简介:【摘 要】目的:本次研究多通道荧光探针的滚环扩增技术应用在结核分枝杆菌耐药基因的检测中的应用。方法:通过多通道荧光探针(HEX/FAM/ROX)对滚环扩增产物精准捕获与信号放大,实现对三种突变基因的单管多重检测。结果:通过应用多通道荧光探针的滚环扩增技术,同一反应体系中中katG315的响应范围为1.5 pmol/L至0.1 5nmol/L, rpoB531和rpsL43的响应范围为1.5pmol/L至60.0 pmol/L和1.5 pmol/L至25.0 pmol/L,特异度与灵敏度较高,可精确识别单碱基突变;模拟血清样本回收实验中,回收率95.3%-105.5%。结论:多通道荧光探针的滚环扩增技术检测具有较高的特异性,耗时短,灵敏度高的优势,临床应用价值显著。
简介:目的建立基于TaqMan探针三重荧光PCR检测沙门菌(salmonella,Sa)、肠炎沙门菌(salmonellaenteritidis,SE)和鼠伤寒沙门菌(salmonellatyphimurium,ST)的方法。方法根据沙门菌aceA基因、肠炎沙门菌特异序列(GenBank:AF370707.1)、鼠伤寒沙门菌的STM4599序列(GenBank:AERV01000023.1),分别设计引物和TaqMan探针,在探针的5′端分别标记FAM、VIC、cy5,建立基于TaqMan探针三重实时荧光PCR检测沙门菌的方法。结果29种不同血清型沙门菌均扩增出aceA基因,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的引物和探针分别特异性地扩增出15株肠炎沙门菌和11株鼠伤寒沙门菌,而其他血清型沙门菌和17株非沙门菌扩增结果阴性。aceA、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的三重荧光PCR扩增效率分别为89%、87%、90%,最低检测浓度分别达到280cfu/ml、260cfu/ml、300cfu/ml。结论本研究建立的方法特异性好、灵敏度高,可用于食品中沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的特异性检测。
简介:目的建立以TaqMan探针实时荧光PCR技术为基础的核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(Nucleotide-bindingoligomerizationdomain,LeucinerichRepeatandPyrindomaincontaining,NLRP3)基因单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism,SNP)检测方法。方法以20份健康人血液样本为对象,选择NLRP3基因的两个SNP位点(rs3806265和rs35829419),针对每个位点分别设计1对PCR引物和2条TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增,对SNP位点进行分型。用常规PCR和基因测序的方法对TaqMan探针实时荧光PCR分型的结果进行验证。结果用建立的TaqMan探针实时荧光PCR分型法对20份样本进行检测,其中rs3806265位点发现TT基因型3份,TC基因型8份,CC基因型9份;rs35829419位点发现CC基因型20份,无AC和AA基因型。分型结果与常规PCR及基因测序分型方法完全一致。结论基于TaqMan探针技术的实时荧光PCR方法简单、快速,可实现对NLRP3基因位点的分型检测。
简介:目的评价线性探针法快速诊断耐药结核的应用价值。方法对99株结核分枝杆菌分离株采用GenoTypeMTBDRplus和MTBDRsl试剂盒进行利福平、异烟肼、氧氟沙星、卡那霉素、乙胺丁醇五种药物的耐药快速检测,与传统药物敏感性试验结果比较,评价其诊断试验的真实性。结果GenoTypeMTBDRplus检测利福平、异烟肼耐药的灵敏度和特异度分别为100%和50%、86.11%和47.06%。GenoTypeMTBDRsl检测氧氟沙星、卡那霉素、乙胺丁醇耐药的灵敏度分别为94.74%、62.50%、58.82%,特异度分别为92.59%、98.81%、91.67%。结论线性探针法GenoTypeMTBDRplus用于检测利福平耐药具有较高的灵敏度,GenoTypeMTBDRsl用于检测氧氟沙星耐药的灵敏度和特异度均较满意,可用于对疑似耐药患者进行早期快速检测。对异烟肼耐药的检测结果与其他报导差异较大,需要进一步验证后决定是否适合推广。卡那霉素和乙胺丁醇耐药机制不完全明确,线性探针的灵敏度较低,尚不适宜广泛应用于临床。
简介:摘要目的探讨自制探针在先天性耳前瘘管手术中的治疗效果。方法32例先天性耳前瘘管手术采用硬膜外麻醉导管制作的探针进行探通治疗。结果全部患者术后切口均获I期愈合,无创口裂开或感染,全部患者术后耳廓无变形,1例感染期手术3个月后复发,再次手术切除,总有效率96.88%。结论采用硬膜外麻醉导管制作的探针治疗先天性耳前瘘管是一种简便、安全、有效的治疗方法。
简介:摘要目的应用冲洗式泪道探针治疗新生儿泪囊炎的疗效。方法对120例新生儿泪囊炎应用冲洗时探针行泪道探
简介:摘要:本文旨在介绍荧光定量PCR技术,并详细说明了其使用前的准备工作、操作流程和注意事项,为广大动物实验爱好者提供参考。
简介:摘要:本文旨在介绍荧光定量PCR技术,并详细说明了其使用前的准备工作、操作流程和注意事项,为广大动物实验爱好者提供参考。
简介:摘要目的探讨成人呼吸道感染病毒的荧光检测方法在临床上的应用价值。方法对我院从2010年1月到2012年1月收治的400例成人呼吸道感染病毒患者为研究对象,采用荧光检测法将这些患者的痰作为标本进行七种病毒的检验。结果对这400例患者进行检测,发现其中有60例患者检测结果为阳性总的阳性率为15%。其中呼吸道合胞病毒最多,有28例患者检验出该病毒占患者总数的7.00%。其次是流感病毒A型,感染这一病毒的患者有26例占总数的6.50%。接下来依次是副流感病毒3型、副流感病毒1型、腺病毒、流感病毒B型和副流感病毒2型,分别为16、12、6、3、2例占患者总数的4.00%、3.00%、1.50%、0.75%以及0.50%。还有2例是混合感染,占总数的0.50%。对于感染患者的年龄进行分析发现,47-56患者病毒的检出率最高,而30-40岁之间的患者病毒的检出率最低。患有慢性阻塞性肺疾病、支气管扩张、肺炎、哮喘的这些患者均有病毒检测出,其中慢性阻塞性肺疾病病毒的检出率最高。结论成人呼吸道一旦遭受了感染,那么很可能会有病毒的存在。年龄的不同病毒检出的可能性也存在显著地差异,各个年龄段的患者都应该加强预防。慢性阻塞性肺疾病病毒的检出率最高,其中呼吸道合胞病毒最为普遍。