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  • 简介:人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)是一种以丝氨酸为活性中心的蛋白酶,它能使特异地与血栓中纤维蛋白结合的纤溶酶原转变为纤溶酶,从而选择性地溶解血栓中的纤维蛋白,因此在临床上具有重要的应用价值。为适于tPA基因在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的高效表达,将tPAcDNA片段从原来获得的重组质粒pMM6005中用HindⅢ和BamHⅠ酶切出,经Klenow酶补平后插入CMV启动子下游

  • 标签: 启动子 TPA CHO细胞 重组质粒 纤溶酶 表达质粒
  • 简介:CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2区、CH3区组成的融合蛋白,可以与B7结合,通过阻断B7与CD28的结合,从而阻断B7介导的T细胞活化必需的共刺激信号,可作为免疫抑制剂用于器官移植。将CTLA4Ig融合分子克隆到真核表达载体pCI-dhfr,并用脂质体方法转染到COS7和CHO-dhfr-细胞中,用氨甲喋呤筛选转染的CHO-dhfr-细胞。用RT-PCR、ELISA、细胞免疫荧光染色和Western-blot鉴定重组蛋白的表达。采用A蛋白纯化重组蛋白。

  • 标签: CTLA4Ig融合蛋白 CHO细胞 表达 免疫抑制剂
  • 简介:

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  • 简介:GongboisoneofthethreeChinesemountaineerswhoclimbedQomolangma,thehighestpeakoftheworld,fromthenorthernsideforthefirsttime.Nowadayshisson,GalsangCering,lastautumnsuccessfullyclimbedChoOyu,whichistheworld'ssixthhighestpeakat8.201meters.

  • 标签: Galsang Cering 登山运动员 生平 CHO Oyu
  • 简介:目的:通过弱化筛选基因二氢叶酸还原酶基因(dhfr),构建双顺反子全抗体表达载体,实现全抗体在CHO细胞中的高效表达。方法:将dhfr基因分为分别编码1-105和106~187氨基酸残基的2部分,分别通过linker与亮氨酸拉链GCN4融合,分别通过内部起始位点序列与抗体轻重链基因偶联,构建成2个双顺反子表达载体pIRESLZdhfr—H和pIRESLZdhfrL。用脂质体2000转染CHO-dhfr-细胞,用无次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷的IMDM筛选培养基筛选阳性克隆。结果:筛选到的阳性克隆表达水平为1.47-3.5μg/(106细胞·d),经氨甲蝶呤(MTX)梯度加压,在MTX浓度为5×10^-8mol/L时,表达水平达到11.5μg/(10^6细胞·d)。结论:构建了基于亮氨酸拉链二聚化基础的dhfr弱化方式的双顺反子表达载体,实现了全抗体在CHO—dhfr-细胞中的高效表达。

  • 标签: 双顺反子表达载体 二氢叶酸还原酶基因 弱化 全抗体
  • 简介:PM2.5引起的健康危害日益受到广泛关注,但其确切的损伤机理仍不完全清楚,目前也缺乏有效拮抗PM2.5损伤的天然活性物质。因此本文对北京市PM2.5造成CHO细胞的损伤作用及天然物质的拮抗作用进行研究,结果可为PM2.5污染治理和疾病的预防提供科学依据。通过CCK-8法测定细胞存活率;通过流式细胞仪测定细胞凋亡;用荧光探针DCFH-DA法测定ROS;提取细胞内总蛋白并测定其中SOD含量;以及通过WesternBlot法分别测定了p-akt/akt、p65及Bad的相对表达量。结果显示:(1)10~40μg·mL-1的PM2.5可明显降低CHO细胞存活率,并呈现极显著的剂量-效应关系(r=-0.964,P〈0.01);15μg·mL-1PM2.5可以显著增加细胞凋亡、引起细胞内ROS增加、SOD含量下降;p-akt/akt、p65表达量增加说明Akt通路与NF-κB通路均被激活。(2)20μmol·L-1阿魏酸、50μmol·L-1绿原酸和10μmol·L-1荭草素预处理可拮抗PM2.5引起的细胞存活率下降以及细胞凋亡率增加,同时降低细胞内ROS并增加SOD含量,下调p-akt/akt、p65及Bad的相对表达量。其中20μmol·L-1阿魏酸的保护作用最佳。结果说明,PM2.5引起的CHO细胞损伤与细胞凋亡与Akt和NF-κB通路的激活有关;三种天然活性物质具有拮抗PM2.5造成的细胞损伤的能力,其保护机理是通过其降低PM2.5引起的细胞内氧化应激反应,进而降低被PM2.5激活的Akt通路与NF-κB通路和下调Bad蛋白表达量来实现的。

