简介:目的:探索建立一种利用核酸酶免疫试验中探针的熔解温度差异检测已知突变位点的方法.方法:目的靶基因经扩增后,5'末端标记洋地黄毒苷(digoxigenin,Dig)的等位基因探针与已结合在酶标板上的扩增产物杂交,其杂交的探针-DNA二聚体的碱基错配与未错配之间存在变性温度差异.选择适宜的熔解温度进行已知突变位点的检测,并利用酶联免疫吸附试验对标记探针进行识别、放大和结果判断.结果:实验结果表明,当熔解温度为37℃时,扩增产物的加样量为5μl/孔和检测探针加入量为10pmol/孔时所测得A450值为0.800~0.923.等位基因检测探针的熔解温度为53℃,P1、P2与靶DNA结合率分别为86%和16%.当P1、P2按不同比例杂合时,其与结合率存在着明显的线性关系(r=0.9985).从8例人类乙型肝炎病毒(HBV)DNA阳性的血清标本检测中证实1例酪氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YVDD)突变、3例野生型,其余4例可能是杂合型突变.结论:本法具较高的检测灵敏度,且其突出的特点是能检测出标本中杂合突变所占的比例,间接反映出患者体内突变的类型和比例.这对于疾病的诊断、治疗、预后评价等都具有较高的价值.
简介:由上海市医学会普外科专业委员会疝和腹壁外科学组和上海华东医院共同主办的《腹壁外科未来发展研讨会暨2006腹壁外科手术规范化高级研修班》定于2006年11月20日一-11月24日举行。本次研讨会将紧密结合国际最新腹壁外科进展,并结合我国腹壁外科十年发展情况,组织外科同道和相关领域专业人士就我国腹壁外科的今后发展进行圆桌会议式的讨论。并采用一种全新的国际通用的专业研讨方式就国内外该领域的最新进展以及所存在的问题.为专业同道提供相互经验交流、评估和推广的平台。本次研讨会将特邀中华外科学会疝和腹壁外科学组顾问吴肇汉教授、名誉组长马颂章教授、组长唐健雄教授、副组长陈双教授,中华外科学会腹腔镜内镜外科学组组长郑民华张攫.解放军全国普外科专业委员会疝和腹壁外科学组组长王强教授,上海市医学会普外科学会委员、华东医院外科主任袁祖荣教授及上海医学会普外科专业委员会疝和腹壁外科学组全体委员共同参与研讨。