简介：摘要目的研究神经病理性疼痛（NP）大鼠模型中是否存在神经细胞的铁死亡，探究O3治疗NP的机制。方法选取60只雄性SD大鼠，随机平均分为3组：神经病理性疼痛模型组（NP组）、假手术组（Sham组）及臭氧组（O3组）。NP、O3组采用坐骨神经结扎术构建神经病理性疼痛模型；Sham组行假手术。O3组术后，在损伤处局部注射15 μl O3（40 μg/ml），NP和Sham注射等量空气，均为术后1次/d。于术前1 d（T0）及术后1、3、7、14 d（T1～T4）测定模型大鼠的机械缩足反应阈值（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）。取大鼠脊髓节段，采用Western Blot检测T1～T4时的谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和长链脂酰辅酶A合成酶4（ACSL4）的表达水平，采用免疫荧光技术检测T4时脊髓背角内NeuN+神经元细胞数，采用透射电镜分析T4时脊髓背角内铁死亡特异性改变，采用铁死亡试剂盒检测T1~T4时脊髓背角内铁沉积情况。结果与Sham组相比，NP组和O3组大鼠：T2~T4时MWT降低，TWL缩短；T4时脊髓背角NeuN+神经元数量减少；T4时神经细胞线粒体出现铁死亡特异性改变；T2~T4时神经组织内铁含量增高。与Sham组相比，NP组大鼠GPX4水平降低，ACSL4水平升高。与NP组比较，O3组大鼠：T2~T4时MWT升高，TWL延长；T2~T4时GPX4水平升高，ACSL4水平降低；T4时脊髓背角NeuN+神经元细胞数量增加；T4时神经细胞线粒体萎缩程度改善；T2~T4时神经组织内铁含量降低。上述结果均有统计学意义（均P<0.05）。结论O3可能通过抑制铁死亡的形式，治疗神经病理性疼痛。

简介：摘要目的评价铁死亡在脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞线粒体损伤模型中的作用。方法常规培养小鼠RAW264.7细胞，按随机数字表法将培养的细胞分为4组（n=6）：对照组（Con组）、脂多糖组（LPS组）、脂多糖+铁死亡激动剂Erastin组（LPS+E组）和脂多糖+铁死亡抑素Ferrostatin-1组（LPS+F组）。LPS组给予终浓度为1 μg/ml的LPS进行孵育6 h；LPS+E组给予终浓度为1 μg/ml的LPS和浓度为1 mmol/L的含Erastin培养液进行孵育6 h；LPS+F组给予终浓度为1 μg/ml的LPS和浓度为1 mmol/L的含Ferrostatin-1培养液进行孵育6 h。采用Clark氧电极法及JC-1法分别测定线粒体呼吸控制率（RCR）及线粒体膜电位（MMP），透射电镜下观察细胞内线粒体改变情况，采用Western blot法测定细胞内铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、长链酯酰辅酶A合成酶4（ACSL4）的表达，采用荧光探针法测定活性氧族（ROS）和Fe2+含量，采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）含量。结果与Con组比较，LPS组RCR和MMP均降低（P均<0.05），GPX4表达下调（P<0.05），ACSL4表达上调（P<0.05）；线粒体出现线粒体膜增厚、线粒体皱缩、线粒体嵴消失等铁死亡表现，细胞内Fe2+含量升高（P<0.05），ROS含量升高（P<0.05），MDA含量升高（P<0.05）。与LPS组比较，LPS+E组RCR和MMP降低（P<0.05），GPX4表达下调（P<0.05），ACSL4表达上调（P<0.05），Fe2+含量、ROS含量和MDA含量均升高（P均<0.05）。LPS+F组RCR和MMP升高（P<0.05），GPX4表达上调（P<0.05），ACSL4表达下调（P<0.05），出现铁死亡变化的线粒体增加（P<0.05），Fe2+含量、ROS含量和MDA含量均降低（P均<0.05）。结论铁死亡增强LPS致小鼠巨噬细胞线粒体损伤。