  • 标签: 细颗粒物(PM2.5) 天然活性物质 细胞毒性 氧化应激 AKT信号通路 NF-ΚB信号通路
  • 简介:Thesurfaceofpolypropylene(PP)membranewasmodifiedbylowtemperatureplasmawithammonia.Theeffectofexposuretimewasinvestigatedbymeansofcontactanglemeasurement.Theresultsshowthatlowtemperatureammoniaplcsmatreatmentcanenhanceitshydrophilicity.Chinesehamsterovary(CHO)cellsattachmentonthemodifiedmembranewasenhancedandthegrowthrateonthemembranewasfasterthanunmodifiedone.

  • 标签: 聚丙烯 等离子体 CHO细胞 实验
  • 简介:构建了二氢叶酸还原酶(dhfr)选择基因启动子上游无增强子(cnhancer)的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)组合突变体FrGGI真核表达质粒pZLFrGGI。将pZLFrGGI酶切线性化,采用大剂量DNA电击介导法,转染dhfr基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-dhfr-)。用氨甲喋呤(MTX)筛选转染细胞。混合加压后,挑选克隆,在1×10-7mol/LMTX压力下,得到了表达水平达1500~2500IU/106细胞·24小时的细胞株。此细胞株表达水平稳定,形态良好,倍增时间为36小时,且有进一步提高表达水平的潜能,有望发展为工程细胞株。

  • 标签: 组织型纤溶酶原激活剂 突变体 基因表达 增强
  • 简介:目的:观察Kozak序列(+4G)对稳定转染的人淀粉样前体蛋白(hAPP751)-EGFP融合真核表达载体在CHO细胞中表达的影响,为APP的水解代谢研究提供细胞模型。方法:分别将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段亚克隆入pEGFP-N1表达载体,得到pEGFP-hAPP751(+4G)和pEGFP-hAPP751重组质粒,转染CHO细胞,通过G418筛选稳定转染细胞株,再用倒置荧光显微镜挑取绿色荧光强的细胞进行亚克隆,并观察融合蛋白的表达强度和细胞定位,最后用EGFP抗体通过Western印迹检测融合蛋白。结果:PCR、酶切和测序证明将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段分别连入了真核表达载体pEGFP-N1中;荧光显微镜下观察pEGFP-hAPP751(+4G)稳定转染细胞细胞膜和细胞质产生较强的绿色荧光,其中在细胞质中成不均匀颗粒状分布,Western印迹检测到相对分子质量约156000的融合表达蛋白,与预期相符;pEGFP-hAPP751转染细胞,其绿色荧光十分微弱且在整个细胞均匀分布,Western印迹检测到相对分子质量约26000的EGFP,但检测不到预期的hAPP751-EGFP融合表达蛋白。结论:Kozak序列(+4G)可以明显促进hAPP751的表达,获得稳定转染且高水平融合表达hAPP751-EGFP的细胞株。

  • 标签: Kozak序列(+4G) 人淀粉样前体蛋白751 增强型绿色荧光蛋白 阿尔茨海默病 真核表达
  • 简介:摘 要:重组人血小板生成素(rh-TPO)经CHO工程菌表达后,可调节巨核细胞形成有功能的血小板,用于治疗多种疾病引起的血小板减少症,但目前的培养系统与纯化方法较复杂且不能规模化生产等问题,亟需一种批量培养与蛋白纯化方法,所以本研究首先分别通过改变细胞培养基与补加营养物质培养细胞,并监测监测细胞活力、细胞密度及蛋白表达量,其次分别通过100L的反应器培养,最终监测蛋白表达量,结果表明,可培养高达100L的反应器体系,并获得90mg/ml的rh-TPO蛋白,这一优化提高了rh-TPO的生产,为批量的生产上市提供了理论基础。

