简介：对于溃变神经纤维的镀染,Nute法是较可靠的形态学方法之一,但存在着程度较为复杂、烦锁等问题.为此我神经切片研究室在实际应用中,对于一些实验步骤,大胆地进行了改良和简化,结果与改良前相比没有显著差异,但操作过程却比原方法简便、易行、结果稳定,使实验者的工作量明显下降.现将改良的关键处介绍如下:一、固定:原方法:灌注固定先灌0.9%生理盐水冲出血液,再以5%重铬酸钾和2.5%铬酸钾的水溶液500ml灌注固定.取出组织固定于10%中性福尔马林1w或更长至3m.改良后,我们增加了取材后组织再浸泡于灌流液中2～4hr这一步骤,它可防止灌流时灌流液不能完全达到周缘神经组织部位,同时缩短了组织后固定的时间,只将组织再浸入4%多聚甲醛固定1～7d即可.二、包埋和切片:原方法:取5～10mm厚的组织流水冲洗24hr,放入装有25%明胶水溶液的培养皿中(加盖),于37℃温箱浸泡12～18hr进行明胶包埋,置于10%福尔马林中6hr或更长.改良后我们在切片前增加了将组织浸入10%或20%的蔗糖液中过夜这一步骤,次日再将组织骤冷,在恒冷箱中切片,并且将切片置于0.05M磷酸缓冲液,贴至挂过明胶的载玻片上行染色操作.这样我们省略了明胶包埋这一复杂程序,使实验单位易行.三、封固:原法是将切片浸入10%明胶水溶液与等量95%酒精中5min,切片摊于载玻片上,使载片倾倾斜倒出多余水,勿使切片完全干燥,再用95%酒精,浸泡吸水纸压平浸入95%酒精使明胶凝固、脱水、透明封片.改良后我们在染色后将片直接用梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,树胶封固,可省去明胶贴片、压片、凝固等步骤.

简介：石蜡切片进行免疫组织化学染色的优势在于能得到极为清晰美观的组织形态，其中修复待检测物质的抗原性（抗原修复）是一个关键步骤。抗原修复的效果直接影响到最终的染色结果。用pH值6．0的枸橼酸（柠檬酸）缓冲液进行微波修复或高压修复目前使用最广，是国内外绝大多数实验室的首选方法。该方法能有效修复大多数物质的抗原性，得到阳性强、结果美观的图像，重复性好，颇受广大实验工作者的欢迎。但经过长期实践和总结发现枸橼酸缓冲液用于抗原修复有一个比较隐蔽的缺陷：它能使某些膜受体的阳性分布区域向细胞质内扩大。比如NMDA-R2A是一种广泛分布于脑内的促离子型谷氨酸受体，免疫电镜显示它应当分布在神经细胞的突触后膜上。但使用枸橼酸缓冲液对大鼠中脑石蜡切片进行抗原修复后，阳性结果分布于神经细胞的整个胞质（图113）；这与NMI）A-R2A的实际分布有明显出入。由于细胞质阳性的图像比较美观，并且这种阳性的成因也有解释的余地，因此常常被实验人员误认为是正常的。我们尝试了其它一些修复方法，综合比较后认为乙二胺四乙酸（EDTA）溶液对于NMDA-R2A这类膜受体的检测是一种更好的抗原修复液，并对其使用方法和效果探讨如下。