简介：本研究探讨ICOS—Ig融合蛋白阻断ICOS—B7h信号通路对异基因反应性T淋巴细胞的作用和机制。建立稳定高表达ICOS—Ig的CHO细胞株．培养制备纯化的ICOS—Ig融合蛋白；以C57BL／6小鼠脾脏来源的CD4^＋淋巴细胞为反应细胞，BABL／C骨髓源成熟树突状细胞为刺激细胞，应用不同浓度梯度的ICOS—Ig干预，以相同浓度的人Ig作为对照。结果显示：获得的目标蛋白的分子量为54kD，内毒素含量〈10EU／ml。ICOS—Ig在≥10μg／ml时可显著减少DC刺激引起的异基因反应性T淋巴细胞的增殖效应（P〈0．01）。ICOS—Ig不影响T淋巴细胞的活化，ICOS—Ig浓度与CD4^＋T淋巴细胞的凋亡成正相关。单纯刺激组、ICOS—Ig10μg／ml和20μg/ml干预组的CD4^＋An—nexinV^＋P1^-细胞群的频率分别为15．1％、26．4％和33．6％。ICOS—Ig作用后，Th1细胞因子TNFα分泌降低，Th2细胞因子IL4分泌增加。结论：ICOS—Ig融合蛋白阻断ICOS通路可明显减弱异基因反应性T淋巴细胞的增殖反应，并改变Th细胞的极化，对CD4^＋T淋巴细胞的活化无影响，但可促进活化的T淋巴细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨四氯化碳诱导肝纤维化小鼠滤泡辅助性T细胞(follicular helper cells，Tfh)中可诱导共刺激分子(inducible costimulator，ICOS)的表达及ICOS阻断剂对白细胞介素(interleukin，IL)-21表达的影响。方法模型组(四氯化碳致肝纤维化组)与正常组BALB/c小鼠各40只，流式细胞仪分析测定不同阶段Tfh细胞的动态表达、Tfh细胞中ICOS的表达趋势及特征以及ICOS阻断剂处理后肝纤维化小鼠脾淋巴细胞中Tfh的IL-21的分泌水平。结果与正常组(0 W)CD4＋ T细胞中Tfh细胞群的比例相比，模型组CD4＋CXCR5＋ Tfh细胞群的比例逐渐上调，13 W达到峰值，20 W虽有所下调但仍保持较高水平[0 W：(7.52±2.30)%，8 W：(20.45±4.16)%，13 W：(27.83±5.51)%，20 W：(22.97±4.71)%]，差异有统计学意义(t值分别为8.56、9.62和8.34，P值均<0.05)。随着病程的进展，与正常组(0 W)相比，肝纤维化小鼠Tfh细胞群ICOS的表达水平逐渐上调，13 W达到峰值，20 W虽有所下调但仍保持较高水平[0 W：(6.45±2.04)%，8 W：(19.81±4.51)%，13 W：(41.20±7.17)%，20 W：(32.53±5.01)%]，差异有统计学意义(t值分别为7.63、13.19、13.64，P值均<0.05)。在13 W，用流式细胞术检测Tfh细胞群IL-21的表达水平，结果显示，与ICOS阻断剂非处理组相比，ICOS阻断剂处理组Tfh细胞群IL-21的表达水平显著下调，差异有统计学意义[(8.89±3.92)%比(0.03±0.02)%，t＝6.40，P<0.05]。结论肝纤维化小鼠Tfh细胞的数量和ICOS的表达显著上调，ICOS阻断剂可抑制Tfh细胞分泌IL-21，提示ICOS可能通过Tfh细胞调控肝纤维化的发生发展。

简介：Themainapproachtoreducegraftrejectionhasbeenfocusedonthedevelopmentofimmunosuppressiveagentsatpresent.Althoughthesestrategieshavereportedlyreducedgraftrejection,therehasbeenareciprocalincreaseinmoresevereimmunosuppressionandlethalinfections,aswellasseveresideeffects.BlockadeofcostimulatoryTcellresponsehasbeenprovedasoneofusefulstrategiestoreducegraftrejection.Furthermore,ithasbeenshownthatinfusionofdendriticcells(DCs)withapotentnegativeregulatoryabilityforTcellscouldprolongallograftsurvival.InthisstudymouseDCs(mDCs)weretransfectedwiththerecombinantplasmidpcDNA3.0containingmouseinduciblecostimulator-Ig(mICOS-Ig)cDNAbyelectroporation.ThetransientexpressionofmICOS-IginmDCcouldbedetectedbyELISAandSDS-PAGE.MouseICOS-IgfusionproteinexpressedinmDCandmICOS-Iggene-modifiedmDCcouldinhibitlymphocyteproliferationinmixedlymphocyteculture(MLC)invitro.Furthermore,mICOS-Iggene-modifiedmDCcouldinhibitlymphocyteproliferationinrecipientmice.TheseresultssuggestedthatmICOS-Iggene-modifiedmDCexertedinhibitoryeffectsonTcells,andmightbesuitablefortreatmentorpreventionofgraftrejectionandimmunopathologicdiseases.

