简介：摘要目的评估三氯甲烷抽提冻融细胞沉淀内腺病毒颗粒的效果，建立一种提高氯化铯垫层超速离心纯化腺病毒产量的方法。方法收集感染腺病毒的HEK293细胞，反复冻融3次,离心后分别收获细胞冻融后上清及细胞残渣，使用三氯甲烷抽提细胞残渣内病毒颗粒，通过氯化铯密度梯度超速离心法纯化腺病毒。通过透射电子显微镜技术评价三氯甲烷抽提腺病毒的效果，通过分光光度计法及测定病毒感染滴度分析获得纯化腺病毒产量及活性。结果三氯甲烷可促进冻融细胞残渣内病毒颗粒释放，增加约34%病毒产量，且三氯甲烷抽提获得的腺病毒形态完整、活性良好。结论建立了一种通过三氯甲烷抽提细胞残渣增加腺病毒超速离心纯化产量的方法，为提高腺病毒纯化效率提供参考，以期满足科研需求。

简介：摘要目的建立并优化人冠状病毒NL63参考株(HCoV-NL63-NC_005831)的体外富集方法。方法以恒河猴肾细胞系(LLC-MK2)培养HCoV-NL63，以离心力135 000×g、分别离心病毒培养上清4 h、6 h、8 h、10 h和12 h以富集病毒，并以商品化PEG沉淀试剂盒富集方法作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、半数组织培养感染剂量(TCID50)和空斑实验对原始病毒液、富集病毒液分别进行病毒核酸和病毒生物活性定量检测，评价病毒富集效果；通过透射电镜负染观测病毒富集前后的形态。结果经层超速离心法及经PEG沉淀法分别进行体积100∶1富集处理，两种方法获得的富集病毒液相较于原液的病毒核酸浓度及活病毒浓度均有提高(P<0.001)。超速离心方法富集前后，电镜下观察到的病毒颗粒呈正常的负染形态；4 h、6 h、8 h、10 h和12 h超速离心后活病毒浓度平均分别是原病毒液的(7.35±1.62)倍、(13.98±1.71)倍、(36.36±10.41)倍、(48.16±9.38)倍、(54.26±7.02)倍，PEG沉淀后活病毒浓度是原病毒液的(3.39±0.16)倍，经超速离心法获得的富集病毒液的核酸浓度及活病毒浓度显著高于PEG沉淀法(P<0.05)；8 h、10 h、12 h超速离心后病毒浓度显著高于4 h和6 h(P<0.05)，但8 h、10 h、12 h之间病毒含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论超速离心法相较于商品化的PEG沉淀法能更有效富集HCoV-NL63病毒；离心力为135 000×g时，选择8 h的超离时间可获得较优的体外富集效果。

简介：摘要目的优化基于微波辅助的快速超薄切片染色的关键参数，建立一种快速超薄切片染色方法。方法使用微波组织处理仪以不同功率及染色时间分别用乙酸双氧铀(uranium acetate，UA)和枸橼酸铅(lead citrate，LC)对细胞超薄切片进行染色，通过透射电子显微镜观察并拍照细胞超微结构，评价两种染色剂的最佳染色条件，组合UA和LC最佳微波染色条件，获得最佳UA和LC双染色参数。用腺病毒、肠道病毒71型、疱疹病毒和流感病毒感染的细胞样本验证超薄切片快速染色效果。结果微波组织处理仪优选微波辅助超薄切片染色条件分别为功率200 W、UA染色30 s、LC染色20 s；或者功率300 W、UA染色30 s、LC染色30 s。LC浓度1∶6稀释仍可获得满意的染色效果。参数可推广至家用微波炉应用，最佳染色条件为功率320 W，UA染色30 s、LC染色30 s。结论获得了微波辅助的超薄切片染色最佳参数，可应用于细胞、病毒超薄切片的快速染色。