简介:过去常用经典的Nadi反应显示细胞色素氧化酶以定位线立体的存在部位,现在广泛使用DAB法.我们对这两种方法进行了比较.方法如下:取Wistar大鼠的心、肝、肾组织,用液氮骤冷,恒冷箱切片(厚7μm),进行以下实验:Nadi反应:切片入孵育液(N-苯基-对-苯二胺3mg、1-羟基-2-萘酸3mg溶于二甲基亚砜0.1ml,0.05M的磷酸缓冲液pH7.210ml,混匀后过滤)室温30min.入Lugol碘液2min,入5%硫代硫酸钠4min,入1%醋酸钴60min,蒸馏水洗,甘油明胶封固.DAB法:切片入孵育液(0.05M磷酸缓冲液pH7.210ml,3,3′-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)9mg,细胞色素C15mg,混匀后过滤)室温5min.切片用缓冲液清洗,入蒸馏水,甘油明胶封固.HE染色:切片先用10%Formalin固定10min,再做常规HE染色.对照:Nadi反应和DAB法都用迭氮钠预孵育5min(10ml缓冲液中含6mM迭氮钠),再入含6mM迭氮钠的孵育液中孵育,以下的步骤与上述步骤相同.DAB法还用不含细胞色素C的孵育液做对照.实验结果:HE染色的切片显示组织结构正常.Nadi反应的阳性产物为黑绿色的颗粒,可见弥散的现象.DAB染色的阳性产物为棕色颗粒,很少见有弥散现象.对照切片的结果:用迭氮钠制酶活性的Nadi反应有弱阳性产物,而用迭氮钠的DAB法细胞色素C的切片均呈阴性反应.我们认为显示细胞色素氧化酶的经典方法Nadi反应存在反应产物弥散的现象,用迭氮钠抑制酶的活性后仍有阳性产物出现,因而该法只能表明线粒体的存在,而其定位不够准确.DAB法的方法简便,反应产物不易扩散,可较准确地定位线粒体的存在部位.另外,DAB的沉淀物能与四氧化锇反应形成锇黑,可用于电镜观察.经以上的实验观察和比较,我们认为无论从反应的特异性、定位的准确性,还是电镜应用性等方面看,显示细胞色素氧化酶的DAB法都优于Nadi反应.
简介:摘要目的对比两种方法RIA(放射免疫方法)和TR—FIA(时间分辨荧光免疫分析法)在胃镜消毒中氧化电位水(EOW)对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗原性破坏力的测量精度。方法试验以HBsAg阳性病人用后所污染胃镜作为消毒前对照,经去除有机物处理后EOW分别浸泡60秒和90秒,胃镜表面涂抹采样,分别用EIA和TR—FIA检测HBsAg。结果发现作用时间为60秒的标本中有4例测定值在临界值范围,TR—FIA检测为阳性,但RIA检测却为阴性;作用90秒的结果,两者检测均为阴性。完全相符。结论RIA方法检测EOW对HBsAg抗原性的破坏力的检测存在假阴性的情况,TR—FIA较之更为精确。并且建议在时间允许的情况下,适当延长消毒时间以保证消毒效果。
简介:一氧化氮合酶(NOS)为一含铁的单氧化酶,可催化左旋精氨酸转化为瓜氨酸和NO.而阿霉素(ADR)是一种有效的广谱抗肿瘤药物,由于其心脏毒性作用,使临床应用受到限制.我们在探讨阿霉素对心脏损伤病理机制的实验研究中,用双重组化法同时显示心室肌NOS与糖元获得成功,现报道如下:1.材料和方法:1.1动物模型新西兰纯种白兔于耳缘静脉注射ADR,每次2mg/kg,ADR以生理盐水稀释成1mg/ml,每周一次,共八周,做心室肌损伤模型.取心室肌组织做冰冻切片,厚12μm.1.2主要试剂(1)还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d);(2)四唑仑硝基兰(NBT);(3)0.5%过碘酸氧化液;(4)Schiff液:先将200ml双蒸水煮沸,微火,加入1g碱性复红,再煮沸1min.冷却至50℃加入20ml1N盐酸,待35℃时加入1g偏重亚硫酸钠.