简介：目的：立足于运动训练对运动员免疫功能的影响,就运动对ICOS分子表达的诱导作用及其生物学功能做一探索性研究。方法：随机抽取17～23岁运动员共35名为实验对象,建立人体运动免疫研究实验模型;运用密度梯度细胞分离法,获得运动员运动前、期间、运动后不同时段的外周血PBMC;运用细胞体外培养技术、MTT法和流式细胞术、RT-PCR技术,体外检测各时段T细胞活化增殖程度、T细胞亚群变化及T细胞表面ICOS及T细胞ICOSmRNA表达水平;将ICOS特异性配体GL-50与上调表达ICOS分子的T细胞体外共育,5天后ELISA法检测细胞培养液中IL-10水平,同时检测运动员运动前后血清IL-10、LI-2、IFN-γ水平。结果：运动可激发T细胞活化增殖,导致T细胞亚群变化;运动可诱导活化T细胞上调表达ICOS和ICOSmRNA;ICOS/GL50共刺激信号可刺激T细胞合成分泌IL-10;持续4用运动训练后,运动员血浆IL-10水平显著提高,IL-2、IFN-γ水平明显下降。结论：长期运动应激可诱导活化T细胞上调表达ICOS分子;ICOS分子具有加强T细胞合成分泌IL-10、诱导Th2细胞增殖分化的重要功能;ICOS/GL50共刺激信号诱导IL-10分泌、Th1/Th2失衡,是运动后机体对感染性疾病易感性增高的“运动性免疫抑制”现象的重要免疫学基础。

简介：目的探讨转染可诱导共刺激分子（inducibleco—stimulator，ICOS）基因对细胞因子诱导杀伤（cytokine—inducedkiller，CIK）细胞杀伤胆管癌细胞的作用。方法构建含ICOS基因的腺病毒载体并转染给CIK细胞（CIK—ICOS细胞组），单纯CIK及CIK—EGFP细胞为对照组，观察3组CIK细胞体外增殖与凋亡情况以及对胆管癌细胞的杀伤作用；ELISA法检测3组CIK细胞上清液中IFN-γ、IL-2及TNF-α的表达。建立胆管癌移植瘤的SCID小鼠模型，按随机数字表法将40只SCID小鼠分为生理盐水对照组、CIK、CIK—EGFP、CIK—ICOS细胞治疗组，观察转染ICOS基因的CIK细胞对小鼠胆管癌细胞的杀伤作用。结果CIK—ICOS细胞组体外增殖明显强于CIK及CIK—EGFP细胞组；培养第加天CIK—ICOS与CIK细胞凋亡率分别为0．69％和2.90％，第23天分别为0．89％和4．92％；在不同效靶比CIK—ICOS细胞组杀伤效应均显著高于CIK与CIK—EGFP细胞组（F=13．37，6．46，25．51，P〈0．05）；CIK—ICOS细胞组上清液中IFN-γ的浓度为（49．50±4．73）μg／L，显著高于CIK细胞组（30．53±3．73）μg/L及CIK—EGFP细胞组（30．12±2．64）μg／L（F=38．89，P〈0．05）。CIK—ICOS细胞治疗组小鼠肿瘤生长速度明显低于CIK与CIK-EGFP细胞治疗组，肿瘤坏死面积明显大于CIK与CIK—EGFP细胞治疗组，瘤内CIK细胞数量最多。结论CIK细胞在体内外均具有杀伤胆管癌细胞的作用。转染ICOS基因后，CIK细胞体外存活时间延长、增殖能力增强、IFN-γ的表达增多，其在体内外抗胆管癌作用明显增强。

简介：摘要目的探讨四氯化碳致小鼠肝纤维化病程中可诱导共刺激分子(inducible costimulator，ICOS)对辅助性T细胞(helper T cell，Th)22细胞极化的影响。方法模型组与正常组BALB/c小鼠各40只，流式细胞仪分析测定白细胞介素(interleukin，IL)-22＋CD4＋T细胞在脾脏中的表达以及Th22细胞中ICOS的表达趋势及特征。酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测脾淋巴细胞培养悬液中细胞因子中IL-22的水平。结果随着病程进展，模型组脾脏IL-22＋CD4＋T细胞比例较对照组显著上调[4 W：(6.23±2.45)%比(2.78±0.88)%；8 W：(16.05±4.32)%比(2.78±0.88)%；13 W：(22.10±5.50)%比(2.78±0.88)%；16 W：(17.34±4.87)%比(2.78±0.88)%；t值分别为5.475、10.640、7.948和6.651，P值均<0.05]；模型组Th22细胞中ICOS＋细胞的比例较对照组显著上调[4 W：(20.47±4.19)%比(5.22±2.18)%；8 W：(33.20±5.71)%比(5.22±2.18)%；13 W：(39.98±6.02)%比(5.22±2.18)%；16 W：(35.69±5.80)%比(5.22±2.18)%；t值分别为6.975、10.350、13.450和13.640，P值均<0.05]。肝纤维化模型组在四氯化碳注射13 W后IL-22的表达水平较对照组显著上调[(60.48±9.87)%比(26.39±7.27)%，t＝9.711，P<0.05)]。IL-22的表达水平与CD4＋IL-22＋ICOS＋细胞数成正相关(r＝0.2150，P<0.05)。结论Th22细胞及其作用因子IL-22很可能参与了肝纤维化的免疫应答，与肝纤维化的发生发展有关，ICOS可能是调控Th22极化的关键信号分子。

