简介:摘要目的建立念珠菌血症小鼠模型,寻找辅助诊断念珠菌血症的差异多肽峰。方法SPF级ICR雄性小鼠170只,体质量27~30 g,根据随机数字表法将小鼠完全随机分为白色念珠菌感染组(n=80)、近平滑念珠菌感染组(n=80)和对照组(n=10),通过尾静脉注射的方法建立念珠菌血症小鼠模型。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测模型小鼠血清多肽谱,选择差异较为明显的多肽峰建立诊断模型。结果比较白色念珠菌感染组和对照组共得到65个差异多肽峰,组合质荷比(m/z)为1 100.4、1 581.0、3 808.0这3个差异多肽峰建立诊断模型,敏感度为95.24%(40/42),特异度为90.63%(29/32),准确率为93.24%(69/74),ROC曲线下面积为0.972(95%CI:0.941~1.000);比较近平滑念珠菌感染组和对照组共得到73个差异多肽峰,组合质荷比(m/z)为1 433.2、1 148.5、4 093.5、4 522.2、8 140.9、8 234.6这6个差异多肽峰建立诊断模型,敏感度为95%(38/40),特异度为81.25%(26/32),准确率为88.89%(64/72),ROC曲线下面积为0.953(95%CI:0.903~1.000)。比较白色念珠菌感染组和近平滑念珠菌感染组,共得到78个差异多肽峰,组合质荷比(m/z)为2 736.9、8 091.5、8 153.7这3个差异多肽峰建立诊断模型,区分白色念珠菌感染和近平滑念珠菌感染的准确率为98.78%(81/82)。结论通过念珠菌血症小鼠模型筛选的差异多肽峰有利于寻找辅助念珠菌血症诊断的血清标志物,为临床早期诊断及合理用药提供了依据。
简介:摘要目的分析口腔念珠菌病患者唾液真菌培养中光滑念珠菌属检出状况、分离人群特征及常用抗真菌药物的耐药情况。方法分析2014至2018年北京大学口腔医院口腔念珠菌病患者唾液光滑念珠菌检出状况。采用科玛嘉念珠菌显色培养基及API 20C AUX酵母菌鉴定试剂盒进行真菌分离培养和鉴定。收集带菌量≥200 cfu/ml的光滑念珠菌60株,使用ATB FUNGUS 3真菌药敏试剂条进行体外药敏试验。结果2014至2018年共确诊口腔念珠菌病患者12 401例,光滑念珠菌构成比为3.44%(427/12 401)。光滑念珠菌感染阳性率随年龄升高而升高,70岁以上患者感染阳性率高于其他年龄段患者。从41~50岁年龄段开始,女性感染阳性率开始升高,并且在51~60岁及以后年龄段女性感染阳性率呈现逐年升高趋势。光滑念珠菌阳性的口腔念珠菌病患者除单纯真菌感染诊断外,伴有口腔扁平苔藓、干燥综合征和口干待查患者感染比例较高。5种抗真菌药物中,光滑念珠菌对氟康唑耐药率最高,为8.3%;伊曲康唑和伏立康唑非野生型均为6.7%;两性霉素B均为野生型。结论口腔念珠菌病患者光滑念珠菌感染率随年龄升高而升高,老年患者是易感人群。光滑念珠菌对唑类药物存在一定的耐药性,临床应根据药敏结果合理使用抗真菌药物。
简介:摘要目的探讨不同产膜能力白色念珠菌入侵后诱导人气道上皮细胞的免疫损伤机制。方法选择2019年6至12月宁夏医科大学总医院分离培养的25株白色念珠菌,质控菌株SC5314为标准菌株。建立白色念珠菌生物膜体外模型,利用结晶紫染色和酶标板法检测不同白色念珠菌的生物膜形成能力;采用酶标板法测定570 nm处的吸光度值(A570):A570≥0.5为强产膜菌(SBF),0.25<A570<0.5为中产膜菌(DRF),A570≤0.25为不产膜菌(WBF)。在体外分离培养并建立人气道上皮细胞的气液相培养模型,分为5组:空白对照组(n=20)、标准菌株组(n=20)、强产膜组(n=19)、不产膜组(n=17)、耐氟康唑组(n=18)。扫描电镜观察气液相培养上皮细胞的形态。采用免疫荧光检测气液相培养上皮细胞体外模型标志蛋白的表达。通过微孔板法检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)含量,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液中细胞内β-防御素(hBD2)、粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)等的分泌情况。结果强产膜菌株以菌丝相互交错生长,能看到极少数酵母细胞包裹于其中。扫描电镜观察气液相培养的上皮细胞菌丝能够主动入侵上皮细胞;纤毛乙酰化的微管蛋白和角蛋白的表达量明显减少,同时细胞增殖相关蛋白的表达也被下调。空白对照组、标准菌株组、强产膜组、不产膜组、耐氟康唑组细胞中LDH含量分别为(12.21±5.68)、(46.35±6.35)、(18.69±4.38)、(12.56±3.69)、(13.48±4.28)U/L,差异有统计学意义(P<0.001);与标准菌株组相比,强产膜组、不产膜组、耐氟康唑组细胞内LDH含量均降低(均P<0.01)。空白对照组、标准菌株组、强产膜组、不产膜组、耐氟康唑组细胞内hBD2的含量分别为(26.14±0.77)、(56.18±0.83)、(30.66±2.59)、(29.22±0.48)、(28.28±1.56)ng/L,差异有统计学意义(P<0.001);与空白对照组相比,只有标准菌株组的上皮细胞可诱导细胞内hBD2表达量增加(P<0.001)。不同组别间细胞内GM-CSF、G-CSF的表达量差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论强产膜白色念珠菌可通过下调细胞增殖相关蛋白的表达,抑制细胞的增殖,破坏上皮细胞的完整性,从而诱导细胞损伤。