简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HAGLR通过靶基因微小RNA(miR)-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株(HS-746T、BGC823、SGC7901、MGC803)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中HAGLR的表达水平。选择HAGLR表达最低的细胞株分别转染阴性对照质粒(阴性对照组)和HAGLR高表达质粒(HAGLR组)。分别采用MTS法和划痕愈合实验检测转染后细胞的增殖情况和迁移能力。生物信息学软件miRcode数据库预测HAGLR的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证HAGLR与靶基因的结合。qRT-PCR检测HAGLR靶基因的表达。Western blot检测Hippo信号通路的表达。采用SPSS 21.0软件进行统计分析,组间比较应用t检验,多组间比较应用单因素方差分析。结果与GES-1细胞相比,胃癌细胞株HAGLR的表达水平均降低(均P<0.05),HAGLR表达最低的细胞株是SGC7901细胞(P<0.01)。HAGLR组和阴性对照组SGC7901细胞中HAGLR表达分别为1.03±0.13和9.75±1.10,阴性对照组HAGLR的表达水平明显低于HAGLR组(t=7.87,P<0.01)。与阴性对照组比较,HAGLR组SGC7901细胞的吸光度值明显降低(P<0.05),划痕愈合率明显减少(P<0.01)。miRcode数据库显示HAGLR与miR-93-5p存在互补结合位点。双荧光素酶报告基因实验显示HAGLR可互补结合miR-93-5p(P<0.01)。与阴性对照组比较,HAGLR组SGC7901细胞中miR-93-5p表达明显降低(P<0.01),Hippo信号通路蛋白表达明显降低(均P<0.01)。结论HAGLR在胃癌细胞株中呈低表达,HAGLR通过靶向负调控miR-93-5p抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和迁移能力。
简介:摘要目的探讨外泌体微RNA-93-5p(miR-93-5p)作为慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)早期诊断的生物标志物的可能性。方法选取2018年12月至2020年12月于南通大学附属医院诊断为CKD的患者(≥18周岁)和同期年龄匹配的健康志愿者,分为CKD组(160例)与对照组(70例),其中CKD组行肾活检者60例(包括糖尿病肾病、IgA肾病、膜性肾病各20例),以20例行肾切除手术的肾癌患者癌旁正常肾组织作为对照。采用实时定量PCR法检测血清、尿液外泌体miR-93-5p的表达水平,分析其与临床指标及肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估血清、尿液外泌体miR-93-5p诊断CKD的价值;采用荧光原位杂交技术(FISH)对不同病理类型CKD患者肾组织miR-93-5p进行定位定量分析。结果CKD组血清外泌体miR-93-5p表达低于对照组,尿液外泌体miR-93-5p表达高于对照组。Spearman秩相关分析结果显示,CKD患者血清外泌体miR-93-5p相对表达水平与血红蛋白呈正相关(r=0.70,P=0.04),与血肌酐(r=-0.57,P=0.03)、血胱抑素C(Cys-C)(r=-0.71,P=0.02)、血清β2微球蛋白(β2-MG)(r=-0.23,P=0.03)及RIF指数(r=-0.57,P=0.03)呈负相关;尿液外泌体miR-93-5p相对表达水平与血清β2-MG(r=0.89,P=0.01)、尿β2-MG(r=0.54,P=0.03)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)(r=0.35,P=0.02)及RIF指数(r=0.65,P=0.03)呈正相关。血清外泌体miR-93-5p、尿液外泌体miR-93-5p诊断CKD的ROC曲线下的面积分别为0.627(P<0.05)和0.741(P<0.05)。FISH检测结果显示,不同病理类型CKD患者肾组织内miR-93-5p表达水平均高于对照组,并且表达于肾小管内。结论血清、尿液外泌体miR-93-5p与肾小管间质损伤相关,对CKD诊断有一定参考价值,可作为CKD早期诊断的生物标志物。
简介:摘要目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-93-5p调控胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性及其机制。方法将抗miR-NC(anti-miR-NC组)、抗miR-93-5p(anti-miR-93-5p组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-93-5p(miR-93-5p组)、pcDNA-NC(pcDNA-NC组)和pcDNA-F-box富含亮氨酸重复蛋白5(FBXL5)(pcDNA-FBXL5组)转染至Capan-1胰腺癌细胞(购自中国科学院细胞库),将anti-miR-93-5p分别与si-NC、si-FBXL5共转染至胰腺癌细胞,标记为anti-miR-93-5p+si-NC组和anti-miR-93-5p+si-FBXL5组。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达;噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;荧光素酶报告实验检测miR-93-5p和FBXL5的靶向关系。采用t检验或单因素方差分析比较不同组间计量资料差异。结果吉西他滨组Capan-1胰腺癌细胞miR-93-5p表达低于对照组(0.32±0.29比1.00±0.10,t=6.650,P<0.05),FBXL5基因mRNA和蛋白表达高于对照组(mRNA为3.14±0.31比1.00±0.02,蛋白为1.12±0.12比0.40±0.03,t=19.710、17.076,P<0.05)。anti-miR-93-5p组胰腺癌细胞miR-93-5p、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、多药耐药基因相关蛋白1(MRP1)、细胞存活率和半数抑制浓度(IC50)低于anti-miR-NC组[0.35±0.04比1.00±0.11、0.45±0.05比1.15±0.12、0.33±0.03比0.75±0.08、(52.44±5.24)%比(97.22±10.03)%、(7.29±0.73) mg/L比(22.13±2.11) mg/L,t=16.660、16.154、14.747、12.667、19.940,P值均<0.05],裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)和细胞凋亡率高于anti-miR-NC组(0.85±0.09比0.39±0.04、16.27±1.63比4.25±0.43,t=14.012、21.391,P<0.05)。miR-93-5p靶向调控FBXL5基因表达。anti-miR-93-5p组胰腺癌细胞磷磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达低于anti-miR-NC组(0.25±0.03比0.75±0.08、0.38±0.04比0.89±0.09,t=20.176、12.399,P<0.05)。anti-miR-93-5p+si-FBXL5组胰腺癌细胞p-PI3K和p-Akt蛋白表达高于anti-miR-93-5p+si-NC组(0.66±0.07比0.32±0.04、0.79±0.08比0.42±0.05,t=16.433、19.128,P<0.05)。结论抑制miR-93-5p表达可增强胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性,其机制可能与miR-93-5p靶向调控FBXL5及PI3K/Akt信号通路有关。
简介:NUK儿童安全牙膏德国品质无氟温和配方,有效保护宝宝牙龈与牙齿本品为婴幼儿专用配方,不含氟、刺激性SLS、麸质、糖和人工甜昧剂,温和无刺激。保护宝宝萌出的第一颗小乳牙,温和清洁宝宝口腔。含木糖醇和维生素E,有效营养牙龈并预防蛀牙,清新的苹果香蕉味,让宝宝不抗拒刷牙。德国制造,原装进口,符合欧盟与国标标准。经典升级非同以往植村秀全新如胶似漆眼线笔2013年.植村秀推出第一款具有划时代意义的笔状眼线胶.并以其柔滑如胶、浓郁似漆的特点在眼线市场上拔得头筹。2017年。如胶似漆