简介:作为一个模式植物,烟草在植物分子生物学研究中发挥着重要的作用。总RNA的提取质量,对于基因表达、基因克隆、cDNA文库建立、RNA原位杂交以及转基因材料鉴定等分子生物学基础研究至关重要。尤其在进行基因克隆及cDNA文库时,只有高质量的RNA,才能保证cDNA第一链合成的完整性。由于烟草中糖类、蛋白质及次生代谢物的含量较高,因此,在应用TRIzolRNA提取试剂盒进行烟草总RNA提取时,所提取的RNA产物中的蛋白质及多糖等杂质含量偏高。因此,针对这一问题,我们对TRIzol法进行了改进,并获得了高质量的烟草总RNA。经琼脂糖电泳检测,利用该方法提取的烟草总RNA,条带清晰、无拖尾现象,28S与18S的比例约为2:1。紫外吸收值的测定表明,所提取的烟草总RNA的A260/A280的值基本达到了1.9以上,说明所提取的RNA的质量较高,可广泛应用于基因的克隆及基因的表达研究。
简介:摘要:流域概念包含集水区边界及其中的河网,是进行水文水资源等研究的重要基础,随着数字高程模型的完善,从数字高程模型提取流域边界及河网已经成为主流的流域数据获取方式。目前主流的流域提取方法一般在ArcGIS中展开,主要运用其中的空间分析工具下的水文分析工具包进行,但是ArcGIS提取流域的方法比较繁琐,主要包括七个步骤:数字高程模型加载、地形填洼、流向生成、累积流量计算、光栅河网链接、矢量河网生成、流域边界提取,步骤多容易出错,而且因为ArcGIS是32位软件,对内存访问有限制(3.2G以内),且不能发挥多核CPU性能,对于较大流域提取效率低下。本文介绍基于GlobalMapper的高效流域提取方法,只需用其中的流域提取工具并做少许参数设置就能完成,且因为GlobalMapper为64位软件,还能调用多核CPU,流域提取过程变得简单高效。本文以云南某小流域开展了流域提取试验,该流域面积213.3平方公里,流域提取以12.5米的数字高程模型为基础,用传统ArcGIS空间分析工具下的水文分析工具包进行提取要花30分钟以上,但是用GlobalMapper不到20秒就可完成。如果流域出口的确定有偏差还会造成提取失败,当调整流域出口后再次提取流域时,在GlobalMapper中只需要把原来提取结果删除再次提取就能完成。
简介:摘要目的建立一种油脂和食品中用甲醇将BHA、BHT溶解出来,在拟定的测定参数下,直接进样分离,检测的方法。方法采用C18(250×4.60mm)色谱柱,流动相为0.02mol/L乙酸铵-甲醇(955体积比),流速1ml/min,紫外检测波长280nm;进样量20μl;外标法定量。结果方法标准曲线线性良好,BHA回归方程为Y=2.127X-3.24,回归系数r=0.9997;BHT回归方程为Y=60.32X+0.70,回归系数r=0.9998。添加质量浓度为0.01%~1.0%时BHA的回收率为93.6%~103.9%,BHT的回收率为97.5%~108.5%。结论该方法操作简单、准确、回收率高,精密度良好,重现性好,可用于食用油、饼干等食品中BHA、BHT的测定。
简介:目的探索一种新的真菌DNA提取方法,该方法操作简便,提取效率高,耗时较短,应用范围广.方法将酶消化和Chelex-100提取DNA方法联合起来,配制一种新的DNA提取试剂.通过真菌ITS4和ITS5通用引物进行PCR,对新的DNA提取试剂同市售的Takaralysisbuffer在DNA提取方面的效能进行评价,同时对DNA浓度和纯度进行测定.结果实验所用34株真菌,自配试剂成功提取出32株真菌DNA;Takaralysisbuffer成功提出27株真菌DNA.对于两种方法都没能提出DNA的2株真菌,经液氮研磨破壁后,自制试剂均成功提取;而Takaralysisbuffer仅成功提取DNA1株.结论同市售试剂Takaralysisbuffer比较,自配DNA提取液提取DNA质量相对较高,可用于临床常见感染真菌的PCR诊断.对于某些真菌,提取DNA之前先进行菌体破壁是必要的.
简介:为探讨庙台槭不同组织DNA的高效提取方法,分别以叶片和果实为材料,以完全随机区组试验设计,设置不同浓度的β-巯基乙醇和不同浓度的PVP作为预处理,采用试剂盒法提取基因组DNA,提取后对基因组DNA进行浓度、分光光度值的测定以及PCR扩增,综合各项指标选择出效果最好的预处理方法,并进一步以CTAB法进行验证,之后应用于不同个体庙台槭的DNA提取中。结果发现:以庙台槭果实为材料,不需要预处理,提取的DNA即可满足下游实验需要;以叶片为材料,用0.5%β-巯基乙醇和1%PVP预处理能有效提高提取的DNA浓度和质量,经验证发现该预处理方法适用于CTAB法,且能够极显著地提高DNA提取的浓度和质量;进一步应用于所有132个庙台槭个体的总DNA提取,获得的DNA均能满足后续实验要求。本研究为进一步研究庙台槭遗传多样性等工作提供帮助,同时也能够为槭属其他植物的相关研究提供参考。
简介:建立了苯酚提取超高效液相色谱法(UPLC)同时测定新鲜烟叶中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和单磷酸腺苷(AMP)的分析方法。苯酚提取样品溶液中的ATP、ADP和AMP较稳定,不易水解,样品在2h以内各磷酸腺苷变化率小于10%。采用6‰三乙胺(pH=6.6)和甲醇作为流动相梯度洗脱,3种磷酸腺苷在10min内实现了较好的分离,线性范围(5~200)μg/mL内,磷酸腺苷浓度与峰面积相关性很高(r〉0.9999),3种磷酸腺苷检测限均小于0.5μg/mL,回收率在91.68%~110.79%之间,RSD在1.53%~3.67%之间。