结果：茶氨酸在0.1048μg～3.4920μg范围内线性关系良好，回归方程为y=7758.9x+24.308（r=0.9994）；平均回收率为102.6% ，RSD为0.22%。 结论：用高效液相色谱法测定茶叶中茶氨酸的含量，方法简便准确，结果准确，重现性好，可用于测定茶叶中茶氨酸的含量。

关键词 高效液相色谱法 茶氨酸 茶叶 含量测定

1.仪器与试药

高效液相色谱仪Agilent 1100；色谱柱：月旭LP-C18(4.0×250mm，5μm)；L-茶氨酸标准品，批号：LR20N54 ，由北京百灵威科技有限公司提供；所用甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯；供试品为绿茶。

2.方法与结果

2.1. 色谱条件 以pH=3.0的三氟乙酸水溶液为流动相 ；检测波长为203mn，柱温35℃，流速1.0ml/min。

2.2. 溶液制备

供试品液的制备：取粉末试样0.5g，精密测定，加入30ml水，在80℃的水浴锅上加热40min，冷却，离心，过滤后，滤液加水定容至50ml，试样溶液过0.45μm微孔滤膜，作为供试品溶液。

标准品储备溶液的制备：取L-茶氨酸标准品适量，精密称定，加水制成茶氨酸标准储备液（0.35mg/ml）。

2.3线性关系考察

分别精密量取标准品储备溶液0.3ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.5ml、10.0ml至10ml量瓶中，用水定容至刻度。即得浓度分别为0.01048、0.01746、0.03492、0.06984、0.15714、0.34920mg/ml的标准系列溶液。分别取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，标准品液浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果表明茶氨酸在0.1048μg～3.4920μg范围内线性关系良好，回归方程为y=7758.9x+24.308（r=0.9994）。

2.4.精密度试验

分别精密吸取浓度为0.15714mg/ml的茶氨酸标准品溶液10μl，按测定方法重复进样6次，测定峰面积值。各次测得的峰面积值分别是1285.1、1284.0、1279.7、1281.2、1282.2、1277.3，相对标准偏差小于2.0%，说明仪器精密度良好。

2.5.检出限和定量限的测定

精密量取浓度为0.001048mg/ml的标准品溶液2μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行进样，测得信噪比为4.3:1，仪器的最低检出限为0.002096ug。精密量取该溶液5μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行进样，测得信噪比为13.0:1，仪器的定量限为0.005240ug。

2.6.重复性试验

取绿茶1批，取供试品6份，依法测定。分别计算出茶氨酸含量，6次测定结果平均值为2.31mg/100g，相对标准偏差为0.69%，说明方法重复性良好。

2.7.回收率试验

采取全程加样法。取已知含量的绿茶1批，取6份，精密称定，按照100%浓度精密添加浓度为3.4919mg/ml的茶氨酸标准品储备液3.50ml，按含量测定方法测定，同时取茶氨酸标准品溶液，依法测定，计算回收率。平均回收率为平均回收率为102.6% ，RSD为0.22%，结果较满意，说明本方法准确性满足要求。

1-供试品色谱图 2-对照品色谱图

3、讨论：

在进行线性关系考察时，分别采用了标准中规定的用不同进样量做标准曲线和配制系列标准溶液做标准曲线的方法，结果发现用不同进样量做标准曲线，相关系数仅为0.996，线性关系不好，故采用了配制系列标准溶液的方法进行试验。

参考文献

[1] 保健食品检验与评价技术规范2003年版

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