简介：摘要：现如今，肝癌的发病率越来越高，已经发展为了恶性肿瘤。在对此疾病进行治疗时，常用的治疗方式为放疗和化疗。但是，大部分肝癌患者在确诊时，其已经发展了中晚期，错失了手术机会。在此基础下，需要分析肝癌细胞免疫治疗的内容和特点，从而进一步提高临床治疗的效果。

简介：摘要目的研究LIM激酶1（LIMK1）在肝癌组织及细胞中的表达情况，以及LIMK1对肝癌细胞增殖与转移的调控作用。方法通过在线数据库starBase v3.0和GEPIA分析LIMK1在肝癌组织和肝脏正常组织中的表达情况，并进行相关生存分析；蛋白质印迹（Western blot）技术分析LIMK1在肝癌细胞株中的表达情况；用小干扰RNA（siRNA）技术下调LIMK1的表达，瞬时转染肝癌细胞Hep3B和Huh7，通过四甲基偶氮唑盐实验及克隆形成实验观察其对肝癌细胞增殖的调控作用；Transwell实验检测LIMK1的表达下调后肝癌细胞转移能力的变化；下调LIMK1的表达后，Western blot技术检测上皮-间质转化进程中相关指标的改变。对数据进行单因素方差分析。结果LIMK1在肝癌组织中的表达水平明显高于正常肝组织，而且与预后相关（P值均< 0.01）；进一步研究表明，与永生化的肝细胞L02相比，LIMK1在肝癌细胞株中的表达明显升高（P值均< 0.05）。功能相关实验表明，在LIMK1表达下调后，肝癌细胞的增殖与转移能力明显受到抑制（P值均< 0.05）；同时发现LIMK1参与上皮-间质转化进程。结论LIMK1在肝癌组织及细胞中表达水平明显升高，可调控肝癌细胞的增殖与转移并且参与上皮-间质转化进程。

简介：摘要目的探讨假性蛋白激酶毛球族同源蛋白3（TRB3）在肝癌（HCC）细胞增殖、凋亡和迁移中的调控作用及机制。方法免疫组织化学及蛋白质印迹法（Western blot）检测HCC患者癌组织及癌旁组织TRB3的表达；体外检测肝癌细胞系HepG2和Huh7细胞中TRB3的表达，同时设计小干扰RNA靶向抑制TRB3后：CCK8、EdU检测细胞增殖；流式细胞术检测凋亡；Transwell评估迁移能力；同时Western blot检测凋亡、迁移相关蛋白和AKT磷酸化活性的变化。两组间均数比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果Western blot检测发现TRB3在肝癌组织中的表达显著上调，与癌旁正常肝组织相比，其相对表达水平分别为0.78±0.12和0.29±0.09，P < 0.01，差异有统计学意义；小干扰RNA抑制TRB3后，CCK8、EdU检测发现HepG2和Huh7细胞的增殖活性明显减弱（P值均< 0.05）；流式细胞学检测结果显示HepG2和Huh7细胞的凋亡比例显著增加（P值均< 0.01）；Western blot检测也发现凋亡调控蛋白BAX和Bim表达亦显著增加（P值均< 0.01）；Transwell结果显示HepG2和Huh7细胞的迁移能力下降（P值均< 0.05），迁移调控蛋白MMP4和MMP9的表达亦显著下调。Western blot结果显示AKT的磷酸化水平显著增加。结论TRB3通过抑制AKT的磷酸化活性，调控肝癌细胞增殖、凋亡、迁移。TRB3可能是一种潜在的治疗肝癌的靶向位点。

简介：摘要目的探讨膜泡分拣蛋白72(VPS72)在肝癌组织和对应癌旁组织的表达及临床病理意义，观察其对细胞增殖、迁移能力的影响。方法选取2018年9月至2020年9月来自河南大学河南省人民医院60例肝癌组织及对应的癌旁组织标本，肝癌组织划分为中心组，取距离癌组织边缘2 cm处标本划分为癌旁组。免疫蛋白印迹法(Western blot)及免疫荧光法检测中心组和癌旁组中VPS72蛋白的表达水平及分布，分析其与年龄、性别、肿瘤大小、数目、分期、分化程度、有无脉管癌栓、包膜侵犯等临床病理参数之间的关系；小干扰RNA(siRNA)降低肝癌细胞株Huh-7中VPS72的表达，分为实验组和对照组；划痕实验、Transwell实验检测其对Huh-7迁移能力的影响；细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和平板克隆实验检测Huh-7增殖能力。组间比较采用配对样本t检验和χ2检验。结果VPS72在癌组织中相对表达量为0.900±0.511，明显高于对应癌旁组织表达量(0.729±0.643)，差异有统计学意义(t＝2.027，P<0.05)。其表达量与肿瘤的分化程度、大小、脉管癌栓、细胞增殖抗原-67(Ki-67)和分期明显相关(χ2＝5.621、4.855、4.275、8.418、7.202，P<0.05)。划痕实验表明24、48 h实验组迁移细胞数[(38.330±3.512)、(66.670±5.508)个]低于对照组[(78.670±2.517)、(165.670±5.033)个]，差异有统计学意义(t＝14.162、16.275，P<0.05)。Transwell实验显示穿孔细胞数实验组(32.333±3.512)个，低于对照组[(52.667±2.082)个]，差异有统计学意义(t＝7.625，P<0.05)。CCK-8实验显示0 h实验组吸光度值(0.235±0.047)较对照组(0.237±0.068)无明显变化，差异无统计学意义(t＝0.020，P>0.05)。24、48 h实验组A值(0.539±0.300、0.815±0.038)低于对照组(0.683±0.100、1.415±0.131)，差异有统计学意义(t＝4.654、7.373，P<0.05)。平板克隆实验显示实验组细胞团数量为(50.222±6.222)个，低于对照组[(71.560±7.038)个]，差异有统计学意义(t＝7.875，P<0.01)。结论肝癌组织中VPS72蛋白表达量明显高表达，且与肿瘤的分化程度、大小、脉管癌栓、Ki-67和分期呈正相关，降低VPS72的表达能够明显抑制Huh-7细胞株增殖和迁移能力。

