简介：利用多重PCR和单重PCR技术对部分市售肉制品、宠物食品以及饲料等进行检测．以确定产品中是否含有动物源性成分以及动物源性成分的种类。利用SDS细胞裂解法提取样品DNA，用琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物的种类、上述方法具有操作简便，快速准确．节省费用等特点．

简介：随着现代分子生物学技术的发展,反转录聚合酶链式反应技术在甘薯病毒检测上的应用越来越广泛。采用该技术可检测出甘薯组织中含量极低的病毒RNA,具有灵敏度高、特异性强等优点。在本研究中根据NCBIGenBank中收录的SPCSV病毒外壳蛋白（CP）基因核苷酸序列的保守区域设计了3对特异性引物,使用天根生化科技（北京）有限公司生产的QuantOneStepRT-PCRkit试剂盒,针对影响扩增产物的影响因素退火温度进行优化,建立了甘薯退绿矮化病毒的RT-PCR检测方法。该方法使RT-PCR在一管内完成,大大降低了外源物质的污染及RNA降解的几率,可作为甘薯SPCSV病毒的快速检测方法。

简介：Fungalpathogenscausingpoplarcankerdiseasesarecosmopolitaninspecies,andhaveawiderangeofhosts.Thesepathogenshavediverseanamorphsandtheirmorphologyoverlapswitheachother;Theirteleomorphsarehardlydiscoveredinnature.Furthermore,theidentificationofthesepathogensisusuallylimitedbythegeography,hostandtaxonomicknowledge.Therefore,aculture-independentmethodusedtoidentifydeterminepathogensisexpectedtobedevelopedforfielddiagnostics.Throughamplifying,sequencingandanalyzingmultiplexnucleicacidtemplatesandgeneticmarkedtargetsequences,amultiplexPCRtechniquehasbeenestablishedandusedtodirectlydetectvariousenvironmentalsamples.Inthisstudy,fourpathogenstrainsandenvironmentalsampleswereamplifiedusingfungaluniversalprimersITS1/ITS4andEF1-728F/EF1-986RbygeneralPCRandmultiplexPCR.Theampliconsweresequenced,andthenalignedinGenBank.TheresultshowedthatthemultiplexPCRwasabletosuccessfullyamplifythetargetgeneandidentifythepathogensfromenvironmentalsamplesintheconditionofanannealingtemperatureof55.6℃andprimersfinalconcentrationof0.2μmol·L-1.ThemultiplexPCRcouldamplifythetargetattheconcentrationlevelofapproximatelylngofgenomicDNA.ThismethodwouldprovideausefultoolfortheidentificationofcankerpathogensbythemultiplexPCRandthehigh-throughputDNAmicroarraydetectionofenvironmentalsamples.

简介：一个简单协议用变白的稻秧为脱氧核糖核酸抽取被建立，米饭脱氧核糖核酸由此直接在单个eppendorftube在0.5mol/LNaOH答案被提取。比较PCR分析和电气泳动的结果证明用这个方法提取的脱氧核糖核酸象那个使用的标准CTAB方法同样好、有用。

简介：一个直角的图案被用来作为模板优化SSR-PCR扩大系统usingPanax人参genomicDNA。五个因素(DNA模板，TaqDNApolymerase，Mg~(2+)，教材，和dNTP)和退火的温度的四个层次在thissystem独立被测试了。结果证明反应效率被这些因素影响。放大aginsengSSR地点的基于的在结果，一个马厩，生产、可再现的PCR系统和骑车的节目被获得：包含1.0UTaqDNA聚合酶的20μL系统，2.0mmol·L~(-1)Mg~(2+),0.2mmol·L~(-1)dNTPs，0.3μmol·L~(-1)SSR教材，60ng·μL~(-1)DNA模板，用94的一个程序表现了为5的℃min，为30s的94℃，为30s在56.3℃退火，为1min的72℃，37个周期，为7min在72℃完成，并且在4℃存储。

