简介：目的建立-种灵敏、可靠、快速对水中大肠埃希菌富集和DNA提取的最佳方法组合，以便应用TaqMan探针实时荧光PCR技术进行定量检测。方法膜过滤洗脱环节，采用3种不同的方法进行富集洗脱，通过平板计数法比较各方法富集洗脱效果；DNA提取环节，采用4种方法进行DNA提取。所得DNA进行实时荧光PCR扩增，定量检测DNA拷贝数，比较各方法的DNA提取效率；并采用最优的方法组合，对模拟水样进行膜过滤和DNA提取，考察全过程的回收率和灵敏度。结果采用加表皮葡萄球菌过滤＋漩涡混合器＋玻璃棒刮擦洗脱方法（C法），洗脱效率能达到75％-93％；TritonX-100法和磁珠法的线性范围达到6个数量级稀释度（10^0-10^-5），r2分别为0．998和0．999，然而，TritonX—100法更省时，更简便，经济性更好。采用该最优的方法组合，其全过程的回收率为79．7％～104．0％且灵敏度达到1cfu／ml。结论c法＋Triton-100法组合可以快速、准确、经济地对饮用水中大肠埃希菌进行富集和DNA提取。

简介：目的了解我国食品中分离的110株大肠埃希菌O157的耐药及脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型特征,完善我国食品中大肠埃希菌O157菌株特征的基础信息,为该菌的风险评估提供依据。方法使用琼脂稀释法对确认的110株大肠埃希菌O157进行药敏试验,完成耐药特征的分析。参照美国疾病预防控制中心PulseNet试验方法,对110株大肠埃希菌O157,运用XbaⅠ酶进行酶切并完成PFGE分析,利用BioNumerics软件对分离株的指纹图谱进行聚类分析。结果1110株菌中,43株菌至少对一种抗生素有抗性。耐药率最多的前三种抗生素依次是四环素（30.0%,33/110）,磺胺甲恶唑（29.1%,32/110）,萘啶酸（26.4%,29/110）;2一共有24个耐药谱,耐两种以上抗生素的菌株有34株,耐3种以上抗生素的多重耐药菌株有32株。最常见的三种耐药谱依次是SMX（6）,AMP-NAL-SMX-SXT-TET（6）,AMP-CHL-NAL-SMX-SXT-TET（4）/AMP-SMX-SXT-TET（4）/TET（4）;3大肠埃希菌O157非H7（O157∶hund）对所测试的抗生素的耐药率明显高于大肠埃希菌O157∶H7（χ2=72.010P〈0.05）。其中37株携带了志贺毒素基因的大肠埃希菌O157∶H7仅对磺胺甲恶唑（2.7%,1/37）、萘碇酸（2.7%,1/37）有耐药,没有多重耐药菌株;4通过不同种类食品中大肠埃希菌O157菌株耐药率比较发现,从生猪肉、生禽肉中分离的菌株耐药率相对高于其他食品种类;5PFGE分子分型研究显示菌株具有基因多态性,且可以很好将大肠埃希菌O157非H7和大肠埃希菌O157∶H7菌株区分开。结论我国食品中分离的大肠埃希菌O157耐药现象严重。我们应加强养殖环节和零售环节食源性致病菌,特别是大肠埃希菌O157（包括产志贺毒素大肠埃希菌O157）菌株药敏特征的监测,探明食品与养殖环节菌株耐药的传播关系,并为国家制定科学的养殖业抗生素用药提供依据。