简介：摘要目的探讨维纳托克(Venetoclax)在HepG2、Hep3B 2个肝癌细胞株的抗癌活性。方法对人肝癌细胞株HepG2、Hep3B细胞株进行体外培养，采用不同浓度的Venetoclax(0、3、10、30 μmol/L)处理肝癌细胞，以细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性，0，3, 10和30 μmol/L Venetoclax作用细胞48 h，锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡，0，5 μmol/L Venetoclax，作用24 h，流式细胞学检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)检测Venetoclax诱导半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活化，聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解。组间比较采用t检验。结果Venetoclax对HepG2、Hep3B细胞株均有较强活性抑制作用。不同浓度的Venetoclax处理肝癌细胞48、72 h，Venetoclax在HepG2细胞株中取得的半数细胞活性抑制率(IC50)值分别为46.5 μmol/L和14.2 μmol/L；在Hep3B细胞的IC50值分别为24.6 μmol/L和11.2 μmol/L。处理24 h，30.0 μmol/L的Venetoclax在HepG2和Hep3B细胞株中诱导57%[对照组、实验组凋亡率分别为(4.00±1.00)%、(56.67±8.51)%，t＝-10.650，P<0.01]和54% [对照组、实验组凋亡率分别为(5.67±1.53)%、(54.33±9.87)%，t＝-8.440，P<0.01]的肝癌细胞发生凋亡，并能诱导肝癌细胞的Caspase-3活化，PARP裂解，差异均有统计学意义。用0、3、10和30 μmol/L的Venetoclax处理48 h，在HepG2细胞株中可诱导3%(3.26±1.71)%，12%[(12.36±1.99)%，(t＝-12.36，P<0.05)]，32%[(32.38±4.57)%，(t＝-10.350，P<0.01)]和67%[(66.71±6.29)%，(t＝-16.86，P<0.01)]的细胞死亡，差异均有统计学意义；在Hep3B细胞株诱导2%(1.91±0.68)%，16%[(15.72±3.40)%，(t＝-6.890，P<0.05)]，42%[(42.39±6.86)%，(t＝-10.180，P<0.01)]和73%[(73.32±2.69)%，t＝-44.490，P<0.01]的细胞死亡，差异均有统计学意义。应用半胱氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂预处理，Venetoclax对HepG2和Hep3B细胞的死亡率分别从56%(56.71±6.29)%降低至11%(10.70±1.43)%，(t＝12.350，P<0.01)和68%(68.05±10.16)%至12%(12.7±6.12)%，(t＝8.080，P<0.01)，差异有统计学意义。结论Venetoclax能够通过诱导Caspase的活化，诱导肝癌细胞发生凋亡，并对肝癌细胞进行杀伤。

简介：摘要目的观察G蛋白偶联受体48 (GPCR48)在不同转移潜能肝癌细胞株中的表达及其对肝癌细胞Huh7上皮间质转化(EMT)特性和侵袭转移的影响。方法采用蛋白质印迹（Western blot）检测不同转移潜能肝癌细胞GPCR48的蛋白表达水平。构建携带GPCR48基因的慢病毒载体，在肝癌细胞Huh7过表达GPCR48；采用Real-time PCR和Western blot检测GPCR48的过表达水平，采用Transwell侵袭实验和迁移实验检测对照组、Mock组和GPCR48过表达组肝癌细胞Huh7的侵袭和迁移能力；采用Real-time PCR和Western blot检测对照组、Mock组和GPCR48过表达组肝癌细胞Huh7 EMT相关标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和γ连环蛋白（γ-catenin）的mRNA和蛋白的表达水平。数据组间差异比较采用方差分析。结果GPCR48蛋白表达水平在转移性肝癌细胞株明显高于非转移性肝癌细胞株（P < 0.05）。携带GPCR48基因的慢病毒载体可以有效转染肝癌细胞Huh7，稳定表达GPCR48的mRNA和蛋白。GPCR48过表达组肝癌细胞Huh7与Mock组和对照组相比，侵袭和迁移能力明显增强（F≥5.54，P值均< 0.05)，上皮表型标志物E-cadherin和γ-catenin的mRNA和蛋白表达水平下降（P值均<0.05)，间质表型标志物N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表达水平上升（P值均< 0.05），表明过表达GPCR48的肝癌细胞Huh7发生了EMT改变。结论GPCR48表达水平与肝癌细胞转移潜能呈正相关，过表达GPCR48可以下调上皮表型标志物的表达和上调间质表型标志物的表达，诱导肝癌细胞发生EMT改变，从而促进肝癌细胞侵袭和迁移。

