简介:基于转基因作物的安全性考虑,在用于转化的表达载体上除了含有目的基因以及控制该目的基因表达的启动子和终止子外,最好不存在其它有可能存在安全性争议的DNA序列,由此培育的转基因植物可能将更易于被消费者所接受。本研究以pCAMBIA1300载体为基础,基因操作去除pCAMBIA1300质粒上的潮霉素抗性基因和花椰菜花叶病毒的35S启动子序列,构建了两种只含有水稻蜡质基因启动子引导蜡质基因反义片段的表达载体,p13AWY-1和p13AWY-2。其中p13AWY-1表达载体含有一个由水稻蜡质基因启动子、第一内含子、反义蜡质基因(Waxypro+intron1+anti-Waxy)的融合基因单元;而p13AWY-2表达载体含有两个正向排列的Waxypro+intron1+anti-Waxy融合基因单元。我们通过构建水稻反义蜡质基因安全性表达载体,试图为植物安全性表达载体的构建提供一种思路,为今后大规模商业化采用转基因技术改良农作物遗传特性提供安全的转基因方法。
简介:为获得南瓜ISSR最优扩增体系,为后续南瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以‘密本’南瓜为筛选体系材料,采用单因素试验,对ISSR反应体系的Mg2+、dNTP、Taq酶、引物和DNA浓度等5个因素进行优化。研究结果表明,南瓜ISSR25μL最佳反应体系为:2.5μL10×Buffer,2.0mmol/LMg2+,0.3mmol/LdNTP,1UTaq酶,0.48mmol/L引物,75ng的DNA。在此基础上,对筛选出的12条引物进行退火温度的优化,最终确定每条引物的最佳退火温度。利用该反应体系,选用引物891对85个南瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强、重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于南瓜的ISSR分子标记。
简介:以两个贵州地方辣椒品种:花溪辣椒和青岩辣椒的花药为培养对象,在以MS培养基为基本培养基,附加不同浓度的NAA和KT,并在部分培养基中添加0.4%的活性炭和50μmol/L的AgNO3的培养基中进行培养.这两个辣椒品种不同时期的花药在不同培养基上进行的胚状体诱导试验果表明:激素是影响辣椒胚状诱导率的重要因素.两种辣椒出胚率各不相同.在培养基P5(NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L)中的出胚率达到最高,分别为5.77%和3.68%.花溪辣椒在各种激素浓度的培养基上的出胚率均高于青岩辣椒;添加0,4%的活性炭能提高胚状体的诱导率;生长旺盛时的花蕾作培养材料出胚率较高.添加50μmol/LAgNO3或Vc能有效减轻辣椒花药培养中组织的褐化.