简介：本研究建立了检测与诊断猪圆环病毒的PCR方法，并对该方法进行了标准化研究。该方法快速、敏感、特异性强，可扩增10ng的阳性质粒的DNA．可以从30μL病料组织悬液或全血中扩增检测PCV，并且该方法可以区分PCV1和PCV-2，对其它病原微生物如PPV、PRRSV、SIV以及许多细菌不能检出。应用此方法对6省市的12个猪场的225份病料进行了检测，对阳性病料进行了病毒分离，对分离的病毒进行了电镜观察与序列测定，结果证实分离的病毒为PCV-2。

简介：PCR-DGGE技术已经发展成为研究微生物的群落结构和遗传多样性的有效工具。在世界水产养殖业的养殖系统微生态学、肠道细菌微生态学和益生菌研究中都取得了一系列的应用成果，而在我国冷水鱼的研究中应用还较少。本文介绍了PCR-DGGE技术的特性及其在世界水产养殖业研究中的应用，分析了其在我国冷水鱼微生态学研究中的应用前景。

简介：近年来，海豚链球病已给我国及世界罗非鱼养殖带来了巨大的经济损失。为建立特异、敏感、快速的罗非鱼海豚链球菌PCR诊断方法，根据NCBI数据库已公布的海豚链球菌基因序列，设计合成种特异性引物CM1／CM2，进行海豚链球菌特异基因片段的PCR扩增试验、反应条件的优化及不同检测材料的比较。同时测试了方法的特异性和敏感性，对不同养殖鱼场的10份临床样品进行了检测。试验结果表明，引物CM1／CM2可以扩增到与预计大小相符的870bp海豚链球菌特异性基因片段；PCR反应与鮰爱德华氏细菌、Ⅰ型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、柱状黄杆菌、嗜水气单胞菌和河弧菌水产常见病原菌均无交叉反应；能够检测的最低细菌数为20～30个海豚链球菌；同时，该PCR可以直接从病鱼的脑、肝脏、肾脏及脾脏组织扩增出特异性目的片段；临床菌株检测结果与基于菌株16srRNA基因序列系统进化分析结果一致。由于病鱼内脏组织总DNA、菌落及菌液可直接用于该PCR扩增，最大限度缩短了整个检测时间及降低了检测成本。方法的建立为致病性海豚链球菌检测提供了一种简便、快速的途径，具有较好的应用前景。

简介：为获得南瓜ISSR最优扩增体系,为后续南瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以‘密本’南瓜为筛选体系材料,采用单因素试验,对ISSR反应体系的Mg2＋、dNTP、Taq酶、引物和DNA浓度等5个因素进行优化。研究结果表明,南瓜ISSR25μL最佳反应体系为：2.5μL10×Buffer,2.0mmol/LMg2＋,0.3mmol/LdNTP,1UTaq酶,0.48mmol/L引物,75ng的DNA。在此基础上,对筛选出的12条引物进行退火温度的优化,最终确定每条引物的最佳退火温度。利用该反应体系,选用引物891对85个南瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强、重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于南瓜的ISSR分子标记。

简介：AllfactorsaffectingthePCRsysteminPinusmassonianaLambwereinvestigatedonebyone.TheresultsshowthattheoptimumPCRsystemofEST-SSRwere:2μL10×Buffer(Mg2+Free),30ngtemplateDNA,0.1875mmol/LdNTPs,3.75mmol/LMg2+,8pmolprimerpair,1.0UTaqDNApoly-meraseintotal20μLreactionsystem.Finally,atotalof11isolatesofP.massonianawasusedfortestingthestabilityofthePCRamplification.TheresultsprovethattheoptimumPCRsystemwasstable,reliable,highlyrepetitive.

