简介:研制人线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)表达谱芯片,鉴定芯片的特异性和稳定性,完善芯片的制备和使用程序,优化实验参数,为线粒体功能研究提供物质基础及技术保障。以人mtDNA剑桥序列为标准,设计mtDNA编码的13种mRNA、2种rRNA和9种tRNA基因及蛋白产物定位于线粒体的核DNA(nDNA)编码的5种凋亡相关基因寡核苷酸探针。芯片点样仪点制芯片,进行荧光显示和洗脱,用其检测人宫颈癌上皮Hela细胞和人肾小管上皮Hc1细胞cDNA文库mtDNA编码基因及nDNA编码凋亡相关基因的差异表达情况。所点制的芯片扫描结果显示,样点分布均匀、清晰,规整度好,无漏点、连点。cDNA文库杂交鉴定结果显示,整张芯片荧光信号均匀一致,背景清晰,各基因重复样点杂交结果一致,各质控点能正常显示。成功制备了人mtDNA基因表达谱芯片,完善了该芯片的制备和使用程序,通过初步应用,证明所研制的人mtDNA基因表达谱芯片具有特异性高、稳定性好等优点,可用于不同组织或细胞样本cDNA文库mtDNA基因的差异表达分析。
简介:DNAcondensationisanimportantprocessinmanyfieldsincludinglifesciences,polymerphysics,andappliedtechnology.Inthenucleus,DNAiscondensedintochromosomes.Inpolymerphysics,DNAistreatedasasemi-flexiblemoleculeandapolyelectrolyte.Manyagents,includingmulti-valentcations,surfactants,andneutralpoorsolvents,cancauseDNAcondensation,alsoreferredtoascoil–globuletransition.Moreover,DNAcondensationhasbeenusedforextractionandgenedeliveryinappliedtechnology.ManyphysicaltheorieshavebeenpresentedtoelucidatethemechanismunderlyingDNAcondensation,includingthecounterioncorrelationtheory,theelectrostaticzippertheory,andthehydrationforcetheory.Recentlyseveralsingle-moleculestudieshavefocusedonDNAcondensation,sheddingnewlightonoldconcepts.Inthisdocument,themulti-fieldconceptsandtheoriesrelatedtoDNAcondensationareintroducedandclarifiedaswellastheadvancesandconsiderationsofsingle-moleculeDNAcondensationexperimentsareintroduced.
简介:Cancercellsdifferfromnormalcellsinvariousparameters,andthesedifferencesarecausedbygenomicmutationsandconsequentialalteredgeneexpression.Thegeneticandfunctionalheterogeneityoftumorcellsisamajorchallengeincancerresearch,detection,andeffectivetreatment.Assuch,theuseofdiagnosticmethodsisimportanttorevealthisheterogeneityatthesingle-celllevel.Dropletmicrofluidicdevicesareeffectivetoolsthatprovideexceptionalsensitivityforanalyzingsinglecellsandmolecules.Inthisreview,wehighlighttwonovelmethodsthatemploydropletmicrofluidicsforultrasensitivedetectionofnucleicacidsandproteinmarkersincancercells.Wealsodiscussthefuturepracticalapplicationsofthesemethods.
简介:摘要目的分析细胞DNA倍体分析技术与宫颈活检的联合应用在宫颈癌前病变诊断中的效果。方法以我院2013年12月~2014年12月收治的50例患者为研究对象,随机分为观察组和对照组,每组25例,其中对照组患者采用宫颈活检分析技术进行检测,观察组患者采用细胞DNA倍体分析技术与宫颈活检的联合技术进行检测,对比分析两种检测方式的诊断准确性。结果在阳性检测率方面观察组为12.0%,明显高于对照组的8%;以CINI作为宫颈癌前的病变标准,观察组患者筛查为阳性的病例癌前病变符合率为88%,显著高于对照组的72%,且两组数据差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在宫颈癌前病变诊断中,细胞DNA倍体分析技术与宫颈活检的联合应用的诊断效果明显优于单纯使用宫颈活检分析技术,值得在临床应用和推广。
简介:目的:通过对线粒体DNA1555/1494突变耳聋文献病例进行分析,总结患者听力学特点,探讨影响耳聋程度的相关因素。方法以“线粒体DNA1555/1494突变”和“感音神经性聋”为主题词,检索中文CNKI、万方、维普数据库,英文PubMed数据库,进行文献回顾。对线粒体DNA1555/1494突变耳聋患者病例进行基本信息和听力学相关信息统计,按照性别、基因突变信息、是否应用氨基糖甙类抗生素、用药年龄、用药情况、发病间隔、发病年龄、单倍型、突变异质率以及耳聋程度等相关项目编辑excel表格,按需要导入SPSS19.0软件分析。结果共收集到符合要求的文献39篇,资料完整的线粒体DNAA1555G和C1494T突变携带者324例。线粒体DNAA1555G突变共285例,华裔254例,其他亚裔18例,非亚裔13例,线粒体DNAC1494T突变39例均为华裔。明确使用氨基糖甙类抗生素致聋230例,无氨基糖甙类抗生素使用发生耳聋92例。2例应用氨基糖甙类抗生素药物1年听力正常。统计分析发现用药患者的耳聋程度较未用药患者重(X2=25.414,P<0.05)。无论是否用药,发病年龄与耳聋程度有显著的负相关,而用药后发病间隔与耳聋程度无相关(R=0.054,P>0.05)。另外,线粒体DNA1555/1494突变异质率与耳聋程度显著正相关(R=0.823,P<0.05)。结论多种因素影响mtDNAA1555G/C1494T携带者的临床表现。对于线粒体DNAA1555G/C1494T相关耳聋进行早期耳聋基因诊断有重要的临床意义。对突变携带者,严禁使用氨基糖甙类抗生素。