简介：摘要目的探讨可诱导共刺激分子(inducible costimulatory molecular, ICOS)和程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1，PD-1)蛋白在四氯化碳致小鼠肝纤维化中的动态变化。方法将80只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组和肝纤维化模型组，每组40只。流式细胞仪分析测定不同阶段滤泡辅助性T细胞(follicular helper cells，Tfh)群ICOS及PD-1的动态表达趋势及特征；酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测小鼠不同周期脾淋巴细胞培养上清中的相关细胞因子白细胞介素(interleukin，IL)-21，IL-33，转化生长因子-β1(transforming growth factor-β，TGF-β1)的分泌水平及小鼠血清中Ⅲ型前胶原肽(procollagen type Ⅲ，PCⅢ)的含量；分析PD-1+CD4+CXCR5+T细胞、ICOS+CD4+CXCR5+T细胞与肝纤维化标志物PCⅢ的相关性。结果与正常对照组相比，纤维化模型组中CXCR5+CD4+T细胞表面PD-1的表达比例均明显升高，并在13 W达到峰值，组间差异有统计学意义{(2.77±0.92)%比[8 W：(6.53±2.12)%，13 W：(27.47±5.15)%，20 W：(19.20±6.64)%]，t值分别为4.60、13.35、6.93，P值均<0.05}；CXCR5+CD4+T细胞表面ICOS的表达比例亦逐渐升高，13 W达到峰值，组间差异有统计学意义{(1.13±0.44)%比[(8 W：(13.28±3.85)%，13 W：(33.62±6.28)%，20 W：(21.50±5.83)%]，t值分别为8.87、14.60、9.85 ，P值均<0.05 }。随着病程进展，肝纤维化小鼠组CD4+CXCR5+T细胞群IL-33，IL-21，TGF-β1的表达从8 W开始上调，13 W达到峰值，20 W仍维持较高水平，且均显著高于对照组，组间差异具有统计学意义(IL-33：t值分别为5.85、18.47和10.54，IL-21：t值分别为10.03、13.34和13.60，TGF-β1：t值分别为9.23、19.69和15.40，P值均<0.05)。PD-1+CD4+CXCR5+T、ICOS+CD4+CXCR5+T细胞表达水平与PCⅢ的水平成正相关(r值分别为0.6278和0.6036，P值均<0.05)。结论肝纤维化慢性期ICOS+和PD-1+的循环Tfh细胞可能促进肝纤维化发病，IL-21和IL-33作为主要的细胞因子参与炎症进展。

简介：目的探讨2q33区段CD28及ICOS基因多态性与多发性硬化（MS）遗传易感性及病情严重程度的关系。方法以来白中国南方汉族人群的83名确诊MS患者（MS组）和110名非自身免疫性疾病患者及健康志愿者（对照组）为研究对象，外周静脉血提取DNA，利用PCR－RFLP技术、琼脂糖凝胶电泳技术分析检测扩增产物CD28及ICOS基因的多态性。免疫荧光双标记流式细胞学法检测2组患者外周静脉血淋巴细胞表面CD28及ICOS表达水平。结果MS组ICOS－2394位点TT基因型频率明显高于对照组（33．7％vs10．9％），T等位基因频率明显高于对照组（56．O％vs30．9％），差异有统计学意义（P＜0．05）。3个位点单核苷酸多态性问无明显联合效应。ICOS－2394多态位点TT基因型与原发进展型（PP）－MS发病相关，而CT基因型与继发进展型（SP）－MS发病无关。3个位点基因型及等位基因频率与MS急性期患病严重程度均无明显相关（P＞0．05）。，MS组外周血淋巴细胞表面CD28及ICOS的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论中国南方汉族人群ICOS．2394位点多态性与MS发病相关．其中TT基因型与PP－MS发病相关，而CT基因型与SP－MS发病无关，提示该基因为MS的易感基因。CD28基因多态性与MS患病无关。