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  • 简介:目的构建含有人髓细胞白血病基因-1(myeloidcellleukemia-1,MCL1)和绿色荧光蛋白基因(pEGFP)的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒。经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应(Reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)检测MCL1mRNA的表达,WesternBlot(蛋白质印迹)方法检测MCL1蛋白的表达。结果阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果与GenBank中MCL1序列相同。重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,WesternBlot检测出40kDa大小的蛋白。结论成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达

  • 标签: MCL1基因(髓样细胞白血病-1基因) 质粒 基因治疗
  • 简介:Noise-inducedHearingLossandNeuroplasticityThe6th《ChineseJoumedofOtology》andthe5thJournalofOtologyEditorialBoard11thSeniorSeminarofotomicrosurgery&otoneurosurgeryThefourthadvancedseminarofinternationalaudiologicalmedicineThe6thInternationalSymposiumofDeafnessandGeneticMedicineandThe8thNationalClassesofDeafnessandGeneticDiagnosis

  • 标签: 学术研讨会 人民解放军 高新技术 主持人 海南省 国际
  • 简介:目的构建含有小鼠Smad4基因和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒病毒表达载体,为今后应用该重组慢病毒介导的内耳基因导入和相关的聋病基因治疗奠定实验基础.方法利用基因重组、限制性内切酶酶切及基因测序的方法,构建并鉴定pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP真核表达质粒;利用脂质体介导转染的方法,将pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP转染导入293T细胞,荧光显微镜下观察EGFP基因表达情况,利用实时荧光PCR的方法检测小鼠Smad4基因mRNA水平的表达情况.结果经PCR鉴定和基因测序证实了小鼠Smad4基因序列与基因bank中的序列相一致.pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP质粒转入293T细胞后,荧光显微镜下可见有绿色荧光蛋白表达.293T细胞经慢病毒感染后,其小鼠Smad4基因mRNA表达量增加了66427倍.病毒滴度经测定为2.5×108TU/ml.结论成功地构建了含有小鼠Smad4基因的慢病毒表达载体,并能在293T细胞中表达.

  • 标签: SMAD4 慢病毒
  • 简介:(本刊讯)由北京市科学技术协会和北京听力协会联合主办的“2015北京国际听力学大会(2015BeijingInternationalAudiologyConference)”将于2015年5月29日~31日在北京国际会议中心举行。大会通过专业学术论坛和听力行业综合展览,搭建听力学领域的国际交流平台,促进我国听力学的发展与繁荣,推动听力行业的规范与健康成长。届时将邀请来自欧美等国家的知名教授和我国听力学领域的重要学者和专家就本领域前沿进展和行业动态做精彩报告。

  • 标签: 国际会议中心 听力学 北京市 科学技术 国际交流 行业
  • 简介:目的使用RNA-Seq技术分析Miif-m敲除鼠与野生鼠的血管纹转录组,研究Mitf-m基因敲除后的差异表达基因及相关改变的分子机制。方法分别取Miif-m敲除鼠(Mitfmi-△M/mi-△M;MM组)与野生鼠(Miif-m+/+;ww组)的血管纹进行总RNA提取;制备cDNA文库,用IlluminaHiSeq2000测序系统行高通量测序。利用软件Tophat2.2.0将cleanreads比对到参考基因组;分别用软件RSeQS-2.3.2和cufflinks来检测测序结果的均一性和基因表达水平。使用edgeR和DESeq程序筛选差异表达基因(differentialexpressedgenes,DEGs);选择下调DEGs,用KOBAS2.O进行基因本体(geneontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes,KEGG)代谢途径的富集分析。结果MM组与WW组在参考基因组上mapping的cleanreads数分别为42463888和39718542,分别有88.7%和87.4%的reads是唯一映射,说明RNA-Seq结果可靠。DEGs筛查结果表明,相对于WW组,Mftf-m敲除鼠血管纹有45个DEGs,上调表达基因有7个,下调表达基因有38个。GO富集分析发现下调表达基因与黑色素的合成和代谢过程、色素沉着有关,值得关注的是与内向整流钾离子通道Kcnj10和Kcnj13相关。KEGG富集分析显示下调表达基因主要富集于黑色素生成通路。结论RNA-Seq分析拓展了Mftf-m基因调控网,为探究Mitf-m突变所致听力-色素综合征的分子机制及特异性研究Mitf不同转录子的功能奠定了基础。

  • 标签: Mitf-m基因 血管纹 RNA-Seq技术 差异表达基因
  • 简介:随着畅听未来项目的不断推广延伸,其影响也不再局限于国内。卫生部、残疾人联合会、丹麦大使馆、世界卫生组织的官员都对畅听未来项目给予了高度的评价,一致认为该项目的成功开展是响应WHO号召多机构合作开展国家级耳聋防治计划的成功典范,特别是在人口大国中国更具有深远的意义,对世界各国都有典范作用和借鉴意义。在2007年世界卫生组织大会上,

  • 标签: 听力学学术 国际听力学 学术组织
  • 简介:目的构建人野生型Cx30与红色荧光蛋白DsRed的融合蛋白表达载体,为揭示Cx30突变患者发病机制提供实验依据。方法用PCR法扩增GJB6基因,将PCR产物与T载体连接,用双切酶酶切pEASY-GJB6与载体DsRed-N1,连接回收后的片断,构建野生型Cx30编码序列与PDsRed2表达载体,测序鉴定序列正确性。将GJB6-DsRed用脂质体转染HEK293细胞,荧光显微镜观察表达的融合蛋白。结果GJB6-DsRed在HEK293细胞中高效表达,表达主要位于细胞膜中。结论成功构建了人野生型Cx30与红色荧光蛋白DsRed的融合蛋白表达载体,为进一步研究非综合征性聋的致聋机制奠定了基础。

