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  • 简介:目的观察淫羊藿苷对成纤维细胞(MRC-5)衰老的干预作用与机制,为明确淫羊藿苷作为有效干预衰老的候选中药单体提供实验依据。方法MRC-5进行体外培养,利用淫羊藿苷进行干预,观察细胞的传代次数;利用β-半乳糖苷酶染色观察衰老细胞阳性率;MTT法检测细胞活力;分别使用单细胞凝胶电泳和流式细胞仪检测H2O2诱导细胞DNA损伤和凋亡变化。结果淫羊藿苷能够延缓MRC-5细胞的复制性衰老,促进细胞增殖,减轻H2O2诱导的细胞DNA损伤,促进受损细胞的凋亡。结论淫羊藿苷能够延缓细胞的复制性衰老,这可能与其能够减轻细胞DNA损伤有关。

  • 标签: 人胚肺二倍体成纤维细胞 细胞衰老 淫羊藿苷 DNA损伤 增殖 凋亡
  • 简介:目的研究细胞病毒(humancytomegalovirus,HCMV)感染成纤维细胞(humanembryoniclungfibroblast,HELF)后对其细胞周期的影响,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的HELF作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。用倒置相差显微镜观察两组细胞形态学变化至感染后7d。于感染后12h、24h、48h、72h和96h收获细胞,用免疫细胞化学法检测两组细胞核内HCMVIE172蛋白,流式细胞术检测细胞周期。结果模拟感染组未见细胞形态学改变,亦未出现HCMVIE172蛋白阳性产物。感染组感染后72h时即可见局部细胞变圆,膨胀,胞及胞核巨大化,7d时可见所有细胞均发生病变;免疫细胞化学检测显示,其各时间点的细胞均在核内出现呈棕黄色颗粒的HCMVIE172蛋白。模拟感染组在感染后12h时有65.7%的细胞处于G1期,24h时有43.8%的细胞处于G1期;感染组在感染后12h时有70.4%的细胞处于G1期,24h时有69.9%的细胞处于G1期;两两比较,差异均有显著性(均P〈0.01)。结论HCMV感染HELF后在细胞核内进行复制、增殖,其影响了HELF周期,使大部分细胞停滞在G期。

  • 标签: 人巨细胞病毒感染 人胚肺成纤维细胞 IE172蛋白 细胞周期
  • 简介:目的研究促炎性细胞因子TNF-α是否具有诱导成纤维细胞发生早衰的作用。方法TNF-α连续刺激体外培养的人成纤维细胞2周,然后进行衰老相关β半乳糖苷酶染色实验,检测细胞衰老情况。结果本研究以TNF-α作为刺激物处理成纤维细胞,发现TNF-α可诱导细胞早衰,并建立了细胞早衰模型。结论TNF-α具有明显的诱导成纤维细胞衰老的作用。

  • 标签: TNF-Α 人胚肺成纤维细胞 炎性衰老 早衰
  • 简介:目的观察青春宝对细胞生长作用。方法用不同浓度青春宝溶液加入Eagle基础液中观察细胞逐日生长情况,设立对照组比较,用反相显微镜、扫描电镜观察细胞形态。结果用细胞培养中另入青春宝后使细胞生长日期延长5天左右,反相显微镜和电检查认为青春宝能维持细胞外形、表面结构和细胞器较好形态。结论青春宝对促进细胞生长发育有一定作用。

