简介:摘要目的分析不同作用机制端粒酶抑制剂分别作用于CNE2鼻咽癌细胞株后蛋白表达谱的变化。方法用EGCG等八种不同的端粒酶抑制剂分别作用于CNE2细胞,提取药物作用后细胞的总蛋白,运用基层辅助激光解析时间飞行质谱技术检测蛋白的变化,筛选共同差异蛋白。结果CNE2细胞经八种端粒酶抑制剂作用后,分别有14,26,27,23,31,42,26,30个蛋白低表达;分别有22,11,18,18,7,7,13,8个蛋白质高表达;均呈低表达的差异蛋白1个,相对分子量为2657.14Da,无共同高表达的差异蛋白。结论八种端粒酶抑制剂作用后,CNE2细胞表现出共性变化的蛋白。这些蛋白可能参与端粒酶活性的调控,可能是不同机制端粒酶抑制剂作用的共同靶点。
简介:目的研究ZD6474对鼻咽癌细胞株CNE2放射增敏作用。方法采用MTT法测定ZD6474的半数抑制浓度(50%inhibitionconcentration,IC50),克隆形成实验计算细胞存活率,拟合生存曲线计算放射生物学参数,流式细胞仪检测ZD6474联合放疗的凋亡率及细胞周期分布。结果单纯用药组,CNE2细胞的存活率随ZD6474浓度的增加而降低,其IC50约为2.15μmol·L^-1。ZD6474作用CNE2细胞24h后均见到放射增敏作用,增敏比为1.535±0.134。ZD6474或照射均可增加凋亡率,减少S期细胞比例及增加G2/M期细胞比例(P〈0.01)。结论ZD6474联合照射应用可提高cNE2细胞的放射敏感性并阻碍细胞增殖、促进凋亡和干扰细胞周期分布。ZD6474有望成为EGFR高表达CNE2细胞的放射增敏剂。
简介:Inordertostudythemechanismoftheeffectofheparinonapoptosisincarcinomacells,thenasopharyngealcarcinomacelllineCNE2wasusedtoidentifytheeffectofheparinonapoptosisassociatedwiththeexpressionofc-myc,bax,bcl-2proteinsbyuseofHoechst33258staining,terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnick-endlabeling(TUNEL),agarosegelelectrophoresis,andflowcytometry,aswellasWesternblotanalysis.TheresultsshowedthatheparininducedapoptosisofCNE2cellsincludingthemorphologicchangessuchasreductioninthevolume,andthenuclearchromatincondensation,aswellasthe“ladderpattern”revealedbyagarosegelelectrophoresisofDNAinaconcentration-dependentmanner.ThenumberofTUNEL-positivecellswasdramaticallyincreasedto33.6±1.2%from2.8±0.3%bytreatmentwithheparinindifferentconcentrations(10~40kU/L).Theapoptoticindexwasincreasedto32.5%from3.5%bydetectingSubG1peaksonflowcytometry.Westernblotanalysisshowedthatlevelsofbcl-2,baxandc-mycweresignificantlyoverexpressedbytreatmentwiththeincreaseofheparinconcentrations.TheseresultssuggestthatheparininducesapoptosisofCNE2cells,whichmayberegulatedbydifferentialexpressionofapoptosis-relatedgenes.
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简介:目的构建稳定过表达X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linkedinhibitorofapoptosisassociatedfactor1,XAF1)基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。方法分别将携带XAF1基因感染复数(multiplicityofinfection,MOI)为50的慢病毒稀释液。MOI为100的慢病毒原液和MOI为100的慢病毒原液加入终浓度为5μg/mL的聚凝胺(polybrene)转染人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光数量及强度评判转染效率,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-timequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction,qRT-PCR)和蛋白免疫印记法(westernblot)检测XAF1基因mRNA和蛋白的表达。结果慢病毒稀释液转染,约60%的细胞可观察到微弱荧光;慢病毒原液转染,约70%的细胞观察到较弱荧光;慢病毒原液加入5μg/mLpolybrene的转染效率较高,约90%的细胞观察到较强荧光。嘌呤霉素筛选上述转染效率最高的慢病毒原液加5μg/mLpolybrene组细胞,其成功将携带XAF1基因的慢病毒转入鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。qRT-PCR和westernblot进一步证实细胞株稳定过表达XAF1基因。结论慢病毒加polybrene转染可成功构建稳定过表达XAF1基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。
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简介:摘要目的研究ZD1839对鼻咽癌细胞株CNE2放射增敏作用。方法采用MTT法测定ZD1839的半数抑制浓度(IC50),克隆形成实验计算细胞存活率,拟合生存曲线,流式细胞仪检测ZD1839联合放疗的凋亡率及细胞周期分布。结果单药组,CNE2细胞的存活率ZD1839浓度的增加而降低,其IC50约为2.26μmol/L。联合组,ZD1839作用CNE2细胞24h后均见到放射增敏作用,增敏比为1.529±0.135。ZD1839或照射均可增加凋亡率,减少S期细胞比例及增加G2/M期细胞比例(P<0.01)。结论ZD1839联合电离辐射可提高鼻咽癌细胞的放射敏感性,其机制之一可能是ZD1839促进细胞凋亡、干扰细胞周期分布及下调Bcl-2蛋白表达。
简介:目的:探讨ebv-miRNA在低分化NPC细胞株C666-1(EBV+)和CNE-2Z(EBV表达水平随传代次数增加而逐渐降低)中的差异性表达进而分析其功能.方法:常规培养NPC细胞株C666-1和CNE-2Z,分别提取总RNA并进行质检;RT-PCR检测LMP-1和LMP-2AmRNA的表达以判断EBV的感染情况;miRNA芯片技术检测EBVmiRNAs的表达并对其表达谱进行差异性分析;荧光定量RT-PCR进行验证;复习文献了解ebv-miRNA调控的靶基因以了解其功能.结果:从C666-1和CNE-2Z两株细胞抽提的总RNA纯度高,A260/A280〉2.0,A260/A230〉2.1,RNA完整性好.C666-1具有比CNE-2Z更高的LMP-1和LMP-2AmRNA表达.ebv-miRNA表达谱的差异分析表明39个ebv-miRNAs中19个在两株细胞显著差异性表达;荧光定量RT-PCR结果证实ebv-miR-BHRF1-1和ebv-miR-BART14*在C666-1中表达升高而ebv-miR-BART8*表达降低,与芯片结果趋势一致;复习文献,EBVmiRNAs功能远不清楚,少数已知的靶基因涉及信号转导、转录调控、细胞凋亡、增殖、免疫反应和病毒DNA复制等方面.结论:ebv-miRNA在低分化NPC中具有差异性表达并广泛参与基因调控.不同NPC细胞中EBVmiRNA表达差异预示着基于ebv-miRNA的NPC个性化治疗的可能性.