简介：摘要目的探讨Six同源盒蛋白4(Six homeobox 4，Six4)蛋白在肝癌中表达及对肝癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。方法选取2018年6月到2019年6月新乡医学院第一附属医院收集的169例肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象，采用免疫组织化学分析肝癌组织和癌旁组织中Six4蛋白表达水平；采用常间回文重复序列丛集-Cas9(CRISPR-Cas9)在人类肝癌细胞HepG2中建立Six4敲除细胞系，命名为对照组和SIX4 KO组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖；采用Transwell分析两组细胞迁移；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析上皮间质标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平，计量数据比较采用t检验。结果肝癌组织中Six4蛋白表达水平(169.59±18.59)高于癌旁组织(79.43±10.43)，差异有统计学意义(t＝4.179，P<0.05)。本研究成功构建Six4敲除细胞系。Six4 KO组细胞吸光值(1.21±0.19)低于对照组(2.15±0.28)，差异有统计学意义(t＝3.441，P<0.05)。对照组细胞EdU染色阳性率(76.45±8.90)%明显高于Six4 KO组细胞(31.63±7.43)%，差异有统计学意义(t＝4.693，P<0.05)。Six4 KO组细胞迁移数量(65.64±9.99)个低于对照组(119.48±12.08)个，差异有统计学意义(t＝3.748，P<0.05)。Six4 KO组细胞E-cadherin相对表达水平(1.49±0.21)高于对照组(0.33±0.11)，差异有统计学意义(t＝5.184，P<0.05)。Six4 KO组细胞间质标记物N-cadherin和Vimentin相对表达水平(0.58±0.11、0.68±0.23)低于对照组(1.74±0.28、1.89±0.26)，差异均有统计学意义(t＝4.274、4.109，P<0.05)。结论SIX4蛋白在肝癌组织中呈高表达，参与肝癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化等恶性细胞生物学行为。

简介：摘要目的观察着丝粒蛋白U(CENPU)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用短发夹RNA(shRNA)方法构建低表达HepG2细胞系，将其分为实验组(sh-HepG2)和对照组(NC)；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测实验组和对照组CENPU表达量；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测其对HepG2增殖能力的影响；采用划痕实验检测其对HepG2迁移能力的影响；Transwell检测其对HepG2侵袭能力的影响；应用SPSS 26.0统计软件分析。结果RT-qPCR检测结果表明，实验组表达量低于对照组表达量(1.49±0.14比6.72±0.21，t＝8.593，P<0.01)，差异有统计学意义；实验组中CENPU蛋白相对表达量低于对照组表达量(1.01±0.13比2.12±0.04，t＝11.572，P<0.05)，差异有统计学意义；CCK-8结果显示0、24、48、72 h实验组吸光度(A)值低于对照组(0.40±0.01、0.46±0.02、0.73±0.01、1.29±0.02比0.39±0.01、0.63±0.01、0.99±0.02、1.73±0.01，t＝8.735、9.774、7.682、4.482，P<0.01)，差异均有统计学意义；Transwell结果示24 h实验组侵袭的细胞数低于对照组侵袭细胞数[(63±3.57)个比(143±2.49)个，t＝14.758，P<0.05]，差异有统计学意义；划痕实验表明24 h实验组迁移的细胞数低于对照组迁移细胞数[(29.51±7.26)个比(61.31±3.71)个，t＝11.385，P<0.05]，差异有统计学意义。结论CENPU可以促进肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