  • 标签: 青春宝 二倍体细胞 中药 实验
  • 简介:摘要目的探讨染色数目为近神经母细胞瘤(NB)患儿的临床特征、治疗效果及预后。方法回顾分析2015年1月至2018年12月首都医科大学附属北京儿童医院收治的通过常规G显带技术检测骨髓染色为近NB患儿的一般临床特征(包括年龄、性别、危险度分组、原发瘤灶部位等)、实验室检查结果、治疗和近期预后情况,采用Kaplan-Meier法计算生存率,单因素分析采用Log-Rank检验,多因素分析采用Cox回归模型分析。结果共纳入43例符合诊断患儿的临床资料,其中男27例,女16例;亚组14例,超组29例;中位年龄35.5个月。43例患儿均为国际神经母细瘤分期系统(INSS)Ⅳ期高危组,原发瘤灶多位于腹膜后肾上腺区域(83.7%,36/43例),瘤灶最大直径多>10 cm(53.5%,23/43例),且就诊时常伴2个及以上部位转移。染色核型方面,14例亚组患儿染色核型为41~45条,以45条染色核型最多见,共9例(64.3%);29例超组患儿中,以47条染色核型多见,共11例(37.9%)。肿瘤标志物:41例(95.3%)患儿初诊时神经元烯醇化酶(NSE)升高,25例(58.1%)>370 μg/L;42例(97.7%)患儿乳酸脱氢酶(LDH)升高,亚组患儿LDH均>500 U/L,其中1例>10 000 U/L。荧光原位杂交(FISH)方法检测MYCN基因9例(20.9%)扩增。治疗及预后情况:43例患儿化疗总疗程为1~12个疗程;19(44.2%)例患儿进行了自体造血干细胞移植,21例(46.5%)患儿进行术后或自体移植后放疗或间位碘代苄胍治疗;28例患儿出现疾病的进展或复发,中位进展时间为13.8个月,15例(34.9%)死亡。亚组14例患儿中位随访时间14.9个月(2~38个月),12例出现进展或复发,7例死亡。超组29例患儿中位随访20.0个月(8.1~51.6个月),其中16例进展或复发,8例死亡。Kaplan-Meier生存率分析显示,43例患儿3年预计无事件生存(EFS)率为18.4%,其中亚组17.1%,超组29.8%。结论近NB患儿多为年龄18个月以上的Ⅳ期高危组患儿,就诊时均有2个及以上部位转移,3年预计EFS率为18.4%,其中亚组预后更差。

  • 标签: 神经母细胞瘤 近二倍体 超二倍体 亚二倍体 临床特征 预后
  • 简介:目的研究D-半乳糖处理后引起正常细胞衰老的机制.方法MTT法检测细胞存活率,衰老相关的β-半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基水平,免疫印迹法检测衰老相关蛋白的表达.结果D-半乳糖处理胚胎细胞和肝细胞,均能抑制细胞的增殖.被处理的细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶染为蓝色,细胞内活性氧自由基水平明显升高,衰老信号通路相关蛋白p53、p21、caviolin-1的表达均升高.结论D-半乳糖引起正常细胞出现典型的细胞衰老表型,可以作为衰老的可靠模型.

  • 标签: 细胞衰老 D-半乳糖 人正常二倍体细胞 衰老 模型
  • 简介:目的初步探讨低氧环境诱导牙周膜成纤维细胞(PDLCs)凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法体外正常氧(20%O2)或低氧(1%O2)状态下培养PDLCs,光学显微镜观察比较低氧诱导前后PDLCs形态学变化;台盼蓝染色实验检测PDLCs细胞死亡率的差异;凋亡实验比较各组PDLCs凋亡水平的变化。Western免疫印迹检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、p53、Caspase-3、Bcl-2与Bcl-xL蛋白的表达水平。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果随着低氧处理时间延长,PDLCs细胞数量减少,体积逐渐变小,细胞胞质浓缩。台盼蓝染色实验与凋亡实验均证实低氧处理48h后PDLCs死亡率(t=3.855,P=0.018)与凋亡率(t=6.621,P=0.003)显著增高。Western免疫印迹结果显示PDLCs中HIF-1α、p53、Caspase-3蛋白随着低氧刺激时间延长逐渐升高,Bcl-2与Bcl-xL蛋白逐渐降低。结论低氧能促进PDLCs形态变化、凋亡及凋亡相关蛋白的表达。

