简介:试验旨在构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN基因的大肠杆菌原核表达栽体。以pMD18-T—HN为模板,通过设计的特异性引物PCR扩增出(NDV)HN基因片段,连接至pMD-18T载体,通过双酶切定向插入原核表达载体pET32a中,转化到感受态细胞Rosetta中,获得表达HN基因的阳性亚克隆重组质粒,用lmmol/LIPTG诱导表达,并对表达产物进行鉴定。SDS—PAGE电泳结果显示,HN基因片段在大肠杆菌Rosetta细胞中实现融合表达,表达产物大小约为90KD左右,western—blotting试验证实其有较好的反应原性。本研究为进一步研究HN蛋白功能结构域的免疫原性和研制鸡新城疫HN基因工程疫苗奠定了基础。
简介:建立了一种检测牛奶中重金属铅、铬、汞、砷的前处理方法,牛奶经微波消解后,取一半体积消解液定容经原子荧光仪测汞,剩余消解液经赶酸处理后定容,取部分体积经原子吸收仪测铅、铬。再将剩余的定容液添加还原剂及酸,定容至一定体积后经原子荧光仪测砷。结果表明:铅、铬在2.5~25ng/ml,砷在1~10ng/ml,汞在0.1~10ng/ml内的线性范围较好,铅、铬相关系数R均在0.99以上,砷、汞相关系数R均在0.999以上。铅、砷在0.02~0.2mg/kg,铬在O.05—0.3mg/kg,汞在0.002~0.02mg/kg范围的添加回收率在77.7%-95.4%之间。批内、批间相对标准偏差均小于20%,该方法操作简便,快速,重现性好,适用于牛奶中铅、铬、汞、砷的测定。