简介：摘要目的探讨微小RNA-938(miR-938)在肝癌组织中的表达情况及其对肝癌细胞增殖的影响和调控机制。方法收集2015年1月至2019年6月在南通大学第二附属医院就诊并手术切除的40例肝细胞癌患者肝癌组织和癌旁组织，其中男性25例，女性15例，平均年龄61.4岁。miR-938过表达组HepG2肝癌细胞转染miR-938模拟物，阴性对照组转染阴性对照序列。采用试剂盒检测细胞增殖情况，荧光定量聚合酶链反应检测miR-938及琥珀酸脱氢酶复合体亚基D(SDHD)的表达，Western印迹检测SDHD蛋白表达。双荧光素酶报告实验验证miR-938的靶基因。结果肝癌组织中miR-938相对表达量为(0.060±0.002)，高于癌旁组织(0.030±0.002)，差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织中SDHD mRNA相对表达量为(0.028±0.002)，低于癌旁组织(0.062±0.002)，SDHD蛋白相对表达为(0.963±0.008)，低于癌旁组织(1.083±0.037)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-938过表达组细胞增殖活力明显高于阴性对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示只有miR-938模拟物和pGL3-SDHD野生型质粒组荧光素酶活性下降。阴性对照组SDHD mRNA和蛋白相对表达量均高于过表达组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-938在肝细胞癌患者肝癌组织中高表达，miR-938可能通过抑制SDHD的表达，促进肝癌细胞增殖。

简介：摘要目的探讨LINC00839对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测2016年2月至2018年11月于郑州大学附属肿瘤医院行手术治疗的38例肝癌患者的癌组织及相应癌旁组织中LINC00839和miR-3666的表达。体外培养肝癌细胞MHCC97H，分为si-NC组、si-LINC00839组、miR-NC组、miR-3666组、si-LINC00839+anti-miR-NC组和si-LINC00839+anti-miR-3666组，MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，Western blot检测细胞中p21、E-cadherin和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00839与miR-3666的调控关系。结果肝癌组织中LINC00839的表达量为2.82±0.27，高于癌旁组织(0.96±0.10，P<0.001)，miR-3666的表达量为0.23±0.02，低于癌旁组织(1.01±0.10，P<0.001)。肝癌组织中LINC00839和miR-3666的表达水平呈负相关(r＝-0.658, P<0.001)。si-LINC00839组细胞存活率为(53.91±5.41)%，克隆形成数为(92.0±8.0)个，迁移细胞数为(131.0±12.7)个，侵袭细胞数为(66.0±6.4)个，MMP-2蛋白表达量为0.20±0.02，均低于si-NC组[分别为(100.53±10.22)%、(164.0±14.3)个、(247.0±22.4)个、(120.0±11.6)个和0.67±0.06，均P<0.001]，p21蛋白表达量为0.76±0.07，E-cadherin蛋白表达量为0.78±0.08，均高于si-NC组[分别为0.25±0.02和0.14±0.01，均P<0.001]。LINC00839靶向负调控miR-3666的表达。miR-3666组细胞存活率为(47.93±4.86)%，克隆形成数为(78.0±7.7)个，迁移细胞数为(117.0±12.1)个，侵袭细胞数为(57.0±5.7)个，MMP-2蛋白表达量为0.16±0.01，均低于miR-NC组[分别为(100.11±10.21)%、(166.0±15.9)个、(250.0±25.0)个、(121.0±12.3)个和0.69±0.07，均P<0.001]，p21蛋白表达量为0.83±0.08，E-cadherin蛋白表达量为0.87±0.09，均高于miR-NC组[分别为0.24±0.02和0.13±0.01，均P<0.001]。si-LINC00839+anti-miR-3666组细胞存活率为(89.94±9.05)%，克隆形成数为(143.0±13.8)个，迁移细胞数为(208.0±19.8)个，侵袭细胞数为(108.0±10.1)个，MMP-2蛋白表达量为0.66±0.06，均高于si-LINC00839+anti-miR-NC组[分别为(54.12±5.39)%、(94.0±9.4)个、(129.0±12.6)个、(65.0±6.4)个和0.31±0.03，均P<0.001]，p21蛋白表达量为0.31±0.03，E-cadherin蛋白表达量为0.28±0.03，均低于si-LINC00839+anti-miR-NC组[分别为0.74±0.07和0.80±0.08，均P<0.001]。结论抑制LINC00839表达可能通过靶向上调miR-3666抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