  • 标签: 细胞低氧 细胞凋亡 人牙周膜成纤维细胞 凋亡相关蛋白
  • 简介:摘要目的研究川芎嗪对成纤维细胞株MRC-5增殖及胶原蛋白的影响。方法培养MRC-5细胞株,按随机数字表法分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。对照组用不含药物的无血清DMEM处理,低、中、高剂量组分别用含有5、10、20 mg/L川芎嗪的无血清DMEM处理。干预24、36、48 h后,采用MTS法检测细胞增殖抑制率;干预48 h后,采用流式细胞术检测细胞周期比例,采用TUNEL染色观察细胞凋亡情况,Western blot法检测Bcl-2、Bax、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27(p27)蛋白水平,ELISA检测培养基中TGF-β1、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ, Col-Ⅰ)、Col-Ⅲ水平。结果干预24、36、48 h时,低、中、高剂量组细胞增殖抑制率较对照组升高(P<0.05)。干预48 h后,与对照组比较,低、中、高剂量组细胞周期G0/G1期比例增加,S期比例明显减少(P<0.05);凋亡率[(6.59±0.95)%、(10.92±2.25)%、(16.58±3.25)%比(1.38±0.34)%]明显增加(P<0.05);Bcl-2[(0.79±0.13)、(0.52±0.06)、(0.31±0.05)比(0.91±0.15)]、CyclinD1[(0.62±0.08)、(0.50±0.06)、(0.27±0.04)比(0.83±0.14)]蛋白表达明显降低,Bax[(0.45±0.07)、(0.50±0.06)、(0.79±0.13)比(0.32±0.06)]、p27[(0.39±0.07)、(0.75±0.13)、(0.96±0.16)比(0.20±0.05)]蛋白表达增加(P<0.05);培养基中TGF-β1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ水平降低(P<0.05)。结论川芎嗪可抑制MRC-5细胞增殖及胶原蛋白产生,其机制可能与诱导细胞周期阻滞、调节增殖及细胞周期相关蛋白表达有关。

  • 标签: 川芎嗪 成纤维细胞 细胞增殖 细胞周期 胶原
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  • 简介:目的:观察胚胎成纤维细胞(FBs)对糖尿病足FBs生物学特性的影响,探讨其促进糖尿病溃疡愈合的机制。方法分离培养糖尿病创面FBs10例,分别与孕中期胚胎皮肤FBs3例(实验组)、正常人皮肤FBs5例(对照组1)于transwell小室培养体系中间接共培养,并设立空白对照(对照组2)。绘制共培养体系中糖尿病足FBs生长曲线;观察共培养7d后糖尿病足FBs形态;共培养至第4、7d后,将各组糖尿病足FBs分离培养2d,测量和对比上清液中羟脯氨酸和TGF-β1含量;检测共培养第3、5、7d,β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色阳性细胞百分率。胚胎FBs制作三维培养应用于8例糖尿病足溃疡,比较治疗前后创面愈合时间,做自身前后对照研究。结果实验组糖尿病足FBs比2个对照组增殖活跃,形态更接近于正常。经胚胎FBs处理4、7d,糖尿病足FBs培养上清液中羟脯氨酸、TGF-β1明显增高,相对2个对照组差异均有统计学意义(羟脯氨酸4、7d:与对照组1相比P=0.023、P=0.007;与对照组2相比P=0.007、P=0.003;TGF-β14、7d:与对照组1相比P=0.000、P=0.000;与对照组2相比P=0.000、P=0.000)。实验组糖尿病足FBs的SA-β-gal染色阳性率在共培养第3、5及7d无明显变化,2个对照组则明显增高。8例临床糖尿病足溃疡应用胚胎FBs三维培养治疗后创面均愈合。结论胚胎FBs能显著促进糖尿病足FBs增殖,延缓老化表型出现,同时上调羟脯氨酸、TGF-β1的分泌,可能与促进创面愈合机制有关。

  • 标签: 胚胎成纤维细胞 糖尿病溃疡 皮肤组织工程 胶原代谢
  • 简介:目的:研究木犀草素对乳鼠成纤维细胞增殖作用的影响。方法:取3d内出生的乳大鼠组织制备成纤维细胞,经纯化,接种于96孔培养板上,细胞分为正常对照组、醋酸泼尼松龙组、4×10^-4、4×10^-5、4×10^-6、4×10^-7mol·L^-14个不同浓度的木犀草素实验组,培养一段时间后,观察成纤维细胞的形态变化,测定成纤维细胞的生长曲线、增殖情况及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:木犀草素浓度在4×10^-5、4×10^-6mol·L^-1时,可明显抑制成纤维细胞的生长和增殖,且细胞密度减小,细胞间隔变大,这种作用与药物浓度呈正相关性,且使成纤维细胞内蛋白质的含量减少,所有木犀草素给药组均可使成纤维细胞内SOD活力随剂量的增加而增加,且与正常对照组比较差异均有统计学意义。结论:木犀草素对大鼠成纤维细胞的增殖有抑制作用。

