简介：摘要目的通过研究脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）与单羧酸转运蛋白-1（monocarboxylate transporter 1, MCT1）表达的关系及对肺泡上皮细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation, EMT）的影响，探究LPS诱导的肺纤维化过程中肺泡上皮细胞EMT的潜在机制。方法① 24只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为对照组（Con1组）和脂多糖刺激组（LPS1组），每组12只。LPS1组小鼠连续3 d腹腔注射LPS 5 mg·kg−1·d−1，Con1组小鼠注射等体积生理盐水，造模7 d后取材。Western blot法和免疫荧光检测肺组织MCT1以及EMT相关标志蛋白[E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）]的表达情况，ELISA法检测血清中乳酸含量，马松（Masson）染色评估肺组织纤维化程度。②将MLE-12细胞按照随机数字表法分为4组（每组3个孔）：PBS对照组（Con2组）、乳酸组（Lac2组）、脂多糖组（LPS2组）及乳酸+脂多糖组（Lac+LPS2组），分别用PBS、10 mmol/L乳酸、1 mg/L LPS和10 mmol/L乳酸+1 mg/L LPS刺激48 h。使用Western blot法及免疫荧光检测各组细胞MCT1、E-cadherin、Vimentin水平，同时检测各组细胞上清液pH值。结果①与Con1组比较，LPS1组小鼠肺组织MCT1蛋白水平降低（P< 0.05），E-cadherin水平降低（P<0.05），Vimentin水平升高（P<0.05）；肺组织E-cadherin荧光强度降低，Vimentin荧光强度增强，MCT1荧光强度降低；肺组织出现纤维化表现；同时伴有血清乳酸含量升高（P<0.05）。②与Con2组比较，Lac2组MCT1蛋白水平明显升高（P<0.05），E-cadherin、Vimentin水平及pH值差异无统计学意义（P>0.05）；LPS2组与Lac+LPS2组MCT1蛋白水平明显降低（P<0.05），E-cadherin水平降低（P<0.05），Vimentin水平升高（P<0.05），pH值降低（P<0.05）。与Lac2组比较，Lac+LPS2组细胞MCT1蛋白水平和E-cadherin水平明显降低（P<0.05），Vimentin水平明显升高（P<0.05），pH值降低（P<0.05）。与Con2组比较，Lac2组MCT1荧光强度增强，E-cadherin、Vimentin荧光强度无明显变化；LPS2组与Lac+LPS2组MCT1和E-cadherin荧光强度减弱，Vimentin荧光强度增强。与Lac2组比较，Lac+LPS2组MCT1、E-cadherin荧光强度明显减弱，Vimentin荧光强度明显增强。结论在LPS诱导的肺纤维化过程中，LPS可抑制小鼠肺泡上皮细胞MCT1的表达，导致乳酸清除障碍和细胞外液酸化，从而促进EMT和组织纤维化过程。

简介：摘要目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导肺成纤维细胞及肺组织有氧糖酵解关键酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2, 6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3, PFKFB3）表达及其与有氧糖酵解的关系，探讨在LPS诱导肺纤维化过程中肺成纤维细胞和肺组织有氧糖酵解的潜在机制。方法将人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞系采用随机数字表法分为PBS对照组（PBS组）和LPS组（每组3孔），Western blot检测LPS刺激细胞6h后PFKFB3表达情况，同时免疫荧光显示PFKFB3在细胞内的定位情况；于LPS刺激后48 h采用海马细胞能量代谢仪检测细胞耗氧率（oxygen consumption rate, OCR）和产酸率（extracellular acidification rate, ECAR ），并采用比色法检测有氧糖酵解产物乳酸产生情况，同时Western blot检测LPS刺激48 h后Ⅰ型胶原蛋白合成情况。