简介:采用超声波强化溶剂法提取了蓝紫色勿忘我花色素,提取溶剂为55%~60%的酸性乙醇溶液。色素平均得率15%,色价(540nm)为36.55。色素经纸色谱(PC)分离主要含有黄色和红色两种物质,特别地对纸色谱分离出的这两种物质进行了显色反应、紫外可见光谱(UV)、红外光谱(IR)的测定分析,认为黄色物质为黄酮类化合物,红色物质为花青素。色素经液相色谱(HPLC)分离,主要含有7个组分,相对含量分别为63.45%、25.45%、0.59%、0.64%、4.27%、5.44%、0.21%。色素经液相色谱-质谱(LC-MS)联用仪的分离测定和结构分析,结果表明蓝紫色勿忘我花色素中含有矢车菊及其葡萄糖苷、黄酮及其衍生物,可能含有少量的飞燕草素和芍药定及其苷。
简介:用水-丙酮(3:7)分离出沙棘(Hippophaerhamnoides)籽提取物,用葡萄糖凝胶LH-20柱型层析分离为9组。其中的三组通过清除分析和色素载体,有很强的清除自由基活性。用液相色谱耦合电解质谱来进行单体和低聚体原花色素成分分析。结果显示:沙棘籽中除了原花色素还有齐聚花色素,还包括三氢和双氢二甲苯黄丙酮单体和纯三氢二甲苯黄丙酮单体的混合物。通过葡萄糖凝胶LH-20柱型层析来进行聚合体的分馏。LC—MASS分析降解产物的片段表明儿茶素、表儿茶素、桔儿茶素和表桔儿茶素都是主要的组成单位。儿茶素占到所有单体的56.1%,而81.9%的延长单体组成了原飞燕草素单体。平均的聚合度(mDp)介于4.5~31.6之间。原飞燕草素的比例在所有的组分之间是最高的,从51.4%~88.5%。
简介:摘要目的探讨节律基因隐花色素2(CRY2)在银屑病小鼠模型及HaCaT细胞中的表达变化及其机制。方法咪喹莫特诱导小鼠模型实验:12只C57BL/6雌鼠随机均分为咪喹莫特组(连续外用咪喹莫特乳膏5 d诱导构建银屑病小鼠模型,6只)和对照组(不予任何处理,6只),第6天处死小鼠,取其背部皮肤组织,免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达。HaCaT细胞转染实验:使用小干扰RNA(siRNA)技术在HaCaT细胞中敲减CRY2的表达(siRNA-CRY2组),以siRNA-NC组作为对照,5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色检测HaCaT细胞增殖活力,实时荧光定量PCR(qPCR)检测HaCaT细胞中趋化因子mRNA表达水平,Western印迹检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的磷酸化水平。肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激动物和细胞实验:12只C57BL/6雌鼠随机均分为TNF-α组(小鼠耳部皮下连续注射TNF-α溶液6 d,6只)和磷酸盐缓冲液(PBS)组(注射等量的PBS,6只),第7天处死小鼠,取其耳部皮肤组织,免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达;用50 ng/ml TNF-α刺激CRY2基因敲减的HaCaT细胞12 h(siRNA-CRY2 + TNF-α组),以siRNA-NC + TNF-α组作为对照,qPCR检测各组细胞中趋化因子mRNA的表达。统计分析采用两独立样本t检验。结果免疫荧光染色显示,咪喹莫特组小鼠背部表皮层中CRY2蛋白的表达(0.94 ± 0.23)显著低于对照组(2.30 ± 0.25,t = 3.99,P = 0.016)。HaCaT细胞转染实验:siRNA-CRY2组EdU阳性细胞比例(48.13% ± 10.97%)显著高于siRNA-NC组(38.23% ± 0.81%,t = 5.00,P = 0.007),且siRNA-CRY2组趋化因子CXCL1、CXCL8 mRNA相对表达量及p-ERK1/2蛋白相对表达量均显著高于siRNA-NC组(均P < 0.05),但两组间CCL20 mRNA表达量及ERK1/2蛋白表达量差异无统计学意义(均P > 0.05)。TNF-α刺激实验:免疫荧光染色显示,TNF-α组鼠耳表皮组织中CRY2蛋白表达水平(0.37 ± 0.34)显著低于PBS组(2.04 ± 0.17,t = 4.38,P = 0.012);siRNA-CRY2 + TNF-α组HaCaT细胞趋化因子CXCL1、CXCL8、CCL20 mRNA相对表达量均显著高于siRNA-NC + TNF-α组(均P < 0.05)。结论CRY2在银屑病小鼠模型中表达降低,促进了角质形成细胞的增殖以及趋化因子CXCL1、CXCL8和CCL20的表达,且TNF-α可能是下调CRY2表达的上游细胞因子。
简介:原花青素是黑果枸杞中一类重要的植化产物,但其生物合成机制仍不清楚。本研究利用黑果枸杞EST数据库,克隆了无色花色素还原酶基因(LrLAR)和花青素还原酶基因(LrANR)。PCR结果表明,LrLAR和LrANR分别由333个氨基酸残基、338个氨基酸残基组成的蛋白编码。进化分析表明,相应蛋白LrLAR、LrANR分别聚类于L4R和ANR族。实时定量PCR结果表明,从果实未成熟时期到变色期,LrLAR、LrANR的表达量均急剧上升,但在随后的发育时期中逐渐下降;与在果实中相比,在嫩叶、成熟叶、茎、根中,两基因的表达量极低。植化分析发现,果实中总原花青素含量高于嫩叶、成熟叶、茎、根中的含量,并且在果实成熟过程中呈现先增加后基本趋于稳定的趋势。本研究将为揭示黑果枸杞原花青素生物合成机制及促进其工程改良奠定基础。
简介:本文研究了紫薯色素的最佳提取方法以及紫薯色素的稳定性。通过单因素试验对紫薯色素最大吸收波长、最佳提取溶剂、料液比、pH、浸提时间、浸提温度进行探讨,通过料液比、pH、温度三因素三水半试验获取最优提取条件,并对紫薯色素的稳定性做了研究。结果表明,紫甘薯色素的最佳提取条件为:最大吸收波长531nm、最佳提取剂为5%柠檬酸、料液比为1:100、pH为2、浸提温度60℃、浸提时间1h。色素的颜色和稳定性易受pH值的影响,酸性是较稳定;色素含量易受温度影响,温度升高易使色素降解。正交实验表明:pH为1,料液比1:50,温度70℃提取效果最好。以上研究结果为紫薯色素的工:业化提取及规模化应用奠定了基础。
简介:为开发杨梅花色苷资源,对杨梅花色苷的提取分离工艺进行了研究。通过对乙醇浓度、提取温度、pH值、提取时间和料液比等单因素的浸提效果的比较分析,确定了3个主要的影响因子,即:提取温度、料液比、乙醇浓度。通过正交试验得到杨梅花色苷的最佳提取工艺条件,即:乙醇体积分数70%、提取温度40℃、提取液pH3、提取时间2h、料液比1:10。在此条件下,杨梅花色苷的提取率为91.83%。利用AB-8、D101和ADS-173种大孔吸附树脂分离杨梅花青素,结果表明:ADS-17对杨梅花色苷基本无吸附,AB-8和D101分离杨梅花色苷的效果相近。以体积分数60%的乙醇瘩液为洗脱荆,上样pH3时,两种大孔树脂分离得到的提取物中花色苷得率分别为70.00%和67.08%,产品得率分别为1.44%和1.38%。