  • 标签: 木犀草素 肺成纤维细胞 增殖 抑制作用
  • 简介:目的:研究牙周膜成纤维细胞对甲硝唑的摄取,探讨摄取的机制及为通过牙根管给药途径提供实验依据。方法:采用高效液相色谱法研究牙周膜成纤维细胞与甲硝唑孵育后不同时间细胞内药物的浓度,细胞内药物浓度与细胞外药物浓度的关系,以及温度、pH和转运抑制剂丙磺舒和腺嘌呤对细胞摄取甲硝唑的影响。结果:(1)孵育3min后人牙周膜成纤维细胞胞内甲硝唑浓度即可达到细胞外水平,之后胞内甲硝唑浓度出现逐渐降低,并在15min后达到平稳;(2)细胞内甲硝唑浓度随着细胞外甲硝唑浓度的增加而呈线性增加;(3)温度、pH和转运抑制剂对牙周膜成纤维细胞摄取甲硝唑无明显影响。结论:牙周膜成纤维细胞可快速摄取甲硝唑;甲硝唑通过简单扩散方式进入细胞内。

  • 标签: 人牙周膜成纤维细胞 摄取 给药途径 甲硝唑 高效液相色谱法
  • 简介:目的:建立和评价牙龈成纤维细胞原代培养方法,并观察其生物学特性。方法:分别用组织块法、2种改良酶消组织块法培养人牙龈成纤维细胞(HGF),用形态学、免疫荧光鉴定细胞来源。通过活细胞观察,MTT比色实验研究细胞体外生物特性。比较3种培养方法培养HGF的效果。结果:细胞抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,符合牙龈成纤维细胞的形态学特征和生物学特性。组织块法、改良酶消组织块法(翻瓶法)、改良酶消组织块法(盖玻片法)的细胞培养成功率分别为26.7%、54%、60%。组织块法和2种改良酶消组织块法间的成功率差异有显著性(P〈0.01),2种改良酶消组织块法间的成功率差异无显著性(P〉0.05)。结论:本实验建立的细胞系为人牙龈成纤维细胞。2种改良酶消化组织块法可显著提高人牙龈成纤维细胞原代培养成功率。

  • 标签: 牙龈 成纤维细胞 细胞培养 生物学特性
  • 简介:目的研究良恶性胸腔积液中间期细胞遗传学方面的差异,以及FISH技术对此种差异的鉴别能力.方法采用7号、8号染色着丝粒特异性探针对21例临床诊断明确患者的胸腔积液(11例肿瘤患者,10例非肿瘤患者)进行FISH分析,计数超细胞的比例,以正常人外周血淋巴细胞作为对照来判定染色数目的异常,并将结果与临床诊断进行比较.结果在正常对照的淋巴细胞中,7、8号染色着丝粒探针各出现2个杂交信号,肿瘤患者胸腔积液细胞中7、8号染色数目的变化主要表现为拷贝数增多.在11例恶性胸腔积液中,出现7、8号染色数目增多的例数分别为8(72.7%)和9(81.8%),10例良性胸腔积液中7、8号染色为正常的各有9例(90.0%).结论7、8号染色改变是肿瘤患者胸腔积液细胞的主要特征,采用染色着丝粒特异性探针的荧光原位杂交技术能够检测到胸腔积液标本中的超肿瘤细胞,并且具有较好的性能.

  • 标签: 荧光原位杂交 胸腔积液 超二倍体
  • 简介:人类肿瘤的90%来源于上皮组织,上皮细胞需要在生长信号的不断作用下避免分化和凋亡,获得无限复制的潜能,并依靠新生血管生成、获得侵袭、转移能力才能最终形成肿瘤。整个过程依赖于肿瘤细胞与宿主间质微环境的相互作用,遗传学和细胞生物学研究表明,间质细胞可以提供肿瘤细胞生长、增殖信号,并参与新生血管生成,