  • 标签: 缝隙连接蛋白30 红色荧光蛋白 融合蛋白表达载体
  • 简介:目的检测OPG和RANKL在大鼠鼓室硬化模型中的表达水平,探讨OPG/RANKL系统在大鼠鼓室硬化发病机制中的作用。方法30只健康的成年雄性sD大鼠随机分为两组,造模组20只大鼠,其右耳鼓室内注射浓度为1×10^8CFU/ml的肺炎链球菌液进行造模;对照组10只大鼠,其右耳不干预作为空白对照。在造模后第8周处死大鼠,收集造模组大鼠右耳中有鼓室硬化形成的听泡标本作为鼓室硬化组和对照组大鼠右耳的听泡标本作为对照组,进行免疫组染色。结果对照组的10只大鼠全部存活到造模后第8周,右侧10耳均未发生鼓室硬化;造模组共有17只大鼠存活至造模后第8周,其右侧17耳中共有13耳发生鼓室硬化。鼓室硬化组鼓室黏膜中的OPG表达水平明显高于对照组(P〈0.05),鼓室硬化组鼓室黏膜中的OPG/RANKL比值明显高于对照组(P〈0.05)。结论OPG/RANKL系统可能在大鼠鼓室硬化的发病过程中发挥调节作用,OPG/RANKL比值增加可能与大鼠鼓室硬化的形成有关。

  • 标签: 鼓室硬化 护骨素 核因子-КB受体活化因子配体
  • 简介:目的构建6种分别携带GJB2基因错义突变A40G、V37I、L90P、L90V、V84L和W44C的真核表达载体,转染HEK293细胞,建立6种错义突变的稳定表达细胞系。方法以野生型Cx26-EGFP融合蛋白质粒为模板,用Stratagene公司定点突变试剂盒构建错义突变表达载体,直接测序鉴定序列正确性,选取含有突变的载体转染HEK293细胞,G418选择性培养2周,流式细胞仪筛选表达阳性细胞,扩增培养形成稳定表达人Cx26突变的HEK293细胞系。培养细胞用4%多聚甲醛固定,鬼笔环肽和4',6-二脒基-2-苯基吲哚衬染细胞核,荧光显微镜下检测结果。结果6种突变表达载体经过测序,均含有相应突变,无多余突变出现,转染后均可在细胞间形成缝隙连接,呈现绿色荧光。结论成功构建6种携带GJB2基因错义突变的真核表达载体,为进一步研究错义突变致聋原因奠定了实验基础。

  • 标签: 缝隙连接26 错义突变 载体 基因表达
  • 简介:本刊讯首届中国国际福祉博览会——残疾人、老龄人用品用具博览会于2007年5月4日至7日在北京中国国际展览中心举行.这是我国首次举办的级别最高、规模最大、产品种类最全的残疾人和老年人特殊用品和辅助器具的专业展览.也是一次展示国际相关领域发展水平、推广现代服务理念的扶残助老知识宣传和产品展示会。

  • 标签: 博览会 国际 中国 现代服务理念 用品用具 产品展示会
  • 简介:2007年4月28日.以”聆听健康和谐”为主题的首届国际听力障碍预防与康复大会.顺利完成各项预定议程,在北京国际会议中心圆满落下帷幕。

  • 标签: 国际会议中心 听力障碍 康复 预防
  • 简介:2008年6月8~12日,第二十九届国际听力会议(InternationalCongressofAudiology)在香港会议展览中心举行。国际听力会议是目前国际听力学界最高级别的会议之一,由国际听力学会(InternationalSocietyofAudiology,ISA)主办,每两年一届,在不同的国家或地区轮流举行。

  • 标签: 会议报道 听力会议 国际听力
  • 简介:2012年10月19-21日中国·北京由中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院、国际耳内科医师学会、中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编委会及中国听力医学发展基金会联合主办的"第三届北京国际耳科论坛暨国际耳内科医师协会(IAPA)第十六届年会"拟定于2012年10月19-21日在北京隆重举行。第三届国际耳科论坛吸纳了前两届论坛的精髓,涵盖耳科学基础与临床研究及应用的热点领域,

  • 标签: 内科医师协会 中国人民解放军总医院 耳科 国际 论坛 北京
  • 简介:两年一度的国际暨第九届全国头颈肿瘤大会于2007年9月8~11日在祖国西部边陲城市新疆乌鲁木齐市召开。本次会议由中国抗癌协会主办,新疆维吾尔自治区人民医院、香港中文大学、中国耳鼻咽喉头颈外科编辑部承办。参会代表不仅有来自全国29个省市自治区和香港、澳门特别行政区的350余位专家学者,还有来自印度、韩国、以色列、新加坡等国家的30余位同道与朋友,这其中既有著作齐身、蜚声海内外的老教授,也有年富力强、充满创造力的年轻学者,真可谓是天南地北,群贤毕至,五湖四海,欢聚一堂。

  • 标签: 耳鼻咽喉头颈外科 肿瘤大会 新疆维吾尔自治区人民医院 国际 中国抗癌协会 香港中文大学