简介：用含卡那霉素的培养基首先对转几丁质酶基因烟草种子和烟苗进行初步筛选鉴定,再用WesternBlot进一步证实抗卡那霉素的转基因烟苗中外源转几丁质酶基因的表达.然后研究半嵌套式PCR(Semi-nestedPCR)检测转几丁质酶基因烟草植株及其烤后烟叶中的所转目的基因;利用限制性内切酶HindⅢ对半嵌套式PCR产物进行酶切,从而验证半嵌套式PCR产物是否为真正的目的基因.研究结果表明,半嵌套式PCR是一种快速、灵敏的检测转几丁质酶基因烟草植株及烤后烟叶的方法.

简介：为了提高抗病性分子标记检测的效率,为番茄病害检测及多抗品种选育提供技术依据,本研究通过改良CTAB法、96孔深孔板快速提取番茄微量叶片DNA;利用抗根结线虫病Mi标记,在L16(45)正交设计试验基础上,采用直观量化分析和方差分析两种方法,对番茄实用化PCR分子标记PCR反应的5个因素(引物,Mg2+,dNTPs,模板DNA和Taq酶)进行优化;随后分别筛选黄化曲叶病毒病、烟草花叶病毒病、根结线虫病、枯萎病、叶霉病和颈腐根腐病6种病害的8个实用化PCR分子标记PCR程序的退火温度;并对循环次数进行筛选;最后利用优化后的PCR体系与程序对供试的1442份番茄材料(包括番茄种质资源,群体材料,组合及品种)进行抗病性鉴定。结果表明番茄实用化PCR分子标记的PCR最佳反应体系(20μL)为引物0.5μmol/L、Mg2+1.5mmol/L、dNTPs0.3mmol/L、DNA480ngDNA、聚合酶1.0UTaq;PCR程序中8个分子标记共同最适退火温度为56℃,最佳循环次数为33次;筛选出585份多抗(含2种以上的抗病基因)番茄材料,可作为中间材料或亲本材料进行多抗品种选育。该实用化PCR分子标记的PCR体系的建立为番茄利用抗病基因分子标记检测与筛选多抗种质资源、品种或群体材料提供了标准化的程序。

简介：犬细小病毒病感染是由犬细小病毒（cPv）引起犬只死亡的最重要传染病之一，目前诊断该病的方法主要是胶体金快速检测试板法，虽然检测方法较简便快速，但其敏感性较差。通过对NCBI网站GenBank发表的CPV-2基因组序列的分析，选择该病毒VP2基因保守序列设计引物，通过对阳性病料扩增及扩增产物测序，与NCBI发表的相关基因对比，同源性在99．8％-100％，成功建立了特异性、灵敏度高的PCR方法，最低只需2．5PgDNA模板。在对28例可疑CPV病例检测中，本方法检出25例阳性、3例阴性，阳性率为89．28％；胶体金检测板检测出20例阳性、8例阴性，阳性率为71．42％，证实PCR方法比胶体金检测更敏感。

简介：为建立暴马丁香ISSR-PCR最佳反应体系,本研究以暴马丁香基因组DNA为模板,首先通过单因子试验设计筛选出各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验,对暴马丁香ISSR-PCR反应有影响的模板DNA、dNTPs、Mg2＋、TaqDNA聚合酶和引物浓度等5种因素4个水平进行了优化试验。暴马丁香的ISSR-PCR最佳反应体系最终确定为：在25μL的反应体系中,DNA模板是40ng,Mg2＋浓度为2.0mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为1.5U,dNTPs浓度为0.2mmol/L。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的10条引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为以后利用ISSR分子标记技术进行暴马丁香的有关研究提供了科学依据。