  • 标签: 肿瘤相关成纤维细胞 肿瘤细胞生长 新生血管生成 间质细胞 细胞生物学 上皮组织
  • 简介:摘要分析2016年2月联勤保障部队第九〇〇医院收治1例由单亲引起的常染色隐性遗传型Alport综合征的诊断过程。先证者,女,4岁5个月,持续性血尿、蛋白尿2年4个月,血清肌酐、眼耳检查未见异常;其父亲及弟弟持续性血尿,母亲尿检正常;父母系非近亲结婚。基因检测示先证者携带COL4A3基因纯合变异1496G>A(p.G499E);其父亲及弟弟携带相同的杂合变异,母亲未携带该变异。生物信息学分析示COL4A3基因1496G>A为致病变异。免疫荧光定量PCR和染色微阵列分析证实先证者在染色2p25.3-2q37.3为单亲,该片段包含COL4A3基因。先证者诊断为单亲引起的常染色隐性遗传型Alport综合征,提示在父母为非近亲结婚的家族性血尿患者中检测出COL4A3基因纯合致病变异时应考虑单亲

  • 标签: 单亲二倍体 常染色体隐性遗传型Alport综合征 家族性血尿 COL4A3基因
  • 简介:摘要目的探讨不同生产工艺对用狂犬病疫苗(细胞)可能存在的致敏反应的影响。方法在4种不同生产工艺人用狂犬病疫苗免疫后的临床血清中随机选取360份血清样本,ELISA法检测不同生产工艺疫苗和不同采血时间点血清样本中的总IgE水平,采用SPSS19.0软件进行统计学分析。结果总IgE检测结果显示,4种疫苗免疫后的血清总IgE阳性率均为20% (6/30),总IgE的均值最低为9 IU/ml,最高为210 IU/ml,重复测量的方差分析显示不同时间采血检测的总IgE水平差异无统计学意义(P=0.284),多步浓缩纯化的人细胞疫苗的总IgE水平明显低于Vero细胞疫苗(P=0.024)。结论免疫剂量的增加不会导致总IgE水平的升高,用狂犬病疫苗(细胞)的生产工艺能够对可能的致敏性杂质进行去除,具有良好的安全性。

  • 标签: 人用狂犬病疫苗 人二倍体细胞 总IgE
  • 简介:摘要:目的研究胎牛血清和新生牛血清在不同浓度条件下,对细胞生长影响的情况,确定更适合细胞生长的血清类型、浓度以及生长天数。方法进行预试验,选取同一厂家的胎牛血清和新生牛血清,分别制备含1%、2%、5%、10%血清浓度的细胞生长液,在T75方瓶中进行人细胞培养,分别在第1天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天观察细胞上清液,显微镜下观察细胞形态、贴壁情况,并用胰酶消化细胞,通过全自动细胞计数仪测定T75方瓶中的活细胞浓度、细胞存活率。根据预试验结论调整浓度范围,制备合适血清浓度的细胞生长液以及确定合适细胞生长天数,在T75方瓶中进行人细胞培养,并进行观察与测定。结果胎牛和新生牛血清无显著差异,血清浓度在10%时效果最好,培养至第4-5天时细胞活率达到峰值;胎牛血清浓度为5%时,培养效果可以达到新生牛血清5%更高浓度的培养效果,经验证其准确性和可重复性均良好。结论在浓度相同的情况下,新生牛血清与胎牛血清在培养人细胞时,培养效果无显著差异,而低浓度(5%)的胎牛血清与高浓度新生牛血清培养效果无明显差异,从细胞生长情况、培养效果和经济角度选择低浓度胎牛血清替换高浓度新生牛血清培养人细胞更为适合。

  • 标签: 人二倍体细胞 新生牛血清 胎牛血清 细胞浓度 细胞活率
  • 简介:为了掌握胚胎皮肤、正常成人皮肤和瘢痕疙瘩皮肤成纤维细胞表达透明质酸(HA)的特点,以分析HA在不同创伤愈合过程中的可能作用机制,分别取以上3种传至4代的成纤维细胞上清液,分为游离组(未处理组)及结合组(盐酸胍及木瓜蛋白酶处理组),用透明质酸结合蛋白(HABP)技术分别对HA含量进行放射免疫测定。结果表明,胚胎组游离HA含量高于成人组(P<0.001),而与瘢痕疙瘩组无差异,而瘢痕疙瘩组总HA含量明显高于成人组和胚胎组(P<0.001),后两者总量无差异。上述结果提示胚胎组合成游离HA较多,可能与胚胎创伤无瘢痕愈合密切相关,然而瘢痕的过度增生也有游离及总的HA增高的因素存在。

  • 标签: 透明质酸 成纤维细胞 胚胎皮肤 瘢痕疙瘩