将24只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组（C组）、LPS组（L组），每组12只，L组、C组连续5d分别腹腔注射5 mg/kg LPS、等容量生理盐水；每组各6只于造模后第7天无痛处死小鼠，取血浆和肺组织，Western blot和免疫荧光检测各组肺组织中PFKFB3表达情况，比色法检测各组小鼠血浆中乳酸的含量；剩余小鼠于造模后第28天取肺组织，一侧肺通过Western blot检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白合成情况，另一侧肺做石蜡切片进行病理学检测。结果与PBS组比较，LPS刺激细胞6h后PFKFB3表达明显升高（P<0.05）；LPS刺激细胞48 h后，与PBS组比较，LPS组细胞耗氧率降低、产酸率增加，代谢产物乳酸含量明显升高（P<0.05），同时细胞Ⅰ型胶原蛋白合成显著增加（P<0.05）。与C组比较，L组小鼠腹腔注射LPS 7 d后肺组织中PFKFB3表达明显升高（P<0.05），血浆乳酸含量明显升高（P<0.05）；LPS注射28 d后，L组小鼠Ⅰ型胶原蛋白表达明显升高（P<0.05），肺组织出现明显纤维化。结论在LPS诱导的肺纤维化过程中，LPS可诱导肺成纤维细胞和肺组织中PFKFB3蛋白表达，该过程与其有氧糖酵解过程相关，PFKFB3的表达上调可能是LPS诱导肺成纤维细胞和肺组织有氧糖酵解和肺纤维化的关键环节。

简介：摘要目的探讨机械通气促进肺成纤维细胞活化及肺纤维化的机制，明确乳酸-转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）途径在该过程中的作用。方法①将C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术组（Sham组）和机械通气组（MV组），每组12只，其中Sham组仅行麻醉插管处理并保持自主呼吸，MV组采用20 ml/kg潮气量和70次/min通气频率行单次2 h机械通气，观察7 d后取材。采用H-E染色、Masson染色观察肺组织的损伤程度和纤维化程度，采用Western blot法检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白α1链（collagen type Ⅰ alpha 1 chain, COL1A1）、α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）和TGF-β1的蛋白表达情况，采用比色法检测小鼠肺泡灌洗液（bronchial alveolar lavage fluid, BALF）和血清的乳酸浓度。②将人胚肺成纤维细胞MRC-5采用随机数字表法分为4组（每组3个孔）：PBS对照组（Con组）、1 mmol/L乳酸组（Lac1组）、10 mmol/L乳酸组（Lac10组）和20 mmol/L乳酸组（Lac20组），于乳酸刺激MRC-5细胞24 h后采用ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1含量，同时采用细胞免疫荧光观察α-SMA的表达情况；于乳酸刺激MRC-5细胞72 h后采用Western blot法检测不同分组细胞COL1A1和α-SMA的表达情况，并通过ELISA法检测细胞培养上清液Ⅰ型前胶原羧基肽（procollagen type I carboxyl peptide, PICP）的含量变化。③另取MRC-5细胞采用随机数字表法分为3组（每组3个孔）：PBS对照组（Con组）、20 mmol/L乳酸组（Lac20组）和20 mmol/L乳酸+TGF-β1受体抑制剂（SB431542）组（Lac20+SB组），处理24 h后采用Western blot法检测不同分组细胞COL1A1和α-SMA的表达情况。结果①与Sham组比较，MV组小鼠肺泡间隔增厚、胶原蛋白沉积、肺纤维化程度加重，伴有COL1A1、α-SMA和TGF-β1表达水平升高（P<0.05），血清和BALF乳酸浓度升高（P<0.05）。②与Con组比较，Lac10组和Lac20组细胞培养上清液中TGF-β1、PICP含量升高（P<0.05），细胞中COL1A1和α-SMA表达水平升高（P<0.05），免疫荧光观察到α-SMA在细胞内表达增多（P>0.05）。③与Lac20组比较，Lac20+SB组细胞COL1A1和α-SMA表达水平降低（P<0.05）。结论机械通气可以通过乳酸-TGF-β1途径活化肺成纤维细胞，引起胶原蛋白分泌，促进机械通气相关性肺纤维化进程。