  • 标签: 重组人血小板生成素 流加培养 病毒灭活 蛋白纯化 离子交换
  • 简介:摘要目的应用CHO细胞表达系统表达重组水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)gEΔ-Fc融合蛋白,为筛选重组带状疱疹疫苗候选抗原提供参考。方法将含有编码gEΔ-Fc基因的真核表达质粒转染CHO细胞,经MSX加压筛选和有限稀释法挑选单克隆,获得分泌表达gEΔ-Fc融合蛋白的CHO细胞株。MabSelect SuRe亲和层析纯化gEΔ-Fc融合蛋白,ELISA法对gEΔ-Fc融合蛋白与Fc受体结合进行鉴定,流式细胞术检测DC2.4细胞对抗原的吞噬效果。gEΔ-Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠后,ELISA法检测小鼠血清抗体效价。结果获得表达gEΔ-Fc融合蛋白的CHO细胞株;流式细胞术证明DC2.4细胞对gEΔ-Fc融合蛋白的吞噬强于gE;gEΔ-Fc融合蛋白可以诱导BALB/c小鼠产生高滴度的抗VZV抗体。结论应用CHO细胞表达的重组VZV gEΔ-Fc融合蛋白具有较好的免疫原性。本研究为筛选重组带状疱疹疫苗候选抗原提供了数据支持。

  • 标签: 水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白 融合蛋白 Fc受体
  • 简介:摘要目的探讨Cho缝合术在50例剖宫产产后出血中的作用。方法选取2012年3月—2013年3月收治的剖宫产产后出血50例产妇,随机分成对照组和治疗组,每组25例,对照组使用宫腔填入纱布止血法,治疗组采用Cho缝合术治疗。结果两组产妇在平均手术时间、术中出血量、输血例数、有效止血率、切除子宫例数、产褥病发生率观察指标具有显著的统计学差异(P<0.05)。结论Cho缝合术治疗剖宫产产后出血止血迅速、操作简单、并发症少,值得在临床上推广使用。

  • 标签: Cho缝合术 剖宫产 产后出血
  • 简介:【摘要】目的研究T-CHO、HCY、PA等血生化指标在急性脑梗死诊断中的价值。方法:筛选我院脑病科2019年5月~2020年6月入院的30例急性脑梗死患者作为研究组,并同期入院健康体检者30例作为对照组。对两组研究对象均进行静脉抽血。结果:研究组急性脑梗死的生化指标总胆固醇(T-CHO)、同型半胱氨酸(HCY)均比健康体检者的数值高。研究组前白蛋白(PA)比对照组的水平低。有统计数意义(P

  • 标签: 急性脑梗死 总胆固醇 同型半胱氨酸 前白蛋白
  • 简介:摘要目的探析ALB、TBA、CHO、CHE检测在乙型肝炎肝硬化中的变化及意义。方法选取2016年11月至2017年6月期间来我院接受治疗的60例乙型肝炎肝硬化患者为研究组,选取同期行健康体检的60例正常人为参照组,对两组受检人员的肝功能(ALB-白蛋白、TBA-总胆汁酸、CHO-血清胆固醇、CHE-血清胆碱酯酶)进行检测并比较。结果研究组ALB、TBA、CHO、CHE水平与参照组比较,差异明显(P<0.05)。ChildB级、ChildC级ALB、TBA、CHO、CHE水平与ChildA级相比,差异明显(P<0.05)。结论检测ALB、TBA、CHO、CHE等肝功能指标,可鉴别诊断乙型肝炎肝硬化患者,并判断肝脏损伤程度,临床意义非常重大。

  • 标签: 乙型肝炎 肝硬化 肝功能检测