简介：

简介：摘要目的建立Grx2基因敲除(KO)和基因敲入(KI)小鼠模型，探讨Grx2基因在白内障发病机制中的作用。方法选取黑色C57BL/6J鼠各5只，利用CRISPR/Cas9系统分别制作Grx2 KO小鼠模型和Grx2 KI小鼠模型，后代小鼠剪尾测序后根据基因型纳入对应分型，观察并比较各基因型小鼠一般情况和晶状体混浊情况。处死各型小鼠，采用苏木精－伊红染色法观察小鼠晶状体病理学改变；采用ELISA法测定小鼠晶状体活性氧簇(ROS)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量；采用Western blot法测定小鼠晶状体中Grx2、谷胱甘肽(GSH)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、二硫化谷胱甘肽(GSSG)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量。结果剪尾巢式PCR及基因测序证实获得Grx2 KO和Grx2 KI纯合子及杂合子小鼠后代。与同龄野生型(WT)小鼠相比，Grx2 KO纯合子小鼠晶状体混浊提前，而Grx2 KI纯合子小鼠晶状体一直维持透明。苏木精－伊红染色结果显示，5月龄Grx2 KO小鼠晶状体纤维出现大量缝隙和空泡。5月龄Grx2 KO小鼠晶状体8-OHdG含量为(3.886±0.326)ng/ml，高于WT小鼠的(3.531±0.250)ng/ml，差异有统计学意义(t＝2.711，P＝0.033)；Grx2 KO小鼠晶状体ROS荧光强度为1 594±132，高于WT小鼠的1 157±123，差异有统计学意义(t＝3.384，P＝0.028)。Western blot结果显示，5月龄Grx2 KO小鼠晶状体Grx2、GSH和Bcl-2相对表达量分别为0.23±0.01、0.70±0.06和0.32±0.03，较WT小鼠的0.52±0.02、1.04±0.08和0.49±0.04降低，差异均有统计学意义(t＝2.815，P＝0.020；t＝2.457，P＝0.033；t＝2.279，P＝0.041)。结论本实验成功制作Grx2 KO和Grx2 KI小鼠模型，Grx2 KO小鼠年龄相关性白内障的发生和发展加速。