简介：摘要目的评价缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在氢抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞炎症反应中的作用。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞，按照随机数字表法分为4组(n＝24)：对照组(C组)、LPS组(L组)、富氢液＋LPS组(H＋L组)和富氢液＋LPS ＋HIF-1α抑制剂二甲氧基雌二醇(2ME2)组(H＋L＋M组)。L组加入LPS 1 μg/ml孵育6 h；L＋H组先加LPS，换培养基为0.6 mmol/L富氢液共孵育6 h；H＋L＋M组先给予2ME2 10 μmol/L孵育30 min，然后加入LPS和富氢液孵育6 h。采用Western blot法测定HIF-1α、Beclin-l、BNIP3和LC3的表达；采用ELISA法检测上清液TNF-α、IL-6和IL-1β的浓度，采用透视电镜观察细胞自噬小体数量。结果与C组比较，L组上清液TNF-α、IL-6和IL-1β浓度升高，巨噬细胞HIF-1α、Beclinl和BNIP3表达上调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，自噬小体数量增多(P<0.05)；与L组比较，H＋L组上清液TNF-α、IL-6和IL-1β浓度降低，巨噬细胞HIF-1α、Beclin-l、BNIP3表达上调、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增高，自噬小体数量增多(P<0.05)；与H＋L组比较，H＋L＋M组上清液TNF-α、IL-6和IL-1β的浓度降低，巨噬细胞HIF-1α、Beclin-l和BNIP3表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低，自噬小体数量减少(P<0.05)。结论HIF-1α介导细胞自噬激活参与了氢抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞炎症反应的过程。

简介：[摘要] 目的：分析氯吡格雷和瑞舒伐他汀治疗脑梗死的疗效及对神经功能的改善观察。方法：治疗方法比较，对比其临床应用价值，取样

简介：摘要目的评价富氢液对人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤时丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子-E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法体外培养的人肾小管上皮细胞系，以1.5×104个/ml的密度接种于96孔培养板(200 μl/孔)或以2×105个/ml密度接种于6孔培养板(2 ml/孔)，采用随机数字表法分为5组(n＝30)：对照组(C组)置于常氧恒温培养箱(37 ℃、5%CO2-21%O2-74%N2)中培养28 h；富氢液组(H组)加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基，置于常氧恒温培养箱中孵育28 h；缺氧复氧组(H/R组)置于厌氧恒温培养箱(37 ℃、5%CO2-1%O2-94 %N2)中缺氧24 h，取出后置于常氧恒温培养箱复氧4 h；缺氧复氧+富氢液组(H/R+ H组)置于厌氧恒温培养箱中缺氧24 h，取出后加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基，置于常氧恒温培养箱中复氧4 h；缺氧复氧+富氢液+Akt抑制剂Uprosertib组(H/R+ H+U组)加入终浓度为10 μmol/L的Uprosertib孵育1 h，其余处理同H/R+ H组。各组细胞处理结束后，采用MTT法测定细胞活力，流式细胞术测定细胞凋亡率，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，硫代巴比妥酸法测定MDA含量，Western blot法检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、总Nrf2、核Nrf2和活化的caspase-3表达，RT-PCR法检测Nrf2 mRNA表达。结果与C组比较，H/R组和H/R+H组细胞活力和SOD活性下降，细胞凋亡率和MDA含量升高，p-Akt、核Nrf2、总Nrf2、活化的caspase-3和Nrf2 mRNA表达上调(P<0.05)；与H/R组比较，H/R+H组细胞活力和SOD活性升高，细胞凋亡率和MDA含量降低，p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达上调，活化的caspase-3表达下调(P<0.05)；与H/R+H组比较，H/R+ H+U组细胞活力和SOD活性下降，细胞凋亡率和MDA含量升高，p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达下调，活化的caspase-3表达上调(P<0.05)。结论富氢液减轻人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤的机制与促进Akt/Nrf2信号通路激活，降低氧化应激水平，抑制细胞凋亡有关。