简介:摘要目的探究前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)在幽门螺杆菌(H.pylori)感染导致炎症反应中的作用机制。方法收集2020年5月1日至2021年1月31日初次就诊于十堰市太和医院消化内科的60例胃炎患者(H.pylori阳性和阴性患者各30例)与30例健康体检者,检测其血清PCSK9水平。选取H.pylori标准菌株、4种H.pylori临床分离菌株、正常胃上皮细胞系GES-1与THP-1细胞经诱导形成的巨噬细胞。将H.pylori菌株与胃上皮细胞系GES-1共培养以制备不同上清液培养基,设立磷酸盐缓冲液空培养基即阴性对照培养基(阴性对照组)、H.pylori与GES-1细胞共培养上清液培养基(H.pylori感染GES-1组)、正常GES-1细胞上清液培养基(H.pylori未感染GES-1组)、H.pylori与GES-1细胞共培养上清液+PCSK9中和抗体培养基(抗PCSK9组)、H.pylori与GES-1细胞共培养上清液+人免疫球蛋白G2培养基(同型对照组)。采用Transwell迁移实验、实时荧光定量聚合酶链反应、平板集落形成实验、H.pylori吞噬溶酶体共定位实验等比较H.pylori感染GES-1组、H.pylori未感染GES-1组和阴性对照组,以及抗PCSK9组和同型对照组的巨噬细胞迁移数、CC趋化因子受体(CCR2)mRNA相对表达水平、白细胞介素(IL)-6和细胞坏死因子(TNF)-α释放水平、CD8+ T细胞胞膜磷酸化水平、巨噬细胞菌落数,分析PCSK9对H.pylori感染导致炎症反应的调控机制。统计学方法采用独立样本t检验。结果H.pylori阳性胃炎患者的血清PCSK9水平高于H.pylori阴性胃炎患者和健康体检者[(384.00±57.57) μg/L比(208.80±48.89)、(176.10±47.14) μg/L],差异均有统计学意义(t=12.71、15.31,均P<0.001)。与阴性对照培养基相比,H.pylori标准菌株和4种分离菌株均可诱导正常胃上皮细胞系GES-1分泌PCSK9[(1 267.00±287.50] g/L比(2 717.00±199.20)、(4 858.00±302.40)、(3 167.00±334.20)、(6 075.00±597.30)、(4 283.00±331.20) g/L],差异均有统计学意义(t=10.15、21.09、10.56、17.77、16.85,均P<0.001)。H.pylori感染GES-1组的巨噬细胞迁移数、巨噬细胞CCR2 mRNA相对表达水平、IL-6水平、TNF-α水平和巨噬细胞菌落数均高于H.pylori未感染GES-1组和阴性对照组[132.20±5.67比84.83±4.62、39.83±4.12,8.66±0.94比6.52±0.47、1.00±0.09,(281.00±8.56) ng/L比(115.00±7.72)、(64.00±5.44) ng/L,(619.80±18.47) ng/L比(373.30±12.85)、(225.70±6.44) ng/L,(357.00±16.31)菌落形成单位(CFU)比(134.80±8.64)、(74.17±9.68) CFU],差异均有统计学意义(t=15.85、32.27,4.96、19.79,35.28、52.43,26.84、49.37,29.49、36.53;均P<0.001)。H.pylori感染GES-1组的H.pylori吞噬溶酶体共定位百分比,以及CD8+ T细胞胞膜CD3ζTyr142、杀伤分子颗粒酶B和穿孔素表达水平均低于H.pylori未感染组和阴性对照组[(15.33±1.86)%比(34.50±3.72)%、(65.67±3.56)%,464.20±120.80比1 924.00±262.10、2 390.00±484.10,(6.41±0.42)%比(17.37±0.73)%、(26.60±1.57)%,(6.84±1.37)%比(14.53±0.48)%、(26.22±1.21)%],差异均有统计学意义(t=11.27、30.70,12.39、9.45,30.50、31.90,25.96、13.00;均P<0.001)。抗PCSK9组的巨噬细胞迁移数、CCR2 mRNA相对表达水平、IL-6水平、TNF-α水平和巨噬细胞内菌落数均低于同型对照组[72.50±4.97比128.30±6.74、0.82±0.06比1.00±0.08、(85.50±4.37) ng/L比(277.70±8.98) ng/L、(291.80±13.69) ng/L比(615.30±12.65) ng/L、(111.50±10.21) CFU比(346.20±18.04) CFU],差异均有统计学意义(t=16.33、4.40、47.13、42.50、27.73,均P<0.001)。抗PCSK9组的H.pylori吞噬溶酶体共定位百分比,以及CD3ζTyr142、杀伤分子颗粒酶B和穿孔素的表达水平均高于同型对照组[(51.05±3.03)%比(16.71±1.91)%、2 948.00±384.00比1 156.00±178.60、(53.88±3.86)%比(5.88±0.93)%、(32.80±2.07)%比(6.83±0.54)%],差异均有统计学意义(t=23.49、10.36、29.60、29.76,均P<0.001)。结论H.pylori通过诱导胃上皮细胞释放PCSK9抑制CD8+T活化和细胞毒作用,还可招募巨噬细胞,激活核因子κB信号轴上调巨噬细胞炎症因子释放水平,抑制巨噬细胞的吞噬杀伤作用,调控炎症反应。