简介：摘要目的探讨LINC00839对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测2016年2月至2018年11月于郑州大学附属肿瘤医院行手术治疗的38例肝癌患者的癌组织及相应癌旁组织中LINC00839和miR-3666的表达。体外培养肝癌细胞MHCC97H，分为si-NC组、si-LINC00839组、miR-NC组、miR-3666组、si-LINC00839+anti-miR-NC组和si-LINC00839+anti-miR-3666组，MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，Western blot检测细胞中p21、E-cadherin和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00839与miR-3666的调控关系。结果肝癌组织中LINC00839的表达量为2.82±0.27，高于癌旁组织(0.96±0.10，P<0.001)，miR-3666的表达量为0.23±0.02，低于癌旁组织(1.01±0.10，P<0.001)。肝癌组织中LINC00839和miR-3666的表达水平呈负相关(r＝-0.658, P<0.001)。si-LINC00839组细胞存活率为(53.91±5.41)%，克隆形成数为(92.0±8.0)个，迁移细胞数为(131.0±12.7)个，侵袭细胞数为(66.0±6.4)个，MMP-2蛋白表达量为0.20±0.02，均低于si-NC组[分别为(100.53±10.22)%、(164.0±14.3)个、(247.0±22.4)个、(120.0±11.6)个和0.67±0.06，均P<0.001]，p21蛋白表达量为0.76±0.07，E-cadherin蛋白表达量为0.78±0.08，均高于si-NC组[分别为0.25±0.02和0.14±0.01，均P<0.001]。LINC00839靶向负调控miR-3666的表达。miR-3666组细胞存活率为(47.93±4.86)%，克隆形成数为(78.0±7.7)个，迁移细胞数为(117.0±12.1)个，侵袭细胞数为(57.0±5.7)个，MMP-2蛋白表达量为0.16±0.01，均低于miR-NC组[分别为(100.11±10.21)%、(166.0±15.9)个、(250.0±25.0)个、(121.0±12.3)个和0.69±0.07，均P<0.001]，p21蛋白表达量为0.83±0.08，E-cadherin蛋白表达量为0.87±0.09，均高于miR-NC组[分别为0.24±0.02和0.13±0.01，均P<0.001]。si-LINC00839+anti-miR-3666组细胞存活率为(89.94±9.05)%，克隆形成数为(143.0±13.8)个，迁移细胞数为(208.0±19.8)个，侵袭细胞数为(108.0±10.1)个，MMP-2蛋白表达量为0.66±0.06，均高于si-LINC00839+anti-miR-NC组[分别为(54.12±5.39)%、(94.0±9.4)个、(129.0±12.6)个、(65.0±6.4)个和0.31±0.03，均P<0.001]，p21蛋白表达量为0.31±0.03，E-cadherin蛋白表达量为0.28±0.03，均低于si-LINC00839+anti-miR-NC组[分别为0.74±0.07和0.80±0.08，均P<0.001]。结论抑制LINC00839表达可能通过靶向上调miR-3666抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

简介：摘要目的研究应用胚胎外胚层发育(EED226)抑制组蛋白甲基化过度修饰是否具有抗癌活性并研究相关分子机制。方法体外培养肝癌细胞株BEL-7402和SMMC7721，用不同浓度的EED226处理肝癌细胞4、6、8 d，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性；5 μmol/L的EED226或者二甲基亚砜(DMSO)处理肝癌BEL-7402和SMMC7721细胞株48 h，分别采用蛋白质印迹(Western blot)检测EED226对肝癌细胞组蛋白3上的第27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3)的表达水平的影响和定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测EED226对肝癌细胞株的Bcl-2相互作用细胞死亡介导因子(Bim)和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)的表达水平的影响。组间比较采用t检验。结果EED226能强效抑制肝癌细胞株BEL-7402和SMMC7721的增殖，抑制效应呈现明显的时间、浓度依赖作用。处理8 d后，EED226在两个细胞株中的半数细胞活性抑制率(IC50)分别为0.8 μmol/L和0.9 μmol/L。分子机制研究结果显示，2个肝癌细胞株分别经EED226处理与DMSO处理后H3K27me3的表达相比较显著下降。在BEL-7402和SMMC7721细胞中，EED226处理组H3K27me3的下游基因Bim和p21的mRNA相对表达水平高于DMSO组[1.00±0.15比5.67±1.53(t＝-5.266，P<0.01)，1.00±0.05比6.67±1.53(t＝-6.422，P<0.05)和1.00±0.25比6.30±1.50(t＝-5.968，P<0.05)，1.00±0.10比6.00±1.00(t＝-8.617，P<0.05)]，差异有统计学意义；相应的Bim和p21蛋白质水平均显著升高。结论表观遗传调控新型抗癌制剂EED226能够抑制肝癌细胞中组蛋白三价甲基化过度修饰，进而解除对Bim和p21表达的抑制，达到抑制肝癌细胞增殖，表明EED抑制剂具有一定的抗肝癌作用。