简介：本研究利用Me2Em4正反向引物组合对影响梾木属SRAP-PCR反应体系的Mg2＋、Taq聚合酶、dNTP和引物浓度4个因素进行L9（34）正交试验,采用正交设计直观分析及方差分析对影响SRAP反应的4个因素进行分析,并对模板DNA浓度进行了单因素试验分析。结果表明,梾木属SRAP-PCR20μL反应体系的最佳组合为：Taq聚合酶2.0U、Mg2＋浓度1.5mmol/L、dNTP浓度0.15mmol/L、Primer浓度0.30mmol/L、模板DNA浓度5.5mg/L以及含有2μL不含Mg2＋的10倍稀释缓冲液。各因素对梾木SRAP-PCR反应的影响大小依次为：dNTP、Taq聚合酶、Mg2＋和Primer。最后运用优化体系从100对SRAP引物组合中筛选出26个多态性SRAP标记,可用于梾木属不同种间亲缘关系、系统进化和遗传多样性等方面的研究。

简介：模板DNA的质量直接影响PCR扩增的结果,而不同提取方法及其缓冲液的成份与浓度对提取DNA的质量有重要影响.本文以5个栽培大豆品种的叶片为材料,比较分析了SDS与CTAB两种提取方法以及不同浓度CTAB提取缓冲液对所提取的DNA质量的影响,并通过PCR进行检验.实验结果表明:用1%(W/V)、2%(W/V)浓度的CTAB提取缓冲液和1.25%(W/V)SDS提取缓冲液所提取的大豆叶片DNA的质量较好,均能满足PCR扩增模板的需求,其中以1.25%(W/V)SDS提取得到的大豆叶片DNA质量最好,以其为模板扩增的效果最佳,而4%浓度的CTAB不适宜提取大豆叶片DNA.

简介：为有效利用SSR-PCR技术分析国家一级重点保护植物银缕梅的遗传多样性,采用正交试验设计L16（43）,即3因素4水平,对影响SSR-PCR扩增结果的因素（引物,模板DNA浓度和循环数）进行优化筛选,并在此基础上对聚丙烯酰胺凝胶上样量进行优化,建立了适合银缕梅的最佳SSR-PCR反应体系：10μL2×PCRMix、40ng模板DNA、10μmol/L引物,其余用ddH_2O补齐至20μL。PCR扩增程序为：95℃预变性15min,95℃变性30s,57.5℃退火1.5min,72℃延伸1min,30个循环,循环结束后,60℃延伸30min,扩增产物4℃保存。聚丙烯酰胺凝胶电泳上样量以1.5~2.0μL为最佳。利用优化后体系进行引物筛选,从18对引物中筛选出11对具有多态性引物,说明该反应体系具有良好的稳定性。该体系的建立可以为今后利用SSR标记对银缕梅遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究提供基础。

简介：为建立鸭瘟病毒（DPV）快速、敏感的检测方法,本研究利用PCR技术扩增出DPVUL30基因中510bp的保守序列,并克隆到pMD18-T载体中作为标准品制作标准曲线,建立了DPV的SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达5×101拷贝,与鸭细小病毒、鸭圆环病毒、小鹅瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭H9亚型流感病毒和鸭副粘病毒均不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床DPV的检测。

简介：以植物乳杆菌P-8（Lactobacillusplantarumsubsp.plantarumP-8）亚油酸异构酶为研究对象,通过http：//swissmodel.expasy.org/,http：//smart.embl-heidelberg.de/和vecterNTI等在线工具与软件,对亚油酸异构酶进行生物信息学分析并预测与酶活性相关的位点,预测亚油酸异构酶的3个氨基酸可能为第68位甘氨酸、第107位精氨酸和第172位组氨酸。设计1对含突变的引物,以重组质粒pQE30-LAI为模板,利用PCR介导的定点突变技术构建突变体。经序列比对表明,成功构建了突变体G68A（甘氨酸突变为丙氨酸）、R107L（精氨酸突变为亮氨酸）和H172P（组氨酸突变为脯氨酸）,为进一步研究LAI的结构和功能奠定了基础。

简介：本试验设计了一种多重聚合酶链反应（PCR）技术，可用于同时检测与猪繁殖和呼吸衰竭相关的3种病毒一猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪圆环病毒2型（PCV2）。根据3种病毒的靶序列设计引物，