简介:目的研究小干扰RNA(siRNA)对bcl-2基因表达的抑制作用。方法利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl-2基因为靶标的siRNA,通过脂质体将合成的siRNA转入A549和NCI—H460细胞株,以未转染细胞和转染bcl-2的反义药物G3139为对照,经MTF法检测siRNA对细胞生长的抑制,RT-PCR检测bcl-2mRNA水平,流式细胞仪检测细胞周期的改变和bcl-2蛋白表达,反应siRNA对bcl-2表达的抑制效应。结果siRNA组与对照组细胞存活率各时间点均有显著差异(P<0.05):
简介:目的探讨青蒿琥酯作用人肝癌细胞株HepG2后,对细胞凋亡的影响。方法常规培养人肝癌细胞株HepG2,设立空白对照组、青蒿琥酯不同浓度组(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml),对HepG2作用48h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,同时采用瑞氏染色法观察细胞凋亡;用RT-PCR检测caspase-3mRNA的表达,采用灰度分析比较表达的变化。结果青蒿琥酯(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml)处理HepG2细胞48h,呈浓度依赖性诱导细胞凋亡,且当青蒿琥酯浓度在6.25μg/ml以上时,各组凋亡率与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01),瑞氏染色后光镜下可见处理组细胞发生凋亡形态学改变。与对照组比较,各实验组caspase-3的表达显著增加(P<0.01)。结论青蒿琥酯能显著诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与增强凋亡相关基因caspase-3的表达有关。
简介:摘要目的探讨SH2B1对肺腺癌细胞株LTEP-a-2细胞增殖及运动能力的影响。方法采用RNA干扰技术建立稳定剔除SH2B1的肺腺癌细胞株LTEP-a-2,同时扩增同等滴度的空载病毒(GV-CMV)作对照。并用RT-PCR和WesternBlot方法检测转染效率,在此基础上采用细胞形态及核型分析、MTT法绘制细胞生长曲线、平板集落形成试验分析比较实验转染组、载体对照组细胞生长、凋亡的改变,对细胞的增殖能力进行鉴定;细胞划痕实验分析SH2B1对肺腺癌细胞株LTEP-a-2细胞爬行迁移运动的影响,用Trans-well实验分析SH2B1对肺腺癌细胞株LTEP-a-2细胞侵袭运动的影响。结果RNA干扰技术建立稳定剔除SH2B1的肺腺癌细胞株LTEP-a-2细胞SH2B1表达量明显下降。剔除SH2B1的肺腺癌细胞株LTEP-a-2细胞增殖显著下降(P<0.05)。划痕实验结果显示,实验转染组和载体对照组迁移细胞数目倒置显微镜下10个视野分别为349±121和867±187,实验转染组爬行细胞数目显著低于空载体组,P<0.05;Trans-well实验结果表明,实验转染组和载体对照组细胞透过滤膜的数目分别是129±88和278±107,实验转染组细胞穿过数目显著低于载体对照组,P<0.05。结论SH2B1促进肺腺癌细胞株LTEP-a-2细胞增殖和迁移运动能力。
简介:目的建立肝癌耐药细胞株,并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性。方法采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法诱导建立耐药BEL-7404人肝癌细胞株,并对亲代与耐药肝癌细胞株进行癌细胞基本特性、癌于细胞相关细胞学特性进行检测,用计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间与MTT法测耐药倍数;单个细胞成株培养、平板克隆形成实验、“球囊”细胞培养实验。结果耐药BEL-7404人肝癌细胞与亲本细胞相似,呈上皮样生长方式,但其中梭状细胞略多,耐药倍数为292倍;生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本BEL-7404人肝癌细胞,且倍增时间增加;耐药BEL-7404肝癌细胞克隆形成率、“球囊”细胞形成率均明显低于其亲本BEL-7404人肝癌细胞。结论低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成耐药肝癌细胞株,但耐药肝癌细胞株的癌干细胞特征并不明显。
简介:摘要目的为探讨CDX2在慢性粒细胞白血病中的表达情况,本实验应用RT-PCR方法检测慢慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞单个核细胞中CDX2mRNA的表达水平。方法慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞由郑州大学基础医学院干细胞中心惠赠和10例非恶性血液病患者的骨髓液,检测CDX2mRNA在慢性白血病中的表达情况。结果CDX2mRNA在慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞中高表达。结论提示CDX2与慢性粒细胞白血病的发生发展可能有关。