简介：摘要目的探讨建立一种快速识别活体小鼠血管内外淋巴细胞的方法。方法C57BL/6J小鼠随机分为CD45-APCcy7抗体注射组(n＝6)、CD45-BV570抗体注射组(n＝3)和对照组(n＝3)。抗体注射组小鼠经内眦静脉丛注射抗小鼠CD45抗体(3 μg/只或5 μg/只)，对照组小鼠注射同等体积的磷酸缓冲盐液(phosphate buffer saline，PBS)，注射后2.5 min摘眼球取外周血，3 min时断颈处死小鼠，取淋巴结(lymph node, LN)、脾脏(spleen, SP)、骨髓(bone marrow, BM)、肝脏和肺脏与外周血一同制备单个核细胞悬液，每组细胞均进行CD4和CD8分子表面染色，流式细胞仪上机检测。结果流式细胞仪检测结果显示CD45-APCcy7抗体注射组小鼠给予3 μg/只和5 μg/只两个剂量后，外周血中CD4+和CD8+细胞95%以上均为CD45+细胞[CD4+细胞：3 μg/只和5 μg/只CD45+细胞百分率为(96.20±1.50)%比(98.77±1.88)%, t＝1.85，P>0.05；CD8+细胞：3 μg/只和5 μg/只CD45+细胞百分率为(99.27±0.75)%比(99.93±0.12)%，t＝1.52, P>0.05]，表明此两种剂量均可实现血管内淋巴细胞几乎全部活体、快速染色。在3 μg/只注射剂量下，使用同一克隆号不同荧光标记的抗CD45抗体检测时，外周血中95%以上CD4+和CD8+细胞均可被染色为CD45+。在CD45-APCcy7抗体注射组和CD45-BV570抗体注射组CD4+细胞中CD45+细胞百分率分别为(96.20±1.50) %和(99.43±0.98)%；而CD8+细胞中CD45+细胞百分率分别为(99.27±0.75)%和(99.90±0.17)%均高于对照组(t值分别为111.10，175.40，229.00，994.90，P值均<0.05)。淋巴器官和非淋巴器官染色结果表明，抗CD45抗体可清楚地区分CD45+和CD45-细胞群，两种不同标记的抗体对CD45+细胞染色的百分率分别为LN[(0.35±0.23)%比(0.61±0.13)%；t＝1.69, P>0.05]、SP[(1.07±0.28)%比(2.87±1.13)%；t＝2.85, P>0.05]、BM[(0.85±0.24)%比(1.68±0.73)%; t＝1.89, P>0.05]、肝脏[(15.53±5.20)%比(19.60±9.36)%; t＝0.66，P>0.05]和肺脏[(29.97±6.14)%比(41.03±21.78)%; t＝0.85, P>0.05]，各组织中统计学分析结果差异均无统计学意义。结论本实验建立了一种快速检测并区分血管内外淋巴细胞的方法，且可联合多种标记抗体一起检测，是一种高效、快速、准确的活体小鼠淋巴细胞检测手段。