室温中静置5小时,变为无色液体后装入棕色瓶内并封口,放入冰箱避光保存待用.1.3双重组化法.(1)将冰冻切片置入丙酮固定1min;(2)经pH7.4PBS液清洗三次,每次5min;(3)入NADPH-d与NBT配制的孵育液,37℃恒温孵育1h;(4)经pH7.4PBS液清洗三次,每次3min;(5)入0.5%过碘酸氧化10~20min;(6)经pH7.4PBS液充分清洗;(7)入Schiff液10min液10min;(8)流水冲洗10min;(9)无水乙醇脱水;(10)二甲苯透明,中性树胶封片.1.4单一组化法显示NOS.(步骤参照双重组化法1~4步)1.5单一组化法显示糖元.(步骤参照双重组化法5~8步).2.实验结果:2.1双重组化法显示心室肌中NOS呈蓝色、糖元呈红色.2.2单一组化法显示心室肌中NOS呈蓝色.2.3单一组化法显示心室肌中糖元呈红色.结论:通过三组切片的比较,发现使用两种方法所显示NOS与糖元的颜色及其深浅无明显变化.3.意义3.1用双重组化法可以同时显示心室肌NOS和糖元.此法与单一显示NOS组化法和单一显示糖元组化法进行比较,结果显示NOS与糖元的颜色均无明显改变.此结果说明两组试剂的染色过程不产生交叉影
简介:目的观察四氯乙烯职业暴露人群脂质过氧化与抗氧化能力的变化,以探讨其致癌机制。方法选择110名某些干洗店四氯乙烯作业工人为接触组(分3组),并以50名不接触任何毒物的某防疫站就业体检人员作为对照,测定血清中丙二醛(MAD)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)的活力水平。结果接触组3人群血清MDA含量显著高于对照组(P<0.01),而接触组1和2与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。SOD和GSH-Px的活力水平接触组明显低于对照组(P<0.01或P<0.05)。各接触组间MDA含量比较,除接触组3明显高于接触组1(P<0.05)外,其它均无显著性差异。结论在本研究条件下,PCE可诱发职业暴露人群体内脂质过氧化反应,并使机体抗氧化能力降低。
简介:目的:探讨Friedewald公式的准确性及其在临床中的应用价值。方法:随机选297例不同浓度低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)患者.将其分为三组;TG〈4.52mmol/L者171例,2.25~4.51mmol/L者78例,TG〉4.52mmol/L者48例,比较自动分析测定法与应用Friedewald方法计算的结果。结果:当TG水平〈2.25mmol/L,2.25~4.51mmol/L时,测定法与计算法高度相关(r分别为0.97,0.89,P均〈0.01),当TG〉4.52mmol/L时,计算结果与测定的结果相比有比较显著差别,计算偏差接近15%,其r仅为0.78.P〈0.05。结论:按Friedewald公式计算血LDLC浓度在低TG浓度条件下有一定的临床应用价值。
简介:本文从三个方面阐述茶叶的抗氧化作用。1绿茶含锰量甚高,达173~1511ug/g,多数样品含锰量在300-900ug/g之间,溶出率多为30-50%。含锌、铜量也较高。含锌量为21.05~61.25ug/g,绝大多数样品含锌量为40-50ug/g之间,溶出率为50%左右。含铜量为5.28-43.18ug/g,多数样品含铜量在1319ug/g之间,锰、锌、铜皆为抗氧化酶——超氧化物歧化酶的重要辅基。湖北恩施所产茶叶平均含硒量为0.65ug/g。陕西紫阳所产茶叶平均含硒量为0.65ug/g。硒是谷胱甘肽过氧化物酶的重要辅基。2茶叶富含茶多酚,茶多酚可清除超氧阴离子自由基、羟自由基、过氧亚硝基(ONOO^-)。3动物实验显示,食用含茶叶饲料和饮用茶汤皆能显著提高老龄大鼠的超氧化物歧化酶活性并能显著降低丙二醛含量。