简介:目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9?MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果将Cas9?MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228bpMAD2L1PCR产物,可被酶切成166bp和62bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。
简介:摘要目的考察天麻素对照品溶液是否稳定,确定天麻素对照品溶液的使用有效期。方法按天麻素检测方法,分别制备两份对照品溶液,在0、7、15、30、45、60、75、90天分别进行检测,在0天,对两份对照品溶液进行检测,两者结果差应≤2.0%,在0天以外的测试时间点,新配制两份对照品溶液,对新配制的对照品溶液和用于研究有效期的两份对照品溶液进行检测,每个时间点的含量测定值与零时间点的含量差应≤2.0%。结果在零时间点,两份对照品溶液的含量差为0.86%,小于2.0%,对天麻素对照品溶液溶液共考察了90天,在每个时间点的含量测定值与零时间点的含量差均小于2.0%。结论天麻素对照品溶液在规定条件下放置90天是稳定的,天麻素对照品溶液的有效期可以定为90天,勿需临用新配。
简介:摘要目的观察分析无水乙醇碘化油混合液在介入治疗腹膜后恶性肿瘤中的应用效果。方法选取2015年3月份_2016年3月份我科室收治的腹膜后恶性肿瘤的患者20例为本次研究对象,患者采用无水乙醇碘化油混合液介入治疗,比较患者治疗前以及治疗后不同阶段肿瘤直径,以及患者治疗前,治疗后不同阶段疼痛(VAS)评分。结果患者在接受治疗后不同阶段肿瘤直径变化均与治疗前比较有差异,P<0.05,有统计学意义。患者在接受治疗后不同阶段疼痛变化均与治疗前比较有差异,P<0.05,有统计学意义。结论无水乙醇碘化油混合液在介入治疗腹膜后恶性肿瘤中的应用患者的肿瘤直径明显缩小,有效减轻患者的疼痛,治疗效果较好,值得临床推广。