简介：目的克隆人HMGBlA—box的cDNA，构建高效稳定的大肠杆菌（E．coli）表达菌株并对其诱导表达纯化．同时探讨其对间充质干细胞（Mesenchymalstemcells，MSC）的促分化作用。方法根据优选合成的HMGBl基因序列设计引物，PCR扩增目的基因片段，插入克隆载体pGEM—T并进行序列测定。重组克隆载体经BamHI和xhoI酶切．琼脂糖凝胶电泳分离目的基冈，插入含His标签的表达载体pET24a。将构建的质粒转染BL21大肠杆菌，经IPTG诱导后．SDS—PAGE观察表达量。HIS—link层析柱纯化重组人HMGBlA—box．蛋白印迹鉴定重组蛋白。将重组蛋白加入hBMSC培养体系中培养一周后，碱性磷酸酶染色检测其促MSC成骨分化作用。结果经RT—PCR扩增得到了261bD的DNA片段，经测序分析．与GenBank中报道的已知序列完全一致，构建了含融合蛋白的重组表达质粒。经诱导后细菌高表达A—boX，表达量为总蛋白的45％。经层析柱纯化后，蛋白印迹证实目的蛋白为高纯度的A—box。将A—box加入MSC培养体系中培养后，细胞活性无明显改变．但细胞碱性磷酸酶表达明显增高。结论成功构建了重组人HMGBlA—Box的表达载体．纯化的重组蛋白能有效促进MSC向成骨细胞分化。
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