简介：摘要目的观察微小RNA(miR)-142-3p靶向CD133对肝癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响。方法选取郑州大学第二附属医院2017年6月至2019年12月手术切除的肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和肿瘤组织miR-142-3p表达水平。采用慢病毒在MHCC97H肝癌细胞建立miR-142-3p过表达和对照细胞系(miR-142-3p组和对照组)，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和EdU染色分析两组细胞增殖；采用Transwell分析两组细胞侵袭；采用软琼脂克隆形成实验分析两组细胞干细胞特性；生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-142-3p靶基因；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析两组增殖、侵袭和干细胞标志物细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、CD133和Nanog蛋白表达水平，组间比较采用t检验。结果miR-142-3p组细胞miR-142-3p表达水平(0.41±0.12)显著低于癌旁组织miR-142-3p表达水平(1.06±0.25)，差异有统计学意义(t＝3.081，P<0.05)。miR-142-3p组细胞吸光度(A)值(1.63±0.20)低于对照组细胞A值(2.13±0.22)，差异有统计学意义(t＝2.918，P<0.05)。miR-142-3p组细胞EdU染色阳性率[(30.48±5.12)%]低于对照组细胞EdU染色阳性率[(87.89±7.28)%]，差异有统计学意义(t＝3.409，P<0.05)。miR-142-3p组细胞Ki-67蛋白表达水平(0.50±0.13)低于对照组细胞Ki-67表达水平(1.15±0.14)，差异有统计学意义(t＝2.319，P<0.05)。miR-142-3p组细胞侵袭数量[(67.59±6.01)个]低于对照组细胞侵袭数量[(121.35±6.12)个]，差异有统计学意义(t＝3.409，P<0.05)。miR-142-3p组细胞MMP-9蛋白表达水平(0.48±0.18)低于对照组细胞MMP-9蛋白表达水平(1.57±0.15)，差异有统计学意义(t＝2.917，P<0.05)。miR-142-3p组细胞克隆形成率[(31.44±4.51)%]低于对照组细胞克隆形成率[(57.68±7.19)%]，差异有统计学意义(t＝5.103，P<0.05)。miR-142-3p组细胞Nanog蛋白表达水平(0.51±0.14)低于对照组细胞Nanog蛋白表达水平(1.36±0.17)，差异有统计学意义(t＝2.514，P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示CD133是miR-142-3p的靶基因。miR-142-3p组细胞CD133蛋白表达水平(0.43±0.11)低于对照组细胞CD133蛋白表达水平(1.15±0.13)，差异有统计学意义(t＝2.514，P<0.05)。结论miR-142-3p通过靶向调控CD133表达水平调节着肝癌细胞增殖、迁移和干细胞特性。

简介：摘要目的探讨淫羊藿素调控miRNA-329（miR-329）、miRNA-1236（miR-1236）抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法采用2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素处理肝癌细胞株HepG2，对照组仅加入二甲基亚砜（DMSO），培养36 h后采用CCK-8法检测淫羊藿素对HepG2细胞的半数抑制浓度（IC50）及细胞增殖率。使用400 μg/L甲胎蛋白（AFP）处理HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h后，CCK-8法检测AFP对HepG2细胞增殖的影响。构建AFP-3'UTR荧光素酶报告质粒pmirGLO-AFP-3'UTR质粒，将pmirGLO空白载体质粒、pmirGLO-AFP-3'UTR质粒及miR-329或miR-1236的模拟物或抑制剂、相应的模拟物的对照质粒（NC）、相应的抑制剂的对照质粒（INC）分别共转染HepG2细胞，培养24 h后双荧光素酶报告基因检测miR-329和miR-1236对荧光素酶活性的影响。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测淫羊藿素对HepG2细胞AFP、miR-329和miR-1236表达的影响。使用miR-329、miR-1236的模拟物和抑制剂分别转染HepG2细胞，检测miR-329、miR-1236对AFP水平的影响。结果2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组细胞增殖率分别为（80.4±2.3）%、（73.2±1.6）%、（51.7±3.3）%、（38.2±4.6）%、（29.5±4.3）%和（94.0±2.9）%，差异有统计学意义（F＝75.65，P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组HepG2细胞增殖率分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均P<0.01）。淫羊藿素对HepG2细胞的IC50为10 μmol/L。2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组AFP mRNA的相对表达量分别为0.83±0.06、0.69±0.02、0.53±0.07、0.45±0.01、0.33±0.07和1.00±0.01，差异有统计学意义（F＝42.67，P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组AFP mRNA的相对表达量分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均P<0.01）。400 μg/L AFP作用HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h，细胞增殖率分别为（102±5）%、（138±13）%、（186±24）%、（260±12）%、（311±15）%、（348±25）%，差异有统计学意义（F＝27.483，P<0.01）；AFP作用不同时间分别与0 h细胞增殖率比较，差异均有统计学意义（均P<0.01）。与对照组比较，不同浓度淫羊藿素均能够促进miR-329和miR-1236表达（均P<0.01）。miR-329和miR-1236模拟物与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均降低了约40%；miR-329、miR-1236抑制剂与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均增加约1.5倍。miR-329和miR-1236均可降低AFP蛋白和mRNA的表达水平（均P<0.05）。结论淫羊藿素体外通过增加miR-329和miR-1236表达，促进miR-329、miR-1236与AFP-3'UTR的结合，抑制AFP mRNA的稳定性和翻译活性，抑制AFP表达，从而抑制肝癌细胞增殖。

