简介:本文首次以吖啶橙为荧光探针建立了在线HPLC—DAD—MS……n-DNA—AO—FLD检测系统并应用于天然药物的活性成分研究中,该系统可以同时给出所测天然药物的指纹图谱、各色谱峰的紫外光谱、总离子流图,多级高分辨MS数据以及各化合物与DNA结合的活性图谱,能够对天然药物进行高效分离、结构鉴定和活性检测以及构效、量效关系和作用机理研究。本文采用该系统对紫草正己烷提取物进行了快速分离、结构鉴定和活性研究,证明5个萘醌类化合物具有明显的DNA结合活性;构效和量效关系研究表明,紫草萘醌化合物的母核能嵌插在DNA碱基对中,阻断DNA的复制,侧链上的羟基酰化能够促进与DNA结合,对活性有较大的影响。本文为天然药物中发现抗肿瘤药物提供了简便、快速、精密度高、稳定性好的研究方法。
简介:目的研究DNAIQ磁珠法结合MaxwellTM16自动仪对接触DNA提取的应用价值。方法151份案件接触DNA检材95℃裂解后,采用DNAIQ磁珠法结合MaxwellTM16自动仪提取DNA,然后进行DNA定量和STR分型检测,统计各种类型的接触DNA含量I、PCCT值和STR分型成功率。结果151份案件接触DNA检材中,除果核平均DNA获得量为9.51ng以外,其它接触检材的平均DNA获得量均大于10ng,烟蒂检验成功率最高为93%,果核检验成功率较低,为60%。所有DNA样品的IPCCT值均在27左右,纯度高。结论大部分接触DNA检材采用DNAIQ磁珠法结合MaxwellTM16自动仪可提取到足以进行STR分型的DNA。
简介:目的:脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,至今无有效的治疗手段。细菌Cp6DNA是引起脓毒症的主要病原分子。CpGDNA通过与TLR9结合,介导单核/巨噬细胞的活化,是介导脓毒症发生的重要途径。本研究以CpGDNA为靶点,从中药中定向分离具有拮抗CpGDNA和治疗脓毒症作用的活性物质。方法:(1)应用生物传感器技术、建立以CpGDNA为靶点的筛选抗炎中药的技术平台并对78种中药进行筛选;(2)利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析技术,从大黄中定向分离与CDGDNA具有较高结合活性的组分,并对得到的组分进行初步的活性评价,确定活性组分;(3)在体外实验中,测定活性组分与CpGDNA、lipidA的结合能力,观察活性组分对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264.7细胞分泌炎症介质的抑制作用,在体内实验中,观察活性组分对致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用。(4)利用反相HPLC技术对活性组分进行制备分离,获得活性单体化合物;(5)在体外实验中,检测单体化合物与CpGDNA和lipidA的结合能力.观察化合物对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264.7细胞分泌炎症介质的抑制作用。结果:(1)建立了以CpGDNA为靶点应用生物传感器筛选抗炎中药的技术平台;从78种中药中筛选出大黄等14种中药与CpGDNA具有较高结合能力;(2)利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析等技术从大黄水提物中定向分离得到与CpGDNA有较高结合活性大黄D组分;(3)在体外,大黄D组分与CpGDNA、LipidA均具有较高的结合活性,对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264.7细胞分泌TNF-α有显著的抑制活性,并呈现良好的量一效关系。在体内,大黄D组分对致死剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠有显著的保护作用,并呈现良好的量-效关系;(4)通过反相HPLC从D组分中分离得到单体
简介:目前临床上许多医疗单位仍采用巴氏分类法诊断宫颈细胞学涂片。随着TBS诊断方法的逐渐普及,越来越多的单位开始接受这一最新的诊断报告方式。本文将542例宫颈细胞学涂片以TBS诊断报告并结合DNA倍体分析,结果有78例经TBS检查细胞形态有异常改变,但其中只有一例可以诊断为恶性(考虑为CIS),其余77例均不能作出肯定的恶性诊断。将此78例患者再取材进行DNA倍体分析,结果有6例经DNA倍体分析仪分析为多倍体(DI>2),术后病理证实均为恶性,阳性检出率为TBS诊断报告结果的6倍。由此可见,在诊断宫颈细胞学时,以“TBS”结合DNA倍体分析,对宫颈癌的早期诊断更有帮助,阳性率及准确性更高。
简介:AventadorLP700-4还是延续了Lamborghini的一贯设计风格,显得粗犷而霸气,浑身充满了如蛮牛般的力量。而从整体感觉上,我们也能从其身上看到Murcielago、Renventon以及SestoElementoConcept的影子。
简介:Toll样受体家族的TLR9(Toll—LikeReceptor9)是巨噬细胞识别CpGDNA的模式识别受体,它可通过激活单核/吞噬细胞系统信号转导,活化NF—κB、AP-1,从而大量释放TNF-α、IL-1、IL-6和IL.12等多种前炎症细胞因子,引起急性炎症反应、脓毒症甚至休克、死亡。TLR9是Ⅰ型跨膜蛋白质,分为胞外区、跨膜区和胞内区三部分。TLR9胞外区由25个富含亮氨酸的重复序列(leucine—richrepeats,Lmrs)组成,与识别CpGDNA有关。其中的LRR2、5、8、ll序列后跟随有插入氨基酸序列,可能是与CpGDNA的结合位点或参与结合CpGDNA。但是,迄今为止,TLR9是如何识别CpGDNA、其识别位点在何处还不清楚,更不清楚TLR9识别CpGDNA的分子机制。因此,明确TLR9与CpGDNA的结合位点对阐明CpGDNA介导炎症的发生机制,并将其作为可能的新的药物靶点进行疾病防治具有重要意义。为此,在前期偶然发现转染TLR9胞外段LRRs能够抑制宿主菌生长现象的基础上,设计一系列实验,通过细菌生长抑制实验、细胞因子释放抑制实验和亲和力的测定,基本确定能够与CpGDNA高亲和力结合的TLR9胞外段LRR,在TLR9胞外段各个LRR中,LRRll是最有可能与cpGDNA结合的位点。
简介:摘要目的通过联合检测腹水端粒酶活性与流式细胞仪DNA异倍体检测,探讨两种检测方法在良恶性腹水鉴别诊断中的价值。方法收集良恶性腹水标本,使用端粒酶活性检测试剂盒检测端粒酶活性,使用流式细胞仪检测DNA异倍体。结果端粒酶活性检测和DNA异倍体检测诊断恶性腹水的敏感度分别为82.35%、78.43%,特异度分别为94.87%、97.87%。当同时联合两种检测方法,联合检测的敏感度可以达到96.07%,特异度和单个指标并无明显差异。结论端粒酶活性检测和DNA异倍体检测可以作为良恶性腹水鉴别诊断的有效方法。同时联合端粒酶活性检测和DNA异倍体检测可以增加恶性腹水的检出率。