简介：摘要目的构建并拯救增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)标记的EGFP-EV-A71重组病毒。方法利用重叠PCR技术，以pMD19T-SDLY107全长质粒为模板，将2A蛋白酶识别序列加入到结构蛋白VP4的5′端；以pEGFP-N1质粒作为模板，扩增获得EGFP目的片段，将其插入到上述重组质粒中，得到重组质粒pMD19T-107-EGFP。经酶切和体外转录后，转染横纹肌细胞肉瘤(RD)，拯救获得重组病毒EGFP-EV-A71。采用Karber法计算细胞培养半数感染量(CCID50)以测定病毒滴度。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同时间点的病毒复制水平，并绘制病毒复制曲线，比较重组病毒与母本病毒的复制力有无差异。乳酸脱氢酶(LDH)和细胞增殖(CCK-8)实验分别测定被感染细胞的细胞损伤率和存活率。结果包含EGFP的重组EV-A71感染性cDNA克隆被成功构建；转染RD细胞后，出现典型的细胞病变并且表达出较强的绿色荧光；重组病毒与母本病毒具有相似的复制动力学特征和致细胞病变效应。结论成功拯救了EGFP标记的重组病毒EGFP-EV-A71。

简介：摘要目的研究中国地区发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)分离株已上传至GenBank序列中M片段基本特征及该病毒的遗传和进化规律。方法从GenBank中获取2020年6月25日前分离于中国的SFTSV毒株M片段全序，利用BioEdit软件进行多序列比对，MEGA5.0软件构建系统发生树，比较不同型别及不同来源SFTSV核苷酸和氨基酸的同源性。结果在GenBank数据库收集到203株中国地区发热伴血小板减少综合征病毒分离株的M片段全序，其中分离于人的毒株185株，占总毒株的91.1%，分离于蜱的毒株共11株，占总毒株的5.4%，分离于其他动物如羊、鼠、刺猬的共5株，占总毒株的3.5%。系统发生树分析显示中国地区流行优势株为C2基因亚型，占总毒株的42.4%，核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为96.4%～100.0%和94 .5%～100.0%。人源毒株与动物分离株同源性极高，核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为92.5%～100.0%和92.0%～100.0%。结论对分离自中国的发热伴血小板减少综合征病毒分离株优势株为C2型，且存在着多种型别的共循环。SFTSV可能有从C型向J型进行适应性转换的可能。