简介：无

简介：摘要目的检测肝细胞癌组织中GINS复合物4(GINS4)蛋白的表达，观察其对肝癌细胞侵袭、增殖能力的影响。方法选取河南大学人民医院2019年9月至2020年12月60例肝细胞癌患者术中收集肝细胞癌组织及对应癌旁组织标本分别作为观察组和对照组，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测GINS4在肝细胞癌组织中的表达，使用特异性短发卡RNA (shRNA)构建低表达的肝癌细胞稳定株，将其分为实验组(shRNA组)和对照组(NC组)；Transwell检测其对HepG2细胞的侵袭能力；集落形成实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)检测其对HepG2细胞的增殖能力。组间比较采用配对样本t检验。结果RT-qPCR表明GINS4在肝细胞癌组织中表达量(2.89±0.11)高于癌旁组织表达量(1.34±0.15)，差异有统计学意义(t＝8.56，P<0.01)。Western blot显示在肝细胞癌组织中GINS4表达量高于癌旁组织的(1.54±0.76)倍，差异有统计学意义(t＝2.67，P<0.05)，shRNA转染HepG2细胞后，实验组GINS4表达量较对照组的表达量低(1.88±0.34)倍，差异有统计学意义(t＝7.43，P<0.05)；Transwell实验显示实验组穿孔细胞数目[(56.33±3.51)个/视野]低于对照组[(90.42±1.53)个/视野]，差异有统计学意义(t＝3.34，P<0.01)；集落形成实验显示实验组细胞集落数量[(83.33±7.37)个]低于对照组[(345.00±16.64)个]，差异有统计学意义(t＝15.28，P<0.01)；CCK-8实验显示在3 d的吸光度值实验组(1.43±0.11)低于对照组(2.15±0.15)，差异有统计学意义(t＝6.52，P<0.01)。结论在肝细胞癌组织中GINS4表达量高于癌旁组织，降低GINS4的表达能够显著抑制肝癌细胞侵袭及增殖能力。

简介：摘要目的观察细丝蛋白A(FLNa)在人原发性肝细胞癌中的表达，探究其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法采用免疫组织化学法及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测70例原发性肝癌及对应癌旁组织中FLNa表达，分析其与患者临床病理特征及预后间的相关性；RT-qPCR法检测不同肝癌细胞株(SMMC-7721、HepG2、HCCLM3、Huh7、PLC/PRF/5、Hep3B)与正常肝脏细胞株HL-7702中FLNa mRNA表达。慢病毒转染法构建过表达FLNa的Hep3B细胞株，RT-qPCR检测转染；噻唑蓝(MTT)法、平板克隆实验、Transwell实验检测细胞增殖、克隆及侵袭迁移能力变化；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白酶(p-p38MAPK)表达，采用单因素方差分析、χ2检验、LSD-t检验或秩和检验对上述所得数据进行统计分析。结果肝癌组织中FLNa阳性表达率低于癌旁组织(14.3%比81.4%，χ2＝9.725，P<0.05)，FLNa在肝癌组织中表达水平明显低于癌旁正常组织(3.13±1.02比22.01±2.38，t＝6.520，P<0.05)，其表达与肿瘤大小、TNM分期、肿瘤分化程度、脉管浸润及淋巴结转移有关(χ2肿瘤大小＝6.400，χ2分化程度＝10.850，χ2脉管浸润＝4.055，χ2淋巴结转移＝7.256，均P<0.05)，但与性别、年龄、肿瘤部位及AFP水平无明显相关(χ2性别＝0.000，χ2年龄＝0.010，χ2肿瘤部位＝0.038，χ2AFP＝3.276，均P>0.05)。FLNa阳性表达患者中位生存期显著高于阴性表达者(23.3个月比10.3个月，P<0.05)。各肝癌细胞株中FLNa表达量均低于HL-7702细胞株(1.95±0.45、1.90±0.58、1.89±0.72、1.99±0.10、1.90±0.49、1.81±0.17比14.08±2.52，FSMMC-7721＝4.120，FHepG2＝4.774，FHCCLM3＝4.655，FHuh7＝4.987，FPLC/PRF/5＝3.735，FHep3B＝5.094，均P<0.05)。过表达FLNa的Hep3B细胞增殖、克隆及侵袭迁移能力显著降低，ERK2、MMP-9、p-p38MAPK表达明显下降(均P<0.05)。结论FLNa在人原发性肝癌中低表达，过表达FLNa可通过抑制MAPK/ERK信号通路活化而抑制肝癌细胞恶性生物学行为。

简介：摘要目的检测miR-4698在肝癌组织及细胞系中的相对表达，分析其对肝癌细胞增殖和迁移的影响及分子作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝癌组织和肝癌细胞系中miR-4698的相对表达。在表达最低的肝癌细胞系中，采用脂质体转染法分别转染miR-4698模拟物和对照模拟物，命名为实验组和对照组。qRT-PCR检测转染效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell迁移实验分别检测过表达miR-4698对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-4698与靶基因的结合。qRT-PCR和Western blot分别检测靶基因在mRNA水平和蛋白水平的相对表达。结果与癌旁组织相比，miR-4698在肝癌组织的表达明显降低(P<0.01)。与正常肝细胞系相比，miR-4698在肝癌细胞系的表达明显降低(P<0.05)，在Huh7细胞的表达最低(P<0.01)。转染后，与对照组相比，实验组Huh7细胞中miR-4698的表达明显增加(P<0.01)。过表达miR-4698可抑制肝癌Huh7细胞的增殖能力(P<0.05)和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示miR-4698的靶基因是多肽-N-乙酰氨基半乳糖转移酶4(GALNT4)，双荧光素酶报告基因证实miR-4698可互补结合GALNT4(P<0.01)。qRT-PCR结果显示，过表达miR-4698可抑制GALNT4基因的表达(P<0.01)。Western blot实验显示，miR-4698过表达后，Huh7细胞中GALNT4蛋白表达降低，细胞增殖相关蛋白Cyclin B和CDK1表达降低，细胞转移相关蛋白N-cadherin和ZEB-2表达降低。结论miR-4698在肝癌组织和细胞系中表达明显下降，过表达miR-4698可通过抑制GALNT4基因的表达，降低肝癌Huh7细胞的增殖和迁移能力。

简介：摘要目的探讨在人肝癌细胞中微小RNA(microRNA，miR)-384对己糖激酶2(HK2)的调节机制。方法应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)的方法检测43例肝癌组织及癌旁组织中miR-384和HK2基因的表达水平，分为肝癌组织组及癌旁组织组；利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-384与HK2 3’端非编码区(3’UTR)的具体结合位点，分为miR-384模拟物(mimics)组，空白对照(NC)组和HK2短发夹核糖核酸(shRNA)组；利用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验观察miR-384和HK2对肝癌细胞HepG2(购自中国科学院上海细胞库)增殖能力的影响；采用挽救实验进一步验证HK2基因是否可以逆转miR-384对HepG2细胞增殖的调控作用。两样本均数间比较采用t检验。结果肝癌组miR-384表达水平低于癌旁组织组(0.42±0.07比1.11±0.06，t＝18.210，P<0.01)，差异有统计学意义，肝癌组HK2含量高于癌旁组织组(2.02±0.15比1.51±0.13，t＝13.320，P<0.01)，差异有统计学意义；miR-384 mimics与HK2 3’UTR-wt共转染组荧光素酶活性低于对照组(0.34±0.03比0.21±0.01，t＝12.140，P<0.05)，差异有统计学意义。而miR-384 mimics与HK2-3’UTR-mut共转染组荧光素酶活与对照组比较，差异无统计学意义(0.22±0.03比0.21±0.01，t＝1.140，P> 0.05)。转染miR-384 mimics组HK2的mRNA表达水平低于对照组(1.62±0.17比2.11±0.12，t＝6.304，P<0.01)，差异有统计学意义。CCK-8实验分析结果显示，miR-384 mimics组HepG2细胞的增殖能力低于对照组(0.82±0.07比1.31±0.11, t＝2.941，P<0.01)，差异有统计学意义。同样，HK2 shRNA组HepG2细胞的增殖能力也低于对照组(0.85±0.07比1.32±0.11，t＝2.424，P<0.01)，差异有统计学意义。miR-384 mimics和HK2过表达质粒共转染组HepG2细胞的增殖能力与NC组比较，差异无统计学意义(1.32±0.02比1.32±0.14, t＝1.040，P>0.05)。结论miR-384可通过靶向调控HK2的表达，抑制HepG2细胞的增殖能力。

简介：摘要目的检测miR-4698在肝癌组织及细胞系中的相对表达，分析其对肝癌细胞增殖和迁移的影响及分子作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝癌组织和肝癌细胞系中miR-4698的相对表达。在表达最低的肝癌细胞系中，采用脂质体转染法分别转染miR-4698模拟物和对照模拟物，命名为实验组和对照组。qRT-PCR检测转染效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell迁移实验分别检测过表达miR-4698对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-4698与靶基因的结合。qRT-PCR和Western blot分别检测靶基因在mRNA水平和蛋白水平的相对表达。结果与癌旁组织相比，miR-4698在肝癌组织的表达明显降低(P<0.01)。与正常肝细胞系相比，miR-4698在肝癌细胞系的表达明显降低(P<0.05)，在Huh7细胞的表达最低(P<0.01)。转染后，与对照组相比，实验组Huh7细胞中miR-4698的表达明显增加(P<0.01)。过表达miR-4698可抑制肝癌Huh7细胞的增殖能力(P<0.05)和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示miR-4698的靶基因是多肽-N-乙酰氨基半乳糖转移酶4(GALNT4)，双荧光素酶报告基因证实miR-4698可互补结合GALNT4(P<0.01)。qRT-PCR结果显示，过表达miR-4698可抑制GALNT4基因的表达(P<0.01)。Western blot实验显示，miR-4698过表达后，Huh7细胞中GALNT4蛋白表达降低，细胞增殖相关蛋白Cyclin B和CDK1表达降低，细胞转移相关蛋白N-cadherin和ZEB-2表达降低。结论miR-4698在肝癌组织和细胞系中表达明显下降，过表达miR-4698可通过抑制GALNT4基因的表达，降低肝癌Huh